不同光质对铁皮石斛光合特性和多糖积累的影响

以铁皮石斛试管苗为试材,研究了不同光质对其光合特性和多糖积累的差异。结果表明:不同光质条件下,试管苗叶中叶绿体数量及叶绿素含量有明显差异,二者呈负相关;白光和绿光下多糖含量和叶绿素含量变化趋势基本一致,表现为白光绿光;在红、蓝光下则表现出低叶绿素含量、高多糖含量的特征,表现出光质对光合代谢调控的复杂性。     

混合酶提法提取铁皮石斛中石斛多糖的优化工艺研究

以铁皮石斛为试材,采用纤维素酶与果胶酶的等量混合提取法,通过单因素试验与正交实验,研究了pH值、酶浓度、酶解时间、酶解温度等因素对石斛多糖提取效率的影响。结果表明:铁皮石斛多糖提取最佳工艺为pH 6.5、1%浓度的纤维素酶和果胶酶1∶1等量混合、50℃下提取135min,在此条件下石斛多糖提取率为41.33%;说明该工艺是可行的,且具有较高的提取率。     

几种因素对反应器铁皮石斛原球茎生长及有效物质的影响

以铁皮石斛原球茎为试材,应用3L气升式生物反应器,研究了反应器不同培养时期、通气方式和接种量对铁皮石斛原球茎生物量及有效物质积累的影响,并比较了铁皮石斛不同来源材料的多糖与生物碱含量。结果表明:铁皮石斛原球茎的生物量及多糖和生物碱的积累量均在培养至30d时达到最大值,在反应器培养过程中逐步调节通气量由0.1vvm至0.3vvm,可提高原球茎的生物量及有效物质的含量,接种量为20~25g/L均可获得较高的原球茎生物量且有效物质含量和产量也较高,铁皮石斛原球茎的多糖和生物碱含量均高于1年生植株和组培苗。因此,铁皮石斛原球茎反应器培养30d,培养期间将通气量由0.1vvm调节至0.3vvm,接种量为20~25g/L有利于大量生产原球茎及其有效物质。     

不同氮源对铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的影响

以铁皮石斛为试材,以1/2MS培养基为基本培养基,添加不同种类的附加氮源20mmol/L,研究了不同氮源对铁皮石斛原球茎悬浮培养增殖、多糖含量及蛋白质含量的影响。结果表明:最有利于铁皮石斛原球茎悬浮培养增殖的是甘氨酸,硝态氮次之,谷氨酸最差,甚至出现了负增长;在多糖积累方面,硝酸钙对铁皮石斛原球茎多糖积累最为明显,赖氨酸等不利于铁皮石斛原球茎的多糖积累;硝酸钾、硫酸铵有利于铁皮石斛原球茎蛋白质的积累,尿素等其它氮源则不利于铁皮石斛原球茎蛋白质的积累。综合分析发现,硝酸钙最利于铁皮石斛原球茎悬浮培养生长。     

铁皮石斛种子、原球茎和类原球茎体的超低温保存研究

对珍稀濒危植物铁皮石斛的种子、原球茎和类原球茎体进行了液氮超低温保存研究。把４个月龄的种子脱水至含水量为１２％～１９％,能获得较高的冻后存活率（９５％）和较快的恢复生长速率。种子在０．５ｍｏｌ／Ｌ脱落酸培养基上萌发３周所形成的原球茎,用玻璃化保护剂ＰＶＳ２处理１５ｍｉｎ,其冻后存活率可达８８％。将生长旺盛的暗培养类原球茎体的含水量在６～７ｄ内干燥至３０％±２％,其冻后存活率可达４８％～８０％。     

铁皮石斛快速繁殖体系研究

以铁皮石斛愈伤组织为试材,比较培养基组分、植物激素种类、浓度及添加剂等对铁皮石斛增殖、壮苗及生根的影响。结果表明:愈伤组织增殖最适培养基为:MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;不定芽诱导的最适培养基:1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;幼苗壮苗的最适培养基为:MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+香蕉汁30%;根诱导培养基:MS+IBA0.4 mg/L+NAA 0.3 mg/L。     

