青天葵叶片总RNA提取方法的比较研究

采用RNeasy Plant Mini Kit法、RNAiso Plus法、RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue法、CTAB法和SDS法,并结合4种抽提试剂组合,分别提取青天葵叶片总RNA.通过琼脂糖凝胶电泳、紫外检测及RT-PCR反应对提取效果进行了比较分析.结果表明:除RNAiso Plus法外,其它方法提取的总RNA均有一定程度的DNA污染.RNAiso Plus法组③(1/5体积KAC+4/5体积PCI)完整性最好,SDS法组④(1/5体积NaCl+ 4/5体积PCI)浓度最高,为372.4 ng/μL.5种方法共20个处理组获得的RNA反转录后均能扩增出18S rRNA基因片段.该研究建立起了适用于青天葵叶片的总RNA提取方法,为青天葵的基因克隆、表达及转录组分析奠定了技术基础.     

竹柳皮总黄酮纯化工艺及抗氧化活性

以竹柳皮为试材,采用紫外分光光度法,以总黄酮吸附率和解吸率为考察指标,考察9种不同型号大孔树脂对竹柳皮总黄酮吸附-解吸性能,筛选出最佳大孔树脂型号,通过对工艺各参数优化,确定最佳纯化工艺,并测定竹柳皮纯化前后抗氧化活性。结果表明:D101型大孔树脂对竹柳皮中总黄酮有较好的吸附和解吸效果,最佳纯化工艺为60%乙醇提取2次,上柱液浓度为1.0 mg·m L-1,径高比为1∶15,上样速度为1.0 BV·h-1,上样体积为5 BV,洗脱溶剂为60%乙醇,洗脱速度为1.0 BV·h-1,收集0.8~2.2 BV洗脱范围内洗脱液,纯化后总黄酮含量可达64.94%,总黄酮收率高达98.34%。纯化后总黄酮的DPPH自由基清除活性、还原力分别约是纯化前粗提物的3倍和2倍。D101型大孔树脂适合纯化竹柳皮中的总黄酮,且纯化后的竹柳皮总黄酮具有更好的抗氧化活性。该试验可为竹柳皮的深入开发、产业附加值的提高提供参考依据。     

车桑子种子总黄酮提取工艺及抗氧化活性研究

以车桑子种子为试材,采用超声波辅助法提取总黄酮,在单因素试验的基础上,以乙醇浓度、液料比、超声时间和提取次数为影响因素,通过响应曲面法优化车桑子种子总黄酮提取工艺并考察其体外抗氧化活性,旨在为车桑子植物资源的开发利用提供参考依据.结果表明:车桑子种子总黄酮提取最佳条件为乙醇浓度40％、液料比15:1 mL·g-1、超声提取50 min、超声提取2次,车桑子种子黄酮提取物对DPPH自由基和ABTS自由基具有较强清除能力且对Fe3+也具有较强的还原能力.     

南药青天葵转录组SSR位点信息分析

以青天葵全转录组测序获得的142 220条unigene为试材,采用MicroSAtellite(MISA)软件分析青天葵简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)的分布频率和重复基元的类型等特征,利用Primer 5.0对符合鉴定要求的SSR基元进行引物设计,并通过SSRFinder校验SSR引物,以期为青天葵遗传多样性分析、分子标记辅助育种、遗传图谱绘制等种质资源研究提供参考依据。结果表明:在青天葵转录组共检测到分布在5 223条unigene上的5 684个SSR位点,SSR发生频率为3.67%,分布密度为1/13kb。二核苷酸重复为青天葵SSR主要基元类型,其中AG/CT和AT/AT基序出现频率最高,占SSR总数的52.9%。设计筛选得到2 486条SSR引物。青天葵转录组SSR位点出现频率高、类型丰富、多态性潜能较高。     

