应用单克隆抗体ELISA阻断试验快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。     

ELISA检测兔出血症病毒抗体的研究

用人“O”型红细胞吸附解脱法提纯制备的兔出血症病毒抗原,成功地建立了ELISA检测兔出血症病毒抗体的方法。实验证明,该ELISA方法敏感、特异,与HI试验结果有极好地相关性。     

用Dot—ELISA检测兔出血症病毒抗体的研究

建立了敏感、特异、稳定的检测兔出血症病毒抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，其敏感性比ＨＩ试验高１００倍以上。结果表明，当抗体效价在１：１６０时，攻毒保护率为５０％，在１：３２０以上时保护率为１００％。据母源抗体的动态检测结果，仔兔３０日龄时应进行首次免疫。     

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。     

应用间接血凝试验检测兔出血症病毒抗体的研究

应用纯化兔出血症病毒抗原,以戊二醛醛化绵羊红细胞为载体,成功地建立了间接血凝试验用以检测兔出血症病毒抗体.与血凝抑制试验和琼脂双扩散试验比较,其敏感性比血凝抑制试验高32倍,比琼脂双扩散试验高1024倍.致敏红细胞于4°C保存四个月仍有效.     

兔病毒性出血症病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

建立一种检测兔病毒性出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法。对RHDV陕西分离株VP60基因进行原核表达,Western blot分析表达产物的免疫反应性;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP60蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为42.34 ku的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被浓度2.9μg/mL,37℃2 h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2 h,待检血清37℃孵育1 h,酶标抗体1∶10 000稀释,37℃作用1 h,37℃显色5 min,临界值为0.340;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与血凝抑制试验的符合率为74.1%,与商品化试剂盒检测结果符合率为94.8%。该方法可用于临床样品的大批量检测。     

应用单抗间接ELISA检测兔出血症病毒的研究

建立了用于检测脏器组织中兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）抗原的单抗间接ＥＬＩＳＡ法，并与血凝试验（ＨＡＴ）和多克降双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法进行比较，在被检的７８９份样品中，种方法检测结果皆为阴性的有５５１份，皆为阳性者１７３份；单抗间接ＥＬＩＳＡ和多克隆双体夹心ＥＬＩＳＡ均为阳性者３１份；公多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳ为阳性者３１份；仅ＨＡＴ为阳性者２份；仅单抗间接ＥＬＩＳＡ为阳性者１份。实验结果证实，单抗间接     

兔病毒性出血症病毒重组蛋白VP60间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为建立一种快速的兔病毒性出血症病毒抗体检测方法,本研究以原核表达的重组VP60蛋白作为诊断抗原,建立了检测兔病毒性出血症病毒抗体的VP60-ELISA诊断方法。该方法检测3种常见兔病(兔轮状病毒、仙台病毒和魏氏梭菌)的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12800;批内、批间重复性试验的变异系数分别小于4.9%和6.9%。本研究建立的RHDV VP60-ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为RHDV的抗体检测及流行病学调查等快速诊断提供了一种技术手段。     

兔出血症Dot—ELISA双抗体夹心诊断法及其应用的研究

以建立的斑点酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测兔出血症病毒抗原.结果表明,对23只病兔各脏器病毒抗原检测,以肝、脾的检出率为最高.对人工感染兔各脏器检测,肝脏首先出现病毒抗原,其次是脾脏;各脏器病毒抗原含量依次为,肝>脾>肺>肾>心.用该法从人工感染24h后兔的口腔、鼻腔分泌物及粪便中检出了病毒抗原,表明病兔可通过消化道和呼吸道排毒.与血凝试验对比检测兔出血症可疑标本192份,两者符合率为90.6%.     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。     

兔病毒性出血症病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及其临床应用

为了建立一种快速的兔病毒性出血症病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的RHDV基因序列,RT-PCR扩增了长约510bp的VP60基因片段,连接PGEX-4T-1表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组VP60蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测兔病毒性出血症病毒抗体的VP60-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为RHDV的快速诊断、免疫兔群抗体监测和实验兔等级检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

西藏兔出血症动态病理学研究

用兔出血症病毒西藏株人工感染３月龄左右家兔，分别于接种后８，１６和２０－２６ｈ扑杀，对心，肝，脾，肺、贤，脑肠，胸腺，圆小囊，骨髓等作肉眼及组织病理学观察。结果，感染后８ｈ，肝，肾，心实质细胞表现一定程度的病理损伤，其他器官均表现不同程度的充血，瘀血等变化；感染后１６ｈ，各器官的呈现不同程度的坏死，出血及透明血栓形成等病变；濒死期全身器官均受到严重损害，微血管内形成大量透明血栓以及出血，水肿，炎性