华南小菜蛾田间种群对氯虫苯甲酰胺已产生严重抗性

2009—2011年在广东连州、惠州、佛山、广州和广西柳州、江西信丰等多个华南区主要菜场开展小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗药性监测。结果发现,与室内敏感种群的敏感基线相比(LC50=0.13 mg/L),各监测点在2009年秋季均为敏感水平,2010年秋季部分地区出现敏感性下降和低水平抗性,而2011年春季除了监测到敏感性下降和低水平抗性外,还发现个别监测点产生中等水平抗性,抗性上升趋势明显。随后,在广州增城菜区监测到一例对氯虫苯甲酰胺产生极高水平抗性的小菜蛾田间种群,其当代和F1代虫源的LC50值分别为78.78、59.14 mg/L,抗性倍数分别为606.00和454.92,达极高抗性水平。分析小菜蛾对氯虫苯甲酰胺产生抗药性的关键因素,认为过度依赖该药、随意提高施用剂量、不合理混配、连年连片单一种植模式等可能是有利于抗药性发展的关键因素。     

不同地区小菜蛾对氯虫苯甲酰胺和茚虫威的抗性初报

在十字花科种植较多的浙江省7个地区(常山、慈溪、杭州、金华、丽水、三门、上虞)采用室内浸液法和诊断剂量法进行小菜蛾对氯虫苯甲酰胺和茚虫威的抗药性试验.结果显示,上述地区小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺抗药性水平有一定的差异.金华地区小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺敏感性下降,抗性指数为8.55,其余6个地区的小菜蛾对氯虫苯甲酰胺较为敏感,抗性指数0.42～3.24.小菜蛾对茚虫威的抗药性水平差异较大.其中金华地区小菜蛾对茚虫威的抗性指数68.69,慈溪和常山地区小菜蛾抗性指数分别为25.82和15.17,丽水、杭州、三门和上虞地区小菜蛾种群分别产生了9.74,7.16,5.99和5.73的低抗药性.结果还显示,诊断剂量法可定性判别小菜蛾的抗药性,可用于田间小菜蛾的抗性监测.     

5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对小菜蛾的防效研究

为探讨5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对小菜蛾的防效,进行了田间试验,结果表明:5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对甘蓝小菜蛾有很好的防治效果,其中以5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂1 000倍液防效最佳,药后3、7、10 d的防效分别为99.0%、97.4%、94.9%;5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂1 500倍液防效其次,其药后3、7、10 d的防效分别为95.5%、92.6%、90.4%,明显优于对照农药。5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂可作为吴江市防治小菜蛾的首选药剂。     

氯虫苯甲酰胺对小菜蛾生长发育的亚致死效应研究

采用叶片药膜法,确定氯虫苯甲酰胺对小菜蛾三龄幼虫的亚致死剂量(LC25和LC50),研究其对小菜蛾Plutellaxylastella(L.)生长发育的亚致死效应。结果表明:与空白对照相比,亚致死浓度的氯虫苯甲酰胺处理后,小菜蛾幼虫体重显著降低,蛹期与产卵历期均显著延长,单雌产卵量显著增加,幼虫生长发育历期、羽化率显著降低,孵化率略有下降。在亚致死剂量下,氯虫苯甲酰胺能够提高小菜蛾种群的发育速率和繁殖力,这对协调田间的化学防治和生物防治、制定小菜蛾综合防治策略的有积极意义。     

氯虫苯甲酰胺对广东小菜蛾杀虫活性和田间药效评价

氯虫苯甲酰胺悬浮剂对广东小菜蛾室内毒力测定结果LC50为0.81mg/L;持效期测定结果为药后21d死亡率64.38%,田间药效结果显示,药后7d防效达93.95%。复配制剂乳油的室内毒力测定结果为LC50=0.71mg/L;持效期测定结果为药后21d死亡率49.21%,田间药效结果显示,药后7d防效达98.63%。     

