壳聚糖固定化海洋微生物YS2071脂肪酶及其酶学性质

采用壳聚糖为载体,优化了海洋微生物YS2071脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示,在壳聚糖浓度为2% (m/v)、氢氧化钠浓度为12% (m/v)、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v)、与戊二醛交联的时间为12 h及添加2 ml (1120 U)的游离脂肪酶时,固定化脂肪酶的活力最高,其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较,结果显示,游离脂肪酶的最适反应温度为40℃,而固定化脂肪酶的最适反应温度为45℃,固定化脂肪酶的温度稳定性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH均为8.0,脂肪酶经过固定化之后,酸碱耐受性增大。重复利用10次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d,而游离脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出不同的稳定性。     

磁性壳聚糖微球固定化褐藻酸酶的研究

利用反相悬浮交联法制备磁性壳聚糖微球(magnetic chitosan microspheres, M-CS),并对褐藻酸酶进行固定化研究.结果表明,M-CS呈规则的圆球形,具有较好的磁响应性,可稳定地保存在弱酸和弱碱中.其弱碱交换量随着戊二醛用量的增加而减少,悬挂醛基则相应地增加.M-CS对褐藻酸酶的吸附动力学实验表明,M-CS容易吸附褐藻酸酶,但吸附的酶量受载体与酶的比例、溶液的离子浓度、戊二醛的用量、溶液pH的影响明显,而温度对吸附的酶量的影响则相对较弱.酶学性质研究表明,相对于游离的褐藻酸酶,固定化酶的最适温度略有升高,可明显改善其热稳定性和酸碱稳定性,与底物的亲和力也有所增强.     

壳聚糖固定化胰蛋白酶制备魁蚶肽的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化胰蛋白酶,制备魁蚶肽.以肽得率为指标,研究了固定化胰蛋白酶量、时间、pH、温度和底物浓度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解魁蚶蛋白质的影响.结果表明,酶解魁蚶蛋白的最佳工艺条件:固定化胰蛋白酶6 mg,水解反应时间4 h,温度50 ℃,pH 8.0,底物质量浓度98 μg/ml.在此条件下,魁蚶肽得率为23.93%.     

适用鱼油加工的Patatin酯酶固定化及其特性研究

Patatin (马铃薯糖蛋白)是一种酯水解酶,具有脂肪酶催化活性,可应用于脂肪的水解加工。针对游离Patatin酯酶稳定性差且工业生产中酶很难重复利用的缺点,利用ConA (刀豆蛋白A)耦联的纳米磁珠材料固定化Patatin酯酶,以提高其工业化应用的催化特性。通过研究,发现ConA耦联的纳米磁珠的平均吸附率为24.50%。同时筛选出适宜的Patain酯酶固定化材料为PAA (聚丙烯酸)-Fe₃O₄,其最优固定化条件为固定化时间47.2 min,固定化温度25.3℃,磁珠添加量为3.0 mg·mL^-1。Patain酯酶固定化纳米磁珠在40.0℃、pH 7.0时水解底物活性最高,且相比游离Patatin酯酶,其温度耐受性提高了123%左右,pH耐受性提高了47%左右,连续反应5次后仍保留56.60%酶活力,说明纳米磁珠固定化后提高了Patatin酯酶的酶催化特性,为其在水产品如鱼油中的加工应用提供了一种催化性能更强的新酶体系。     

固定化木瓜蛋白酶水解甲壳胺的研究

木瓜蛋白酶经戊二醛固定于自制的甲壳质上制成固定化木瓜蛋白酶，其水解甲壳胺的最佳条件是：45℃，pH4.0的1％的甲壳胺溶液（醋酸缓冲液配置），酶／底物比1：3．5（质量比）。震荡反应24h后，用超滤器分离不同分子量的甲壳胺低聚糖产物，结果产物中分子量小于10000的甲壳胺低聚糖得率约为45．55％，分子量小于5000的约为34．0％，优于游离木瓜蛋白酶水解甲壳胺的效果。此固定化酶可反复使用至少10次以上，总反应时间达192h，提高了酶的使用效率和酶解效果。     

植酸酶的酶学性质研究

以德国巴斯夫植酸酶为对象,研究了pH、温度以及热处理对其活性的影响。实验显示:该植酸酶在pH4.5～6的范围内均有80%以上的酶活性,最适pH为5.5;在温度30～50℃之间具有5 000 U/g以上的酶活性,最适温度为40℃;在80℃热处理20 min可保持90%以上的酶活,在90℃热处理20 min仅剩51.04%酶活。结果表明:pH、温度、热处理对植酸酶均有一定影响,饲料中添加植酸酶应该考虑这些因素。     

不同载体固定化海洋微生物酯酶ETM-b的性能比较

分别采用海藻酸钠包埋法、明胶包埋交联法、壳聚糖吸附交联法制备固定化海洋芽孢杆菌酯酶ETM-b,并对其固定化条件进行了研究。结果发现,壳聚糖制备的固定化酶效果最好,壳聚糖2%、戊二醛浓度1%、小球与酶液4∶3(g/ml)时制备的固定化酶的活性回收最高,达到66%。壳聚糖制备的固定化酶使用10次,相对活性保留70%,具有良好的操作稳定性。固定化酶在非水介质中具有转化α-乙酸萘酯(α-Naphthyl acetate)的能力,在异辛烷、正辛烷、正己烷中活性表现最高。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶制备牡蛎肽的研究

以壳聚糖为载体固定化胰蛋白酶,制备牡蛎肽,然后以肽得率为指标,分别研究了pH值,酶加量,酶解时间和温度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解牡蛎蛋白质的影响。实验结果表明,酶解牡蛎蛋白的最佳工艺条件是:底物浓度为200μg/mL,加固定化胰蛋白酶量7mg/3mL,酶解时间3h,pH 8.0,温度40℃。在此条件下水解牡蛎蛋白,肽得率可达到20.39%。     

亚硝酸盐氧化细菌固定化方法的优化研究

对亚硝酸盐氧化细菌的包埋固定化及其应用进行了研究.选用聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠(SA)混合物作为包埋载体,试验发现混合载体中聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠(SA)的含量、包埋菌液浓度和交联时间对固定化效果有重要影响.利用正交试验对这4个因素进行优化,得到最佳包埋条件为:聚乙烯醇8%、海藻酸钠1%、包埋菌液浓度26 g/L、固定化小球交联时间16 h.对影响固定化菌降解亚硝酸盐氮的因素进行了研究,发现固定化菌的适宜降解条件为:温度30℃、pH 7.0及DOI≥2.0 mg//L.将固定化菌用于养殖水亚硝酸盐氮降解,10 d内将业硝酸盐氮从1.210 mg/L降至0.041 mg/L,具有稳定、持续降解的特点.     

卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶部分活性及性质

采用紫外分光光度法测定了卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶(GST)的活性,并研究温度、pH对GST活力的影响及酶的冷、热稳定性。试验结果表明,卤虫无节幼体内存在GST,酶的最适温度为45℃,最适pH为7.0,该酶高温下不稳定,60℃时酶基本失活。低温下较稳定,4℃保存12 h,活力下降50%;-20℃保存12 h,活力下降20%。