葛藤花总黄酮提取及抗氧化活性研究

以长白山区野生葛藤花为原料,利用超声波辅助提取方法,在单因素试验基础上,以响应面法优化野生葛藤花总黄酮提取工艺,并考察其清除·OH和DPPH·的能力。结果表明:葛藤花总黄酮最佳工艺条件为提取时间24.30min,提取温度70℃、乙醇体积分数为60%,在此提取条件下总黄酮的实际提取率可达7.608mg/g。葛藤花总黄酮对DPPH·自由基和·OH自由基的清除能力均强于一定浓度的维生素C,说明其具有开发抗氧化剂的前景。     

野生水芹总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性

以长白山区野生水芹为试材,在单因素试验的基础上,通过响应面法优化超声波提取野生水芹总黄酮工艺,并对其抗氧化活性进行考察。结果表明:最佳工艺条件为提取温度70℃、提取功率60W、提取时间9.19min,在此条件下,水芹总黄酮提取率为2.9668mg/g,验证试验得出水芹总黄酮提取率为2.9650mg/g。水芹总黄酮对羟自由基具有较强的清除能力,能很好抑制油脂氧化。利用响应面分析法可优化水芹总黄酮提取工艺,得到理论最佳提取条件,验证结果表明该方法科学、高效。     

岭南道地药材青天葵的组织培养与植株再生

以青天葵新鲜球茎为试材,对离体条件下青天葵的愈伤组织诱导及其植株再生进行研究。结果表明:0.1%升汞溶液处理青天葵球茎10min、玻璃培养皿有利于青天葵愈伤组织的诱导;青天葵走茎及愈伤组织在MS+1.0mg/L 6-BA培养基中培养可得到大量丛生芽及愈伤组织,多次继代培养可得到完整植株;将青天葵走茎接种于含有0.1%活性炭的MS培养基中可获得大量组培球茎。     

复序橐吾乙醇提取物的抗氧化及抑菌活性研究

对长白山野生复序橐吾的乙醇提取物进行了抗氧化及抑菌活性研究。结果表明:复序橐吾乙醇提取物具有较明显的清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基作用,清除率与浓度之间存在着量效关系;复序橐吾乙醇提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑菌活性,对产气杆菌没有抑制作用。     

芳香新塔花总黄酮抗氧化活性研究

以芳香新塔花为试材,采用Al Cl3比色法测定芳香新塔花总黄酮含量,并通过DPPH自由基(DPPH·)法、羟基自由基(·OH)法和测定还原能力的方法评价其抗氧化能力。结果表明:芦丁在0.009 6~0.033 6 mg·m L-1范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为99.78%(RSD为1.30%),芳香新塔花中总黄酮含量为40 mg·g-1;芳香新塔花总黄酮对DPPH·、·OH的清除作用及其还原力在同等条件下与维生素C相比较弱,且在试验浓度范围内抗氧化能力和浓度存在良好的量效关系,可见芳香新塔花总黄酮具有良好的体外抗氧化活性。     

分蘖洋葱鳞茎总黄酮提取工艺及抗氧化活性

以分蘖洋葱‘M-3’鳞茎为试材,用超声波辅助提取黄酮类化合物,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法优化分蘖洋葱总黄酮提取工艺,用DPPH法对总黄酮化合物抗氧化活性进行评价。结果表明:最佳提取工艺参数为料液比1∶45 g·mL^-1、乙醇体积分数60%、提取时间40 min、提取温度48℃、超声波功率310 W。在该条件下,分蘖洋葱总黄酮的提取率为3.584%,与模型预测值3.622%相近。分蘖洋葱总黄酮提取物对DPPH·具有一定的清除作用,IC50值为0.179 mg·mL^-1。优选的超声波提取工艺提高了分蘖洋葱总黄酮提取率,具有较强的抗氧化活性。     