MBF2转录调控小菜蛾谷胱甘肽S-转移酶代谢氯虫苯甲酰胺的功能

【目的】探究转录调控因子MBF2 (multiprotein bridging factor 2)调控小菜蛾（Plutella xylostella）体内谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase,GST）的功能,及其在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺中的作用,为阐明小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的解毒代谢机制提供理论依据。【方法】采用浸叶法测定敏感（SS）、广东连州（LZ）、云南通海（TH）3个小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺的抗性水平,酶动力学法测定3个种群的GST活性;使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析MBF2在不同抗性种群小菜蛾中的表达差异;采用氯虫苯甲酰胺LC50诱导12 h,分析其对小菜蛾MBF2的诱导表达作用;应用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术研究MBF2对GST基因的调控作用,并测定沉默MBF2后小菜蛾的GST活性;结合沉默后小菜蛾对药剂的敏感性变化,验证MBF2在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺中的作用。【结果】两个抗性种群（TH和LZ）相较SS种群分别达到了中抗及高抗的水平,TH和LZ抗性倍数分别为54.27和289.58;TH和LZ小菜蛾...     

氯虫苯甲酰胺和甲维盐对甘蓝小菜蛾三种不同生测方法的研究

比较喷雾法、夹毒叶片法和点滴法用于测定氯虫苯甲酰胺和甲维盐对甘蓝小菜蛾的室内生物活性的差异。结果表明,喷雾法操作简便易行,但误差较大;夹毒叶片法用药量少、结果可信度高,但准备过程较长;点滴法对操作者要求较高,结果较为准确。氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的速效性不如甲维盐,而持效性好于甲维盐。     

氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺在不同水体中降解特性

为探讨新型杀虫剂氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺在不同水体中的降解特性,研究了氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺在不同缓冲溶液及不同自然水体中光化学降解情况。表明氯虫苯甲酰胺在p H值为4.00、6.86、9.18的不同缓冲溶液中的光解半衰期分别为7.53,7.12,3.89 d;氟苯虫酰胺在p H值为4.00、6.86、9.18的不同缓冲溶液中的光解半衰期分别为6.92,6.11,3.46 d。高压汞灯照射下,氯虫苯甲酰胺在重蒸水、稻田水、水库水、地表水、湖水等5种不同自然水体中的光解半衰期分别为4.46,4.07,3.95,3.85,3.55 d;氟苯虫酰胺在重蒸水、稻田水、水库水、地表水、湖水等5种不同自然水体中的光解半衰期分别为3.95、3.74、3.30,3.05,2.96 d。研究发现氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺在水溶液中的降解动态均遵循一级动力学规律,且降解速率随溶液p H值的变化而变化,光解率随p H值的增加而增大;在高压汞灯照射下,氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺在5种不同自然水体中的光解半衰期由长到短依次重蒸水、稻田水、水库水、地表水和湖水。     

氯虫苯甲酰胺在大豆和土壤中的残留及降解行为

建立了毛豆、植株和土壤中的氯虫苯甲酰胺的残留分析方法,并采用田间试验方法研究了氯虫苯甲酰胺在大豆植株和土壤中的消解动态及其在毛豆和土壤中的残留规律。样品用乙腈水溶液匀浆提取,经氨基固相萃取小柱净化,液相色谱-串联质谱测定,结果表明:氯虫苯甲酰胺在毛豆、大豆植株和土壤中的平均回收率为99.8%~107.6%,变异系数在1.7%~7.2%之间;最低检测浓度为0.05 mg·kg~(-1),最小检出量为2.5×10~(-10)g。田间残留试验表明,氯虫苯甲酰胺在大豆植株和土壤中的残留消解动态规律均符合一级动力学反应模型,半衰期分别为4.3~10.1 d和3.1~10.2 d;以195.7 g·hm~(-2)和293.6 g·hm~(-2)剂量,最多施药3次,距最后一次施药3d,氯虫苯甲酰胺在毛豆和土壤中的最高残留量分别为0.923、0.757 mg·kg~(-1),低于日本和澳大利亚规定氯虫苯甲酰胺在毛豆中最大残留限量1 mg·kg~(-1)。综上建议200 g·L~(-1)氯虫苯甲酰胺悬浮剂用于大豆防治豆荚螟时,最多施用3次,用量为195.7~293.6 g·hm~(-2)(36~54 g ai·hm~(-2)),安全间隔期为3 d。     