不同来源铁皮石斛及其混淆品多糖含量的比较

以不同来源的24份(T1~T24)铁皮石斛及其混淆品为试材,比较了其一年生成熟茎的多糖含量差异,以筛选高品质的铁皮石斛。结果表明:4份铁皮石斛混淆品的多糖含量均低于18.0%,而20份铁皮石斛样品中有17份的多糖含量高于药典规定的(25.0%)标准,其中2份铁皮石斛(T4和T2)显著高于其它样品,多糖含量分别高达47.0%和44.1%。从来源地看,云南来源的铁皮石斛平均多糖含量最高(40.4%),其次为浙江来源样品(29.0%)、广东企业送检样品(28.9%)和杂交铁皮样品(26.9%),广西来源的样品含量最低(25.7%)。     

不同产地铁皮石斛的品质比较研究

为了筛选铁皮石斛优良种质,在广西、安徽、云南、浙江收集不同产地的铁皮石斛,参照2010年版《中国药典》提供的方法,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量,并使用高效液相法测定毛兰素的含量.结果表明:在0.018～0.090 mg范围内,葡萄糖与吸光值线性关系良好,相关系数r=0.9987,不同产地铁皮石斛多糖含量为25.15％～36.53％;柱前衍生化HPLC法测定D-甘露糖含量专属性强、精确、重现性好,不同产地铁皮石斛甘露糖含量为18.00％～32.35％;不同产地铁皮石斛毛兰素的含量为0～0.0043％.不同产地的铁皮石斛多糖、甘露糖和毛兰素含量差异显著,其中采自云南、浙江的种质在多糖和甘露糖方面有优良的遗传基础,而广西种质的毛兰素含量相对较高.     

龙眼果实中多糖积累与分配研究

以晚熟基因型苗翘、特晚熟基因型立冬本和中晚熟基因型青壳宝圆龙眼为试材,测定了果实发育过程中果皮、果肉和种子的多糖含量。结果表明：不同基因型龙眼的种子多糖积累高峰期不同,1个积累高峰的有立冬本（9月20日）,2个积累高峰的有苗翘（8月16日、9月20日）和青壳宝圆（8月23日、9月20日）。龙眼果实各部分的多糖积累速率不同,分配也不同,3个龙眼基因型均为分配给龙眼种子最多,其次是果肉,分配最少的是果皮;在成熟后期,龙眼多糖均出现负积累。本研究为龙眼多糖的调控和开发利用奠定了基础。     

不同培养方法对长春花愈伤组织生长及吲哚生物碱积累的影响

分别对4种不同愈伤组织采用固体培养和悬浮培养,并对其生长鲜重和吲哚生物总碱的含量进行了分析测定,实验结果表明,EMS诱变的长春花愈伤组织生长和吲哚生物总碱积累适于固体培养,而对于秋水仙碱诱变的四倍体长春花愈伤组织、叶愈伤组织和子房愈伤组织更适于悬浮培养,但前者优势表现更为突出.     

铁皮石斛类原球茎空气干燥法超低温保存中的脱水蛋白分析

 用空气干燥法将铁皮石斛类原球茎脱水至不同含水量, 进行超低温保存和热稳定蛋白的SDS-PAGE 分析, 并进行脱水蛋白的Western-blot 检测。结果表明: 在本试验条件下, 含水量以g/ g DM表示时,铁皮石斛类原球茎脱水时间(x) 对含水量(y) 的回归方程式为y = - 0.1208 x + 9.9636。含水量下降为0.1～0.5 g/ g DM时, 冻后存活率达到最大值。当含水量达1.0 g/ g DM时, 热稳定蛋白的含量明显增加, 经免疫检测其中分子量分别为28.7 和34.3 kD 的两个热稳定蛋白为脱水蛋白。认为含水量是铁皮石斛超低温保存成功的关键因素, 也是引起脱水蛋白大量积累的重要条件。     

