蛹虫草固体发酵生产虫草素的条件优化

用直径6 cm,高10 cm聚乙烯培养罐固体发酵蛹虫草(Cordyceps militaris),以固体发酵产物中虫草素含量为指标,从16个蛹虫草菌株中筛选出虫草素含量最高的菌株,考察固体发酵该菌株的培养基组成、培养时间、培养基装量、料液比、培养温度、接种量和添加物对虫草素含量的影响,得到了有利于蛹虫草固体发酵产虫草素的培养条件:培养罐装20 g小麦,按小麦干重6％的量分别加入玉米粉和黄豆粉,按料液比1∶1.4(w∶v,以小麦干重为基准)加入营养液(g/L:2.0 K2HPO4·3H2O,0.5 MgSO4·7H2O,16甘氨酸),培养温度为26℃,时间46 d,接种量10％.     

开菲尔蛹虫草发酵乳保健饮料的研制

本文通过以开菲尔粒为发酵剂,对开菲尔蛹虫草发酵保健饮料工艺条件进行研究。通过单因素及L_(9)(3^(4))正交试验得出最佳工艺参数为:蛹虫草菌丝体的添加量为15%,开菲尔接种量为6%,白砂糖的添加量为6%,蔗糖酯添加量0.6%,发酵温度为30℃,发酵时间为24h。L_(9)(3^(4))正交试验影响产品品质的主次因素为发酵温度>发酵时间>开菲尔接种量>白砂糖添加量。在此工艺条件下制得的产品营养丰富,口感细腻,风味独特,具有一定的保健功效。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

蛹虫草菌丝体深层发酵培养加工虫草酸奶研究

采用液体深层培养法,将活化的蛹虫草斜面菌种,经摇瓶培养、发酵罐扩大培养,得到含有蛹虫草有效成分的菌丝体,通过调配、灭菌、接种乳酸菌、发酵等工艺生产蛹虫草酸奶。本工艺比常规蛹虫苹酸奶加工方法具有明显的优势。     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

蛹虫草液体深层发酵的研究

以蛹虫草菌丝体生物量为指标,运用单因素对比试验和正交实验,对蛹虫草液体培养基的碳、氮营养源以及最佳配方和培养条件进行了优化研究。结果表明:筛选出蛹虫草液体培养基最佳碳源为蔗糖,其次为麦芽糖;最佳氮源为酵母膏,其次为蛋白胨。筛选出蛹虫草液体培养基适宜配方为:蔗糖3%、酵母膏3%、KH2PO40.1%、MgSO40.15%;液体培养适宜条件的温度为24℃,pH 5.5,接种量为15%,摇瓶转速为140 r/min,发酵罐通气量为1∶1.2~1∶1.6V/(V.min)。     

蛹虫草菌丝体蛋白高通量发酵生产技术研究

为了获得高产量的蛹虫草菌丝体蛋白,利用高通量液体发酵技术,在菌丝快速生长阶段,通过连续补料方式调节发酵底物,加快菌丝对物料的持续利用,提高菌丝体的生物量及菌丝体蛋白质含量。试验通过对液体发酵参数的研究得出,当发酵液p H为4.10～4.20,发酵液还原糖含量18 mg·m L^-1左右,200 L发酵罐连续补液4次(3.5 L/次,含浓氨水96 m L、葡萄糖1 200 g、酵母膏360 g),发酵69 h,获得的菌丝体生物量为2.360g·100^-1m L^-1,菌丝体蛋白得率达46.5%,菌丝体蛋白含量1.098 g·100^-1m L^-1;比普通一段式发酵时间缩短3 h,菌丝体蛋白含量提高68.92%。     

蛹虫草膏的研制初报

以蛹虫草深层培养所获得的菌丝体为原料，以普通食用的卡拉胶为载体，将蛹虫草菌丝体与食用的卡拉胶有机结合，所制得的蛹虫草膏产品不仅色、香、味、形俱佳，而且营养丰富、绿色保健、成本低廉、方便食用，是一种受消费者欢迎、销售市场广阔的新型保健食品。     

红曲霉与蛹虫草固体共发酵初步研究

采用正交试验法优化红曲霉菌株MT305与蛹虫草菌株CM9—26共发酵培养基组分。结果,色价最高的培养基组分是葡萄糖、蛋白胨、CaCl2或KH2PO4,分别是菌株MT305单独发酵和优化前共发酵的3倍和2．5倍;虫草菌素含量最高的培养基组分是可溶性淀粉、NaNO3、CaCl2,是菌株CM9-26单独发酵和优化前共发酵的2．5倍和2．7倍;腺苷含量最高的培养基组分是蔗糖或可溶性淀粉、酵母膏、CaCl2或KH2PO4,是菌株CM9—26单独发酵和优化前共发酵的5．1倍和3.3倍。综合考虑色价、虫草菌素和腺苷3个指标,初步优化的共发酵培养基是大米、可溶性淀粉、NaNO3和CaCl2。     