桔梗总黄酮提取工艺优化及其体外抗氧化性

以桔梗总黄酮为试材,采用Plackett-Burman和中心组合设计(central compos-ite design,CCD)优化桔梗总黄酮的提取工艺,使用3种抗氧化体系,研究其体外抗氧化活性,以期为桔梗总黄酮的开发和应用提供参考依据.结果 表明:桔梗总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇浓度63％,液料比22∶1 mL·g-1,浸泡时间63 min,超声提取10 min,总黄酮实际得率为0.45％,纯度为58.22％.桔梗总黄酮和维生素C对DPPH·的IC50值分别为0.546 mg·mL-1和8μg·mL-1,对·OH的IC50值分别为0.196 mg·mL-1和0.368 mg·mL-1,总抗氧化能力与维生素C无显著差异.     

乙醇回流法提取伸筋草总黄酮工艺及其体外抗氧化活性

以伸筋草为试材,在单因素试验的基础上,以总黄酮提取率为指标,采用正交实验L9(34)优化乙醇辅助回流提取总黄酮的最佳工艺条件,并通过总黄酮对羟基自由基和1,1-苯基-2-苦肼基自由基的清除能力来评价其抗氧化性。结果表明:最佳提取工艺参数为乙醇体积分数75%,液料比60∶1mL/g,提取时间150min,提取温度80℃,在此条件下,总黄酮的平均提取率为1.82%;总黄酮质量浓度为0.014 0mg/mL时,对·OH和DPPH·的清除率可分别达72.65%和93.02%,说明总黄酮对·OH和DPPH·有较好的清除能力。     

刺梨根、茎、叶中黄酮的抗氧化活性

以超声波法提取的六盘水野生刺梨根、茎、叶中的黄酮为试材,比较其DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的清除能力,以期为刺梨野生资源的进一步开发提供参考依据.结果 表明:刺梨根、茎、叶黄酮对DPPH自由基的清除率分别是11.3％、5.2％、66.9％;对ABTS自由基清除率分别是61.1％、28.9％、89.3％;对羟基自由基的清除率分别是58.1％、19.3％、81.5％;对超氧自由基的清除率分别是48％、42％、50％,清除能力的强弱依次为刺梨叶中黄酮＞根中黄酮＞茎中黄酮.说明刺梨根、茎、叶中黄酮可以作为天然抗氧化剂开发,尤其是刺梨叶片的黄酮.     

涉县柴胡茎叶总黄酮提取优化及其抗氧化性

以涉县柴胡茎叶为试材，采用单因素试验和四因素三水平的正交实验设计，研究优化了总黄酮乙醇回流浸提工艺，并分析测定提取物及与维生素C复配后的抗氧化活性，以期为涉县柴胡的进一步开发利用提供参考依据。结果表明：1)涉县柴胡茎叶总黄酮最佳提取工艺为料液比1:20g·mL^-1，提取时间2h，提取温度70℃，乙醇浓度60%;2)最优条件下涉县柴胡茎叶总黄酮对DPPH·、·OH、■的半抑制浓度分别为0.223、0.413mg·mL^-1和0.445mg·mL^-1;3)与维生素C复配后表现出一定协同作用，试验组内复配液（1:3）协同作用最强。综上可知，涉县柴胡茎叶中总黄酮具有很好的抗氧化能力。     

龙牙百合叶总黄酮提取工艺及抗氧化性研究

以龙牙百合叶片为研究对象,采用优化超声波法提取龙牙百合叶片总黄酮,对黄酮进行了抗氧化活性分析,并在单因素试验的基础上采用正交实验法,研究了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对总黄酮提取效果的影响,并确定了最佳工艺条件,对其体外抗氧化活性进行了初步研究。结果表明:最佳工艺条件为提取温度50℃,乙醇浓度80%,料液比1∶5g·mL~(-1),提取时间30min。此条件下,百合叶总黄酮含量为12.691mg·g~(-1)。抗氧化试验结果表明,龙牙百合叶总黄酮提取液对DPPH·的清除效果优于相同浓度下维生素C溶液,并呈显著差异。