湿地松及其杂种的体细胞胚胎发生与植株再生

【目的】明确适合湿地松Pinus elliottii及其杂交种的体细胞胚胎发生条件,建立体胚成熟萌发的技术。【方法】以2016年6月采集的2个湿地松家系(EE1,EE2)、2个湿地松杂交种家系(EC,EH)的未成熟合子胚(含胚乳)为材料,从诱导、增殖、成熟到萌发配制3个系列培养基,比较外植体采集时间、家系、基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。用显微镜进行胚性愈伤组织鉴别后,进一步挑选诱导形成的胚性愈伤组织进行增殖、成熟、萌发,最终获得再生植株。【结果】湿地松及其杂交种合子胚的发育进程可划分为8个阶段,阶段Ⅱ、Ⅲ为未成熟胚,适合体胚发生,EC最早出现阶段Ⅲ合子胚。外植体诱导产生具有胚性胚柄团(ESM)结构的胚性愈伤组织,可进一步增殖。诱导培养基对愈伤组织形成及胚性愈伤组织占比具有较大影响,3种诱导培养基(T1、T2和T3)产生愈伤组织效率最高的为T1培养基(49.0%),胚性愈伤组织所占愈伤组织的比例最高为T2培养基(22.4%)。培养基配方的诱导率存在基因型间的差异,T1培养基整体诱导率低;T2培养基对家系EE1诱导率最高,为5.82%;T3培养基对参试材料均能诱导成功,且平均诱导率最高,为3.75%。随采样时间延后,家系EE1、EH的体胚诱导率逐渐增加,家系EE2、EC的体胚诱导率则随采样时间延后逐渐降低。体胚诱导率与合子发育阶段结果基本一致,阶段Ⅲ合子胚均出现较晚,前期诱导率低。胚性愈伤组织继代24次以后,胚活性逐渐降低。成熟培养基T1S和T3S可完成胚的成熟,平均每克成熟培养基分别成熟23.3和15.9个子叶胚,萌发率为32.1%,移栽保存率为47.8%。【结论】诱导培养基T3对参试家系均能诱导成功,T3具有较广泛适用性,各家系在阶段Ⅲ合子胚出现时表现出较大的诱导率,阶段Ⅲ合子胚可能为体细胞胚发生的最佳诱导阶段。建立了湿地松及其杂种体细胞胚发生方法并形成了再生植株。     

枸杞体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以甘肃农业大学林学院实验基地内“宁杞 2 号”枸杞为材料,幼果用 0.1 % HgCl2进行消毒,在无菌条件下取出未成熟胚进行诱导,在胚成苗后进行继代和生根培养。培养结果表明:以 MS 为基本培养基,附加 6-BA1.0 mg/L和 IBA0.5 mg/L对体细胞胚胎诱导最有效;在 2,4-D为 1.0 mg/L和 1.5 mg/L时的培养基上胚性愈伤组织诱导率较高,分别为 51.0 %和 56.7 %;黑暗低温(10℃)处理 5d 不但可以促进细胞胚胎的发生,而且可以提高其发生的频率(60.0%)。     

三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生研究

以三叶木通成熟种子的幼胚为材料,探讨不同浓度2,4−D（1.0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、6−BA（0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、KT（0.2、0.5、1.0 mg/L）的植物生长调节剂对三叶木通愈伤组织的诱导及体细胞胚胎发生的影响,分别筛选出诱导愈伤组织、体细胞胚、次生胚增殖、植株再生的最适培养基,以此间接途径建立三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明：三叶木通种子最佳灭菌处理方式为0.1 % HgCl₂灭菌18 min,无菌水冲洗干净后接种在添加了0.05 % PPM的愈伤诱导培养基上;三叶木通幼胚诱导愈伤组织的最佳培养基是 MS+2.0 mg/L 2,4−D+0.2 mg/L NAA,愈伤诱导率为95.67%;胚性愈伤诱导三叶木通体胚发生的最佳培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L 6−BA,体胚诱导率为55%;次生胚增殖的最佳培养基为MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6−BA,增殖倍数达19.84,体胚随继代次数增多逐渐分化,次生胚增殖活力变弱;成熟的体胚分化后一部分可再生成苗,在MS中能起到壮苗作用,再生植株转移至人工光照培养箱中炼苗3~5 d再转入V（泥炭土）∶V（蛭石）∶V（珍珠岩）为2∶1∶1的基质中能够稳定生根成活且形态正常。     

毛泡桐体细胞胚胎发生及植株再生研究

以毛泡桐(Paulowniatomentosa)无菌苗叶片和茎段为外植体,在附加NAA0.3mg·L-1或2,4 D0.3mg·L-1与6 BA5～20mg·L-1植物生长调节物质组合的MS培养基上进行体细胞胚胎发生及植株再生的研究.结果表明,毛泡桐叶片和茎段在不同植物生长调节物质组合的12种培养基上愈伤组织诱导率可达100%,但在2,4 D与6 BA植物生长调节物质组合的MS培养基上,叶片和茎段胚性愈伤组织诱导率为0,而在MS+NAA0.3mg·L-1+6 BA17mg·L-1培养基上,叶片和茎段的胚性愈伤组织诱导率分别达到88.3%和46.7%.胚性愈伤组织在该培养基上可发育为成熟的体细胞胚胎,进而成为完整植株.     

