用免疫胶体金试纸膜快速检测IBDV的研究

用免疫胶体金试纸膜分别检测了GX8／99株超强毒传染性法氏囊病病毒(vvIBDV)不同传代毒、全国部分省市IBDV地方野毒、鸡胚传代毒、细胞传代毒、临床病料及其他病原材料，试验研究结果表明免疫胶体金试纸膜法与琼脂扩散试验(ACP)相比，具有特异、敏感、快速、简单等特点，不需要特殊的专业技能和其他试剂，能够识别不同的IBDV毒株，包括强毒和弱毒。为IBDV开辟了一条新的、快速的检测途径。     

不同免疫方法制备IBD卵黄抗体的效果比较

用6种不同的免疫方法接种健康产蛋母鸡所制备的卵黄抗体，用琼扩法测定免疫后不同时期的卵黄抗体效价，并将其作1：4稀释后用于临床治疗试验。结果表明，以第5组（首免肌注自制油乳剂灭活苗2ml/只，1周后同上法二免）效价最高，总有效率达98%以上，12h后症状即见明显好转。     

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

应用单克隆抗体探针检测IBDV病毒抗原

应用单克隆抗体２Ｅ６和２Ｇ１０对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｐ３００９株作免疫斑点试验，检测细胞培养物法氏囊组织和脾组织中的ＩＢＤＶ抗原。这两株单克隆抗体探针测定病毒抗原的界限为４８ｎｇ。应用这两株探针检测出５株血清Ⅰ型和１株血清Ⅱ型的病毒，结果显示具有显著的特异性。这两种探针与来自７株其他非相关禽病病毒抗原不发生交叉反应。探针检测ＩＢＤＶ抗原，在接种后两天即可从小鸡囊和脾脏组织中检测到。用这两     

兔源抗IBDV独特型抗体疫苗的制备

用纯化的抗鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体免疫家兔,将所获效从较高（１：１６）的兔源抗ＩＢＤＶ独特型抗体分别与福氏完全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗,用该疫轩免疫迪卡公雏鸡和ＳＰＦ组鸡,经用ＩＢＤＶ强毒株以点眼和滴鼻方式攻击,试验组的保护率分别为９８／９８,１００／１００,４９／４９,大群免疫接种的应答率为１００％。     

鸡传染性法氏囊病病毒抗体快速检测方法的研究

采用Vero细胞繁殖鸡法氏囊病毒（Infections Bursal Disease Virus,IBDV)，并用PEG方法提纯病毒制备抗原。应用抗鸡血清IgG重链单克隆抗体酶标结合物作为第二抗体，用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鸡血清中的法氏囊病毒抗体，较好地克服了非特异反应问题，该方法简便、快速和特异性好，有较大的推广应用价值。     

珍珠鸡源IBDV的分离鉴定及其卵黄抗体的制备

从一群发病的珍珠鸡中分离到1株病毒,经鸡胚接种、琼脂扩散试验、PCR快速检测试验和病毒基因序列的测定,证实了所分离的病毒为IBDV。将该病毒制成灭活疫苗,接种开产的蛋鸡制备卵黄抗体。结果显示该卵黄抗体经免疫扩散试验测定抗体效价可达1∶256,符合无菌标准,对雏鸡也没有任何不良反应。临床试验表明:该卵黄抗体对该养殖场珍珠鸡的传染性法氏囊病的治疗有效率达91%、预防有效率达100%。     

禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立

针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐，耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷，为了提高检测效率和通关速度，借助胶体金半定量检测技术，以禽流感HI抗体滴度2^4为临界值，研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A／Chicken／Hongkong／SZ-HI／1997（H5N1）病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌，IPTG诱导表达4h后，SDS—PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料，采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡，确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强，与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致，检测HI抗体滴度为2^4鸡血清时结果符合率达94％。     

利用鸡传染性法氏囊病地方毒株制备卵黄抗体

如今,鸡传染性法氏囊病(IBD)在许多鸡场都普遍存在。该病是由传染性法氏囊病毒(IBDV)引起,临床表现为病鸡精神沉郁,羽毛松乱,不好走动,拥挤成堆,排白色稀粪,肛门周围绒毛常有白色粪污,病鸡喜欢啄肛。剖检可见腿肌、胸肌有出血点,法氏囊高度水肿,明显肿大,浆膜面覆盖一层黄色胶状物。切开法氏囊可见充血或出血,内有较多的浆液、粘液或干酪状物。感染后期的病、死鸡,法氏囊则明显萎缩。腺胃、肌胃交界处有出血点。肾肿大,     

猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金，选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体，对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化，组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测，同时用直接荧光抗体试验和RT—PCR做平行试验。结果显示，用试纸条检测猪瘟病毒，10min左右即可显示结果，试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT—PCR的阳性检出率依次为36．36％（4／11）、45．45％（5／11）和72．72％（8／11）。表明，用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便，需时短，可以用于猪瘟的流行病学调查。     

鸡传染性法氏囊病间接ELISA抗体检测试剂盒的研制

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒引起的危害幼鸡的一种急性高度接触性传染病,主要侵害鸡体内起体液免疫作用的法氏囊等淋巴组织,因此该病的危害不仅表现在疫病本身,更重要的是引起鸡体的免疫机能障碍,影响各种疫苗的免疫应答,甚至导致免疫失败.由于免疫抑制,引起继发和并发其它疾病（主要是鸡新城疫、鸡马立克等）,致使死亡率明显升高,是影响养鸡业发展的主要传染病之一.     

