猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达

【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID_(50)为5×10~2 mL~(-1)。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。     

利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展

噬菌体随机肽库技术是将编码外源多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白结构基因的表达而表达,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性,是一种基因型与表达型的统一。近年来,噬菌体随机肽库技术被广泛应用于各种抗原的模拟表位筛选中,并取得了显著成果。综述了利用噬菌体随机肽库技术在抗原模拟表位筛选中的研究进展。     

病毒亲和肽的研究方法及进展（英文）

随着病毒亲和肽研究的不断深入,其在药理和医学上的应用也逐渐成为热点。研究极具潜在药用价值的病毒亲和肽并应用于治疗,给治愈某些感染性疾病带来希望。分析筛选高选择性、高灵敏度的病毒亲和肽,能为疾病检测、治疗及其分子机制研究提供有价值的思路和手段。该文就计算机模拟、分子对接和同源建模等生物信息学预测技术,及噬菌体展示技术等分析筛选病毒亲和肽的研究方法加以综述。     

噬菌体展示技术

概述了噬菌体展示技术的基本原理,常用的噬菌体表面展示系统以及噬菌体展示技术的应用、展望等方面,并在抗原表位分析和疫苗的研制、人工抗体、多肽药物的开发等方面,进行了探讨。     

番鸭呼肠孤病毒σC蛋白模拟抗原表位的研究

以番鸭呼肠孤病毒MW9710分离株原核表达蛋白pGEX-4T-1-σC为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,经过4轮亲和筛选后,对整个被选噬菌体集合单链DNA进行测序。结果:噬菌体展示序列为CATCCTATTCATCCGCGTCAT,相应的短肽序列为HPFYSCY,该短肽序列与MDRVσC氨基酸序列N端一处-P-YS--的氨基酸片段相似,推论MDRVσC的模拟抗原表位可能是由该不连续氨基酸片段所构成的构象表位。通过Genbank的蛋白质检索,发现该构象表位也存在于前B细胞克隆增强因子的多肽序列中。结果表明,噬菌体展示随机肽库技术是一种用于研究抗原表位结构的有效方法。     

新型鹅星状病毒ORF2蛋白纳米抗体的筛选及鉴定

【目的】由新型鹅星状病毒(novel goose astrovirus, nGAstV)引起的雏鹅痛风病对我国养鹅业造成了重大经济损失。通过构建nGAstV纳米抗体(nanobody, Nb)噬菌体展示文库,获得识别nGAstV ORF2蛋白的特异性Nb,可为建立nGAstV抗体检测方法及研究nGAstV ORF2蛋白结构和功能奠定基础。【方法】使用蔗糖密度梯度离心方法纯化在LMH细胞中增殖的nGAstV,RT-PCR鉴定nGAstV并通过细胞病变测定nGAstV滴度。用0.06%甲醛溶液灭活纯化的nGAstV作为免疫原,免疫两周岁羊驼。首次免疫时用灭活纯化的nGAstV与等量弗氏完全佐剂乳化后免疫,第2—5次免疫用灭活纯化的nGAstV与等量弗氏不完全佐剂乳化。每间隔两周免疫一次,每次免疫剂量均为50μg。第5次免疫14 d后,通过间接ELISA方法测定羊驼血清中针对nGAstV的IgG抗体效价。待IgG抗体效价达到构建噬菌体抗体展示文库标准时,分离羊驼外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte, PBL),然后提取PBL总RNA将其反转录为cDNA,利用...     

三肽囊素(Bursin)模拟肽阳性噬菌体对新城疫疫苗免疫效果的影响

研究了两个噬菌体展示三肽囊素模拟肽阳性噬菌体的活性。将100羽1日龄罗曼鸡随机分成5组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),每组20羽,在2日龄时,Ⅰ组注射4号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅱ组注射6号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅲ组注射6号阳性噬菌体(滴度为29),Ⅳ组注射一定剂量的Bursin,Ⅴ组为TBS对照组,在8日龄时接种新城疫(ND)Ⅳ系苗,以后每隔1周采用微量血凝抑制试验和MTT法测定各组的免疫效应。结果表明:阳性克隆(4号和6号)与Bursin在动物试验上具有相似的免疫增强作用,能提高体液免疫水平,对细胞免疫也有提高,且这种促进作用的大小与所用噬菌体滴度有关。     