广西不同地区小菜蛾田间种群对3种新型杀虫剂的抗性测定

[目的]测定广西6个蔬菜产区的小菜蛾田间种群幼虫对氯虫苯甲酰胺、氟虫双酰胺和氰氟虫腙等3种新型杀虫剂的敏感性,为3种杀虫剂的合理使用及各种群对3种药剂的抗性监测提供基础数据.[方法]采用浸叶法分别测定小菜蛾敏感品系和6个小菜蛾田间种群幼虫对氯虫苯甲酰胺、氟虫双酰胺、氰氟虫腙的敏感性,比较田间种群和敏感品系的LC50,计算小菜蛾田间种群的抗性倍数.[结果]小菜蛾荔浦种群对氯虫苯甲酰胺最敏感,其LC50为0.000735 mg/L,抗性倍数为1.32倍,田东种群的敏感性最低,其LC50为0.004230 mg/L,抗性倍数达7.61倍;对于氟虫双酰胺,柳江种群的敏感性相对较低,其LC50为0.366 mg/L,抗性倍数为2.27倍,南宁安吉种群最敏感,其LC50为0.168 mg/L,抗性倍数为1.04倍;对于氰氟虫腙,柳江种群的敏感性相对较低,其LC50为4.692 mg/L,抗性倍数为2.96倍,荔浦种群最敏感,其LC50为1.622mg/L,抗性倍数为1.02倍.[结论]小菜蛾田东种群对氯虫苯甲酰胺的抗性倍数为7.61倍,已达低水平抗性,应给予高度重视.其余地区的小菜蛾种群对3种杀虫剂的抗性倍数均低于5倍,仍处于敏感期,应加强不同药剂的轮换使用,以延缓小菜蛾抗性的形成与发展.     

Biochemical Mechanism of Chlorantraniliprole Resistance in the Diamondback Moth,Plutella xylostella Linnaeus

The insecticide chlorantraniliprole exhibits good efifcacy and plays an important role in controlling the diamondback moth, Plutella xylostella Linnaeus. However, resistance to chlorantraniliprole has been observed recently in some ifeld populations. At present study, diamondback moths with resistance to chlorantraniliprole （resistant ratio （RR） was 82.18） for biochemical assays were selected. The assays were performed to determine potential resistance mechanisms. The results showed that the selected resistant moths （GDLZ-R） and susceptible moth could be synergized by known metabolic inhibitors such as piperonyl butoxide （PBO）, triphenyl phosphate （TPP） and diethyl-maleate （DEM） at different levels （1.68-5.50-fold and 2.20-2.89-fold, respectively）, and DEM showed the maximum synergism in both strains. In enzymes assays, a high level of glutathione-S-transferase （GST） was observed in the resistant moth, in contrast, moths that are susceptible to the insecticide had only 1/3 the GST activity of the resistant moths. The analysis of short-term exposure of chlorantraniliprole on biochemical response in the resistant strain also showed that GST activity was signiifcantly elevated after exposure to a sub-lethal concentration of chlorantraniliprole （about 1/3 LC50, 12 mg L-1） 12 and 24 h, respectively. The results show that there is a strong correlation between the enzyme activity and resistance, and GST is likely the main detoxiifcation mechanism responsible for resistance to chlorantraniliprole in P. xylostella L., cytochrome P450 monooxygenase （P450） and carboxy-lesterase （CarE） are involved in to some extent.     

小菜蛾抗药性研究及其治理

小菜蛾是一种世界性十字花科蔬菜害虫，巳报道小菜蛾对50多种杀虫剂产生抗药性，包括有机氯、有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯类、昆虫生长调节剂及苏云金杆菌（Bt）类等杀虫剂。本全面阐述了国内外小菜蛾抗药性研究概况，包括小菜蛾抗性发展、交互抗性、抗性稳定性、抗性机理及抗性遗传等方面的研究，并对小菜蛾抗药性的治理策略进行讨论。     

田间小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性测定

在室内采用浸叶法测定湖南3个蔬菜产区(长沙市长沙县、株洲市茶陵县和永州市祁阳县)的田间小菜蛾对9种药剂的抗药性。试验结果表明,小菜蛾对高效氯氰菊酯抗性达到极高水,对定虫隆、阿维菌素和茚虫威抗性属于高抗水平,对溴虫腈,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素属于中抗水平,对氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌相对敏感。因此,这3个地区的小菜蛾防治应该减少溴虫腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素的使用,交替使用氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌,停止阿维菌素、茚虫威、高效氯氟氰菊酯的使用,以便延缓抗药性的产生与发展。     