湿法超微粉碎提取石斛多糖的研究

以铁皮石斛为试材,采用湿法超微粉碎提取石斛多糖,通过单因素试验研究了磨齿磨隙、固液比、提取温度、提取时间对多糖得率的影响,在此基础上,采用正交实验对石斛多糖提取工艺进行了优化.结果表明:胶体磨齿磨隙30 μm、固液比1∶ 14 g/mL、提取温度70℃、提取时间31 min时,石斛多糖得率可达16.48％.表明湿式超微粉碎是一种有效的提取石斛多糖的方法.     

铁皮石斛的种子培养

以铁皮石斛成熟种子为外植体,研究原球茎的诱导、增殖、分化和生根的最佳培养条件。结果表明:1/2 MS基础培养基最适合铁皮石斛的种子培养,45 d时原球茎诱导率达到95%;原球茎增殖的最佳培养基为1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+20%马铃薯提取液,每代增殖16倍,原球茎形态好、变异少;原球茎团于1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.25 mg/L+20%马铃薯提取液的培养基上可诱导丛芽分化,于MS+NAA 0.5 mg/L+20%香蕉汁+活性炭5g/L的培养基上易于诱导不定根的形成,60 d后可形成健壮的完整小植株。     

铁皮石斛试管苗培养技术的研究

研究了不同量激素浓度、天然添加物及植入密度对石斛试管苗生长的影响.结果表明:使用1/2MS培养基并且在其他条件不变的情况下,当6-BA的含量在3.0 mg/L时,丛生芽数量多且有原球茎的发生;香蕉汁具有明显的壮苗和诱导芽增殖的效果;当铁皮石斛茎段植入密度为10～12个/瓶时,对其分蘖和生长有利.     

铁皮石斛丛生芽增殖培养条件的优化

为筛选出铁皮石斛从生芽继代增殖的最适培养基和培养条件,以MS为基本培养基,研究比较了活性炭、植物激素、有机添加物以及温度和光照等因素对铁皮石斛生长状况的影响.结果表明:丛生芽继代增殖的最佳配方为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+香蕉100 g/L+活性炭0.5 g/L+蔗糖30 g/L,丛生芽长势好,60 d增殖系数达到7.16;最适培养温度为25℃,最佳的光照强度为2 000 lx.     

盆栽铁皮石斛生长和抗氧化生理特性动态研究

以铁皮石斛组培苗为试材,以松树皮和桑杆为基质,采用盆栽方式种植铁皮石斛组培苗,研究盆栽对铁皮石斛组培苗生长的影响及其不同生长阶段抗氧化生理特性的变化。结果表明:2种不同基质盆栽铁皮石斛组培苗在不同生长阶段叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和脯氨酸含量均显著高于移栽前,丙二醛(MDA)含量稍高于移栽前,叶绿素含量较移栽前的低,且2种不同基质的铁皮石斛叶片POD、SOD、CAT活性差异明显,脯氨酸含量、MDA含量和叶绿素含量差异不明显;2种不同基质盆栽铁皮石斛组培苗成活率都达90%以上,且移栽后长势好,移栽后2年株高分别为56.18、61.42cm,与大棚苗床栽培的效果比较接近。     

正交实验法优化铁皮石斛生根培养体系

以铁皮石斛丛生芽为试材,通过三因素三水平正交实验方法优化生根培养体系,研究了不同添加物浓度对生根的影响,以筛选最适的铁皮石斛生根培养基。结果表明:香蕉泥对铁皮石斛生根有极显著的促进作用,培养基成分为1/2MS+2.5mg·L~(-1) NAA+1.5mg·L~(-1)IBA+150g·L~(-1)香蕉泥时,生根率可达到100%,为最佳的生根培养基。