液体发酵培养富硒蛹虫草菌丝体优化条件的试验

以四因素三水平的正交试验设计培养条件,在24℃±1℃,180 r/min条件下,对蛹虫草菌进行液体培养,测定菌丝体干重,得到了最佳菌株是川草SC0341,而最佳液体培养基是麦芽粉培养基、最适pH 6.8、增稠剂羧甲基纤维素的最佳用量为0.45％.并且确定麸皮粒型种可作为试验使用的良好试管菌种.用试验测得的最优条件下所得液体发酵培养基,在培养液中加入6 μ.g/mL的Na2SeO3,蛹虫草菌丝体硒吸收率达39.22％,菌丝体干重(1.00±0.05) g/100 mL.试验收获的蛹虫草菌丝体营养价值高、成本低,为中小食品企业研发功能型保健品添加剂提供了一实验模型.     

蛹虫草(Cordyceps militaris)的交配型研究

利用可以在人工条件完成整个生活史的蛹虫草菌种,分离、鉴定了2个蛹虫草菌株子囊孢子的单孢分离物,对子囊单孢的配对培养和子实体诱导结果显示,蛹虫草具有典型的二极性异宗配合习性。     

北虫草变异性研究

研究北虫草真菌在人工栽培生长过程中,由于基因发生突变而表现的真菌生物变异性.结果表明,在温度18℃～25℃,湿度45%～60%,每日光照培养10 h的情况下,获得了稳定传代的白色虫草子实体.北虫草真菌在人工培养的条件下,基因发生自然突变,并能够稳定地遗传,北虫草真菌与其它生物物种同样在生长过程中具有变异性.     

蛹虫草的人工培育历程

回顾了蛹虫草人工培育的研究历程,对虫草素的生物合成途进行总结。对影响蛹虫草子实体生长的一级控制及二级控制因素进行讨论,并针对虫草种植行业今后发展方向提出一些建议。     

人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸成分测试分析

通过对人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸的测试分析,结果表明：在野生蛹虫草中含有的１７种氨基酸,在人工培育蛹虫草中几乎都含有,并且在以蚕蛹为培养基质生长的蛹虫草中氨基酸总量及人体必需的八种氨基酸总量均高于野生型及其它人工培育型的蛹虫草。     

家蚕蛹虫草的毒性研究(待续)

家蚕蛹虫草大、小鼠雌、雄性经口LD50大于10.0g/kg体重,根据急性毒性分级标准,其大小鼠急性经口毒性属于实际无毒类.致癌、致突变、致畸试验阴性.家蚕蛹虫草大鼠30d喂养试验各项指标均未见明显毒性反应,其最大无副作用剂量为4.0g/kg体重.     

蛹虫草活性成分的测定

分别用薄层层析法和高碘酸氧化法测定了蛹虫草(Cordyceps militaris)、冬虫夏草(C.Sinensis)及其发酵菌丝中腺苷和甘露醇的含量。结果证明,蛹虫草Y3菌株发酵菌丝的甘露醇含量达16.04％,明显高于天然蛹虫草。不同来源的蛹虫草的腺苷含量相近,为1.4％左右。刚联苯三酚自氧化法测定了蛹虫草的SOD)活性,人工栽培的蛹虫草SOD)活性最高,为1882U/mgPr。上述结果表明,蛹虫草具有和冬虫夏草相似的药效成分,有重要的开发应用价值。     

蛹虫草液体菌种培养基的优化

通过正交实验优化蛹虫草液体菌种培养基,以干菌体得率为指标,选择出蛹虫草液体发酵的最适培养基。结果表明:最适液体培养基配方为:葡萄糖30 g/L,蛋白胨16 g/L,磷酸二氢钾6 g/L,硫酸镁2 g/L,水1 000 mL,pH自然,干菌体得率为46.5 g/L,与其它试验组结果的差异显著,说明碳源和氮源为其生长的最重要营养因素。     

蛹虫草继代培养后主要生物学性状的变化

本研究观察了野生和栽培蛹虫草菌株在继代培养过程中主要生物学性状的变化。结果显示,随着培养代数的增加,蛹虫草的生物学性状发生了明显的改变,表现为菌丝生长速率逐渐下降,菌落颜色逐渐变淡并有角突变出现,产孢量明显减少,子实体形成能力也逐渐减弱甚至不能产生。为防止蛹虫草菌株的退化,应尽量减少在人工培养基上的培养代数。     

北虫草菌种复壮方法的比较

以已退化的北虫草菌种为试材,采用孢子分离、组织分离、活体蚕蛹、基内菌丝分离、蚕蛹回接等5种菌种复壮法,研究了不同复壮方法对退化菌种复壮效果的影响。结果表明:经活体蚕蛹复壮法得到的菌种在菌丝生长速度和子实体产量均是最高的,菌丝生长速度提高了29.97%,子实体产量提高了383.93%,故确定活体蚕蛹复壮法是5种方法中最好的虫草菌种复壮法。