检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型（PCV-2） Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时,在检测线和质控线处均出现红色条带;检测阴性样品时,仅在质控线处出现红色条带。该方法与ELISA相比,其灵敏度为89.19%,特异性为100%,并且与PCV-1、猪瘟病毒（HCV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）阳性血清无交叉反应。     

共表达NDV F、IBDV VP0基因重组鸡痘病毒中和抗体消长规律

将海兰褐蛋雏鸡随机分为对照组、肌肉注射组、刺种Ⅰ组和刺种Ⅱ组,用共表达NDV F和IBDV VP0基因重组鸡痘病毒进行免疫,对照组刺种生理盐水,在免疫后的第7,14,21,28,35,42,49 d和56 d采血,分离血清,用固定病毒稀释血清法测血清中抗FPV,NDV,IBDV的中和抗体效价.经分析,抗FPV中和抗体效价及抗NDV中和抗体效价免疫后14 d达到高峰,28 d后下降幅度不明显,42 d时仍保持一定水平;抗IBDV中和抗体效价免疫后21 d达到高峰, 28 d后下降幅度不明显,42 d时仍保持一定水平.     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立便捷、快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的免疫层析方法,本研究利用G蛋白标记胶体金制备金标垫,以PCV2病毒样颗粒(VLPs)和兔Ig G分别作为检测线与质控线组装胶体金试纸条。检测结果显示,该试纸条与A型塞内卡病毒(SVA)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)等猪其它病毒抗体阳性血清无交叉反应,仅对PCV2抗体阳性血清具有高度的特异性;对PCV 2阳性血清最低检测限为1∶6 400稀释度,敏感性较高;批内、批间变异系数CV均小于5%,重复性较好。试纸条在4℃保存6个月,其特异性和敏感性无明显变化。对采集的100份临床血清样品进行检测,该方法与标准ELISA的总符合率为98%。表明本研究建立的PCV2抗体的胶体金免疫层析检测方法具有敏感、特异、稳定等特点,可以做为评价PCV2疫苗免疫效果及其感染筛查的检测方法。     

传染性法氏囊病病毒抗体检测诊断试剂盒的研制与应用

本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７－ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ,在此基础研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断剂盒,经过１２００份血清进行检测,结果表明,本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性本检测提供了可靠的诊断工具。     

CAV基因T程亚单位苗与IBDV二联灭活疫苗的研究

IBDV为自行分离的VVIBDV COB－C1组织毒,毒价为CELD5010^5.0/0.2mL,CAV为VP1和VP2基因克隆进家蚕杆状病毒转基因载体质粒中,后经重组,筛选后获得的重组VP1和VP2基因产物,IBDV经甲醛灭活后与CAV按适当比例混合。1：4与白油佐剂研制成油包水型乳化剂二联疫苗,经安全试验、免疫保护试验证明该二联灭活疫苗安全有效,免疫种鸡群后可使其后代产生IBDV和CAV抗体,雏鸡得到较好的保护。     

牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条的制备

采用SF 9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白抗原,经纯化鉴定后将gD蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的gD抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检测试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等阳性血清无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒抗体ELISA检测试剂盒同时检测112份牛血清,阳性符合率为93.5%,阴性符合率为96.0%,总符合率为94.6%。说明该试纸条可以应用于临床牛传染性鼻气管炎病毒抗体的诊断和检测。     

间接ELISA检测抗传染性法氏囊病病毒抗体方法的建立

采用原核表达的传染性法氏囊病毒(IBDV)核衣壳蛋白VP2作为诊断抗原,建立检测IBD血清抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被量为每孔174.67ng,待检血清最佳稀释度为1:40,待检血清样品的D492nm≥0.43Dpos+0.57Dneg判为阳性,反之判为阴性.对采自安徽省部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%.结果证实,间接ELISA法用于IBDV血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用.     

兔源抗IBDV独特型抗体疫苗的制备

用纯化的抗IBDV抗体作为抗原免疫家兔,将分离制得的致价（1：16）较高的兔源抗IBD独特型抗体分别与福氏完全和福氏不完全佐剂按1：1比例乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗,免疫接种普通迪卡公雏鸡和SPF鸡,然后用IBDV强毒株经点眼和滴鼻方式攻毒,试验组的保护率分别为98／98、100／100、49／49,大群免疫接种应答为100％,具有良好的免疫保护效果。由此也证实了抗独特型抗体疫苗的制备潜在的研究和应用价值。