西洋参体细胞胚胎发生及植株再生

西洋参不同外植体诱导愈伤组织的能力存在明显差异,以子叶的愈伤组织诱导率最高。愈伤组织的分化能力随继代培养而增强,5％聚乙二醇可促进西洋参体细胞胚胎的发生。去除硝酸铵有助于西洋参再生小植株根系的生长发育。     

烟草体细胞胚胎发生再生植株

以烤烟K326、红大、云85叶片诱导的愈伤组织为材料,在含不同激素配比的培养基上进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力.结果表明:不同品种之间体胚的发生能力存在较大差异,不同激素配比诱导体胚发生的频率也不同,K326、红大、云85体胚最高的发生频率分别为8.3%、47.4%和61.1%;最佳激素配比分别为2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA、2.0mg·L-1NAA+0.2mg·L-1BA和2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA.试验中观察到烟草体胚发育的各阶段,并最终再生成完整植株.     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

[目的]对日本落叶松体细胞胚胎发生进行系统研究。[方法]以日本落叶松5个品种的未成熟合子胚为外植体,研究基本培养基、品种基因型、杂交系和纯系品种对日本落叶松愈伤组织诱导的影响,以及ABA对体细胞胚成熟及植株再生的影响。[结果]通过对日本落叶松胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的成熟培养获得再生植株。2种基本培养基中,DCR对胚性愈伤组织的诱导频率最高,达54.0%;落叶松品种之间的愈伤组织诱导率有差异,以杂交品种愈伤组织的诱导率最高,达71.4%,优于纯系的落叶松品种（27.3%～50.0%）;在体细胞胚的成熟培养过程中,ABA可严重影响体细胞胚的发育,并影响到其以后的萌发能力和植株再生。[结论]杂交品系更有利于胚性愈伤组织诱导,ABA对日本落叶松体细胞胚胎发育起重要作用。     

玉米(Zea mays L.)体细胞胚状体的发生和植株再生

在 mMSA、mMSB 和 N_6C 三种培养基系列中分别培养11个玉米自交系的未成熟胚,其中10个系的幼胚盾片能诱导产生胚性愈伤组织和胚状体,并能再生植株。试验结果表明,适当调节培养基系列中不同培养基的蔗糖浓度能有效地促进胚状体的发生。通过扫描电镜观察了玉米体细胞胚状体的形态发生过程。部分再生植株移栽成活并结实。再生植株当代(R_0代)均有不同程度的形态变异。所观察的再生植株下一代(R_1代)根尖细胞染色体数目均为20条。文章对影响玉米体细胞胚状体发生的因素进行了讨论。     

麻城油茶体细胞胚胎发生及植株再生

为建立油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的技术体系,以湖北麻城油茶7月中旬幼胚为试验材料,消毒后切块接种于分别附加了2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT和5.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,进行愈伤组织诱导培养.1个月后统计出愈率,两种处理的愈伤组织诱导率分别为83.23％...     

抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生与植株再生

为将抗松针褐斑病湿地松(Pinus elliottii Engelm.)良种快速推广,以未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段对胚性愈伤组织诱导以及ABA与PEG8000对体细胞胚成熟的影响,并探讨了体细胞胚质量及干化条件对体细胞胚萌发的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚最利于胚性愈伤组织的诱导,LP+16 mg·L~(-1)ABA+180 g·L~(-1)PEG8000+2 g·L~(-1)AC适合于体细胞胚的成熟,高质量体细胞胚经"滤纸容器法"干化2周后萌发,萌发的体细胞胚于1/4WPM+0.3 mg·L~(-1)NAA+1 mg·L~(-1)IBA上培养70 d左右根部发育,转入1/2WPM中,30 d左右侧根产生发育完整的再生植株。     

Direct somatic embryogenesis from leaves,cotyledons and hypocotyls of Hippophae rhamnoides

Direct somatic embryogenesis from leaves,cotyledons and hypocotyls of Hippophae rhamnoides     

玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

沙棘优良抗旱品种离体再生体系的建立和优化

本文在沙棘杂交育种工作和抗旱性综合评价研究的基础上,获得了优良抗旱品种雄性植株无性系,并较系统地研究了该无性系通过器官发生途径实现离体培养,建立和优化再生体系所需的条件。结果表明:春季采集生长旺盛的健康新梢,建立无菌培养体系效果最好,试管苗再生可以通过两条途径实现:1)采用培养基WPM+BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L可以诱导无菌叶片和茎段切口处产生愈伤组织,采用培养基WPM+BA0.4～0.6+IBA0.02～0.03,可以诱导茎段来源的愈伤组织再分化形成大量绿色不定芽点;经继代培养后,不定芽最终可以生长成为具有一定高度和粗度的健壮新梢;在生根培养基1/2WPM+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L上培养20d后,生根率可以达到100%。2)不定芽也可以直接从茎段或叶片的切口处发生,采用最佳的培养基(WPM+TDZ0.01～0.02mg/L+IBA0.01～0.02mg/L)和适宜的试材类型(从无根组培苗上剪取的茎段和从有根组培苗上剪取的叶盘),不定芽发生率可以达到100%,平均每个茎段上产生的不定芽数为4.45个,叶片上产生3.25个;不定芽再经过增殖、伸长、壮苗(培养基为WPM+BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L)后,在生根培养基1/2WPM+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L上培养20d后亦可100%生根。     

体胚发生途径‘大矮蕉''植株的再生

‘大矮蕉'Musa AAA cv. Grande Naine的胚性细胞悬浮系(ECS)在M2液体培养基中预培养1周和2周后,分别将其接种在RD1或M3培养基上,于光照或黑暗条件下进行体胚的再生. 再生体胚在接种后3周左右开始出现,经8周的培养后,在不同预培养时间、再生培养基种类及培养条件下,胚性细胞(团)质量增长了约5～18倍,从沉积细胞体积(SCV)为1 mL的ECS获得的再生体胚数为0.71×105～3.07×105. 植株的再生率及从SCV为1 mL的ECS获得的再生植株数也因上述体胚再生条件的不同而异.     

平茬高度对中国沙棘根蘖能力的影响

林木萌蘖与平茬高度关系的研究目前几乎局限于伐桩萌枝,为探讨中国沙棘根系萌蘖(根蘖数量、生长量、根系扩散)能力对平茬高度的响应规律及其生物量调节机制,对伐桩0、10、20 cm及未平茬(对照)的相关指标进行比较分析。结果表明:随平茬高度增大,根蘖能力及克隆生物量先升后降,且根蘖能力与水平根、垂直根、叶片生物量呈正相关。平茬使克隆对水平根、垂直根、叶片的生物量投资和分配加大,从而增强了根系萌蘖能力。其中,水平根对根蘖数量起主导作用、垂直根对根蘖生长起主导作用、叶片通过促进根系发育而起间接作用。由于水平根、垂直根、叶片生物量随平茬高度的增大先升后降,因此根蘖能力也呈先升后降趋势。     

灰枣体细胞胚胎发生与植株再生研究

采用灰枣组培苗叶片、叶柄、茎段为试材．进行了体细胞胚胎发生的研究。结果表明,叶片、叶柄和茎段在MS＋6-BA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L上的愈伤效果较好;MS＋6～BA0．5mg／L＋2,4-D0．2mg／L＋NAA0．5mg／L比较适合叶柄胚性愈伤组织的形成;在MS＋6-BA1．5mg／L＋IBA0．2mg／L＋GA2．0mg／L,附加蔗糖20g／L．AgNO2．0g／L的培养基上,灰枣体细胞胚胎的发生率最高;MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．01mg／L培养基上的体胚萌发率较高,并且得到了再生植株。     

中国沙棘果实黄酮成分的研究

从中国沙棘Hippophae rhamnoides L. subsp. sinensis Rousi果实中分到3种黄酮化合物,经光谱法和化学反应分别鉴定为槲皮素(quercetin,1),山奈酚(Kaempferol,2)和芦丁(rutin,3).     

早熟陆地棉体细胞培养胚胎发生和植株再生的研究

利用新疆早熟陆地棉品种(系)下胚轴为外植体接种在改良的MS培养基上,分别添加不同的外源激素,诱导愈伤组织及其分化.若接种在固体培养基上培养只能分化产生少量的胚状体,分化时间也长.若将在固体培养基上诱导产生的淡黄色或灰白色且松散的愈伤组织转接到液体培养基上悬浮培养,培养2周左右后,再转接到固体培养基上,即可产生大量的胚状体和胚性细胞团.在不加激素的培养基上,胚状体萌发并健壮生长,从中已获得2个品种(系)的再生植株.