Biochemical Mechanism of Chlorantraniliprole Resistance in the Diamondback Moth,Plutella xylostella Linnaeus

The insecticide chlorantraniliprole exhibits good efficacy and plays an important role in controlling the diamondback moth, Plutella xylostella Linnaeus. However, resistance to chlorantraniliprole has been observed recently in some field populations. At present study, diamondback moths with resistance to chlorantraniliprole (resistant ratio (RR) was 82.18) for biochemical assays were selected. The assays were performed to determine potential resistance mechanisms. The results showed that the selected resistant moths (GDLZ-R) and susceptible moth could be synergized by known metabolic inhibitors such as piperonyl butoxide (PBO), triphenyl phosphate (TPP) and diethyl-maleate (DEM) at different levels (1.68–5.50-fold and 2.20–2.89-fold, respectively), and DEM showed the maximum synergism in both strains. In enzymes assays, a high level of glutathione-S-transferase (GST) was observed in the resistant moth, in contrast, moths that are susceptible to the insecticide had only 1/3 the GST activity of the resistant moths. The analysis of short-term exposure of chlorantraniliprole on biochemical response in the resistant strain also showed that GST activity was significantly elevated after exposure to a sub-lethal concentration of chlorantraniliprole (about 1/3 LC₅₀, 12 mg L⁻¹) 12 and 24 h, respectively. The results show that there is a strong correlation between the enzyme activity and resistance, and GST is likely the main detoxification mechanism responsible for resistance to chlorantraniliprole in P. xylostella L., cytochrome P450 monooxygenase (P450) and carboxy-lesterase (CarE) are involved in to some extent.     

小菜蛾细胞色素P450基因的cDNA片段克隆及其序列分析

以小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]3龄幼虫(对氰戊菊酯的LC50为38.75 mg/L)的总RNA为模板,利用简并引物,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)方法扩增出1个长度为240 bp的cDNA片段。序列分析结果表明,扩增出的cDNA片段与细胞色素P450的Cyp6基因有较高的同源性。     

响应槲皮素诱导的美国白蛾P450基因及CYP6ZB2功能分析

【目的】明确美国白蛾（Hyphantria cunea）响应槲皮素诱导的差异表达P450基因及系统发育关系,探究美国白蛾P450基因对槲皮素诱导的剂量效应,以及P450基因在美国白蛾对槲皮素的解毒适应中的作用。【方法】基于槲皮素诱导的美国白蛾中肠转录组数据,从中筛选显著差异表达的P450基因,应用MEGA X软件对5个P450基因及其他近缘物种的P450基因进行系统进化关系分析;通过RT-qPCR技术检测5个P450基因在不同槲皮素浓度（0.5%、1.0%、2.0%和4.0%）处理下的表达模式;克隆CYP6ZB2全长cDNA序列,利用RNA干扰（RNAi）技术探明CYP6ZB2基因沉默对美国白蛾体重及存活率的影响。【结果】从转录组的差异表达基因中筛选到5个显著响应槲皮素诱导的P450基因,经P450命名委员会分别被命名为CYP4G296、CYP4G297、CYP333A30、CYP304F33和CYP6ZB2(GenBank登录号：ON032363—ON032367)。系统发育分析表明,这5个基因被聚类到CYP2、CYP3、CYP4和线粒体CYP进化枝。RT-qPCR结果表明,P450...     

小菜蛾对阿维菌素的抗性风险评估及交互抗性的室内测定

在室内用阿维菌素对小菜蛾进行抗性选育,结果表明：小菜蛾对阿维菌素的抗性发展先慢后快,经过20代14次选育,与敏感种群相比,抗性指数为20.92倍。应用域性状分析法,小菜蛾对阿维菌素的抗性现实遗传力为0.1303,在致死率为50%～99%的选择压力下,预计小菜蛾对阿维菌素抗性增长10倍,需要2.4～15.9代。这表明小菜蛾对阿维菌素产生高水平抗性的风险很大。交互抗性测定结果表明,阿维菌素抗性小菜蛾种群对甲维盐具有明显的交互抗性,抗性指数为8.85倍;对多杀菌素、茚虫威、氟虫腈和溴虫腈类药剂无交互抗性或交互抗性不明显。