我国水稻广亲和品种研究的进展

报道最近十多年来水稻广亲和基因理论的发展以及广亲和品种研究、改良利用的进展概况。     

M13噬菌体衣壳蛋白的研究应用

M13噬菌体是一种丝状噬菌体,内有一个环状单链DNA分子,它由约2 800个PⅧ蛋白组成的圆柱形衣壳包围环状单链DNA分子,其中5个PⅦ和5个PⅪ蛋白在噬菌体的一端,另一端有5个PⅥ蛋白和5个PⅢ蛋白。这些衣壳蛋白参与着噬菌体的感染、组装等功能。文中对这5种衣壳蛋白在噬菌体展示技术的研究应用进行了综述。     

内含肽的研究及应用进展

对内含肽与内含子之间的差异进行了比较,概述了内含肽的种类和自我剪接机制,着重阐述了内含肽在当前各生物技术领域中的应用,分析了其优点和局限性,最后对内含肽的应用方向进行了展望。     

抗凝血多肽的筛选和生物信息学分析

对小分子多肽类抗凝血药物进行了筛选,对得到的多肽进行了生物信息学分析,蛋白同源建模及分子对接,旨在寻找新型抗凝血多肽,并为其今后的临床应用提供理论依据。     

核桃蛋白肽制备及脱苦研究进展

核桃蛋白肽一般以核桃蛋白为原料采用酶解法制备。综述了核桃蛋白的提取和纯化方法,酶解法制备核桃蛋白肽和提高核桃蛋白肽得率的辅助手段,以及多肽脱苦的方法,对核桃蛋白肽制备存在的问题进行了归纳,并对其制备及其脱苦的研究发展方向进行了展望。     

鸭病毒性肝炎的研究进展

综述了鸭病毒性肝炎的病原特征、流行病学、致病机理、诊断等方面的研究进展。     

草莓病毒病及其脱毒与检测技术研究进展

介绍了在草莓病毒病为害特点及其作用机理。综述了热处理、茎尖培养、花药培养等草莓脱毒技术和运用指示植物、血清学和分子生物学等检测技术。介绍了草莓无毒苗的栽培效果。     

抗氧化肽的研究进展

对抗氧化肽的种类、作用及制备方法等进行了综述。     

玉米肽的研究进展

对国内外玉米肽研究概况进行了介绍。从玉米肽概念出发,综述了玉米肽的分离纯化、醒酒机理。加强更高质量和更高生物活性玉米肽的开发与应用,将带动蛋白类醒酒产品的发展,具有很大的应用价值和经济效益。     

小肽的营养与应用研究进展

对小肽的分类、小肽的营养作用及其在畜禽生产中的应用等方面进行了综合阐述。     

低温疗法脱除植物病毒研究进展

低温疗法是近几年刚刚兴起的一种新的脱除植物病毒的方法。本文从低温疗法脱除植物病毒的原理、方法、步骤及应用情况等方面进行了综述,旨在为该方法的推广应用提供参考。     

犬瘟热病毒分离技术研究进展

由犬瘟热病毒感染引发的犬瘟热是多种动物共患的重要传染疾病。病毒分离技术是对该疾病诊断和病原研究方面的必要手段和基础。目前,多种不同动物来源的原代细胞、传代细胞及稳定表达犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞系在犬瘟热病毒分离研究中均得到广泛应用。综述当前犬瘟热病毒分离技术的研究进展,并对不同分离方法优缺点进行比较分析。     

蚯蚓抗菌肽的研究进展

抗菌肽是一类广泛存在于自然界生物体中的小肽类物质,是机体先天性免疫系统的重要组成部分。由于其具有分子质量小和抗菌谱广等特点以及不同于抗生素的全新的抗菌机制,在药物开发领域和畜禽饲料添加剂等领域具有广阔的应用前景。蚯蚓抗菌肽种类多,具有良好的抑菌效果。对蚯蚓抗菌肽的分类、功能及其在生产中的应用研究进展进行了综述。