陆川猪和大白猪IGF-Ⅰ基因对生长性状的效应分析

探讨陆川猪和大白猪IGF-Ⅰ基因多态性与生长性状的关系,以期为猪生产性状标记辅助选择候选基因提供理论依据.试验采用PCR-SSCP技术,在陆川猪和大白猪群中进行了IGF-Ⅰ基因的基因型频率检测及不同基因型的生长性状效应分析.结果表明,IGF-Ⅰ基因对陆川猪和大白猪的断奶重和平均日增重影响显著(P＜0.05),对初生重影响不显著(P＞0.05).     

大白猪MUC13基因多态性与生长、肉质性状的相关性

选择对仔猪腹泻有显著影响的产肠毒索大肠杆菌（ETEC）F4ac的受体基因MUC13为研究对象,采用PCR-SNaPshot判型与常规育种技术相结合的方法,对544头大白猪核心育种群进行基因判定及基因型与生长、肉质性状相关性的研究．结果表明,大白猪MUC13基因型分布大小为：腹泻易感杂合基因型GA〉腹泻抗性纯合基因型GG〉腹泻易感纯合基因型从,腹泻抗性有利基因G的等位基因频率为0．669,腹泻易感不利基因A的等位基因频率为O．331．3种基因型个体达100kg日龄及其估计育种值（EBV）、达100kg背膘厚及其EBV的大小为：从〉GA〉GG;眼肌面积、肌内脂肪含量和估计瘦肉率的大小为：GG〉GA〉AA,差异不显著（P〉0．05）．可见,在种猪选育上,逐代选择带有G等位基因的个体,建立抗性纯合GG基因型个体的种猪核心群,即可降低仔猪腹泻率,又不影响生长和肉质的性状．     

不同日龄大白猪视黄酸γ基因的表达研究

[目的]探索不同日龄大白猪视黄酸γ基因的表达规律。[方法]以大白猪为试验材料,采用RT-PCR方法对其RARγ基因在1日龄9、0日龄1、80日龄2、70日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。[结果]在大白猪的整个生长发育期内,RARγ基因在其子宫和卵巢中持续表达,而且在子宫中的表达量一直持续较高,且不同组织间的表达量差异不明显。在360日龄时所检的11个组织均表达该基因,且表达量较高。[结论]该研究为进一步探讨RARγ基因在猪体内运载视黄酸过程中所起的作用及其他生理功能奠定了基础。     

近交五指山小型猪SLA-DQA基因的克隆及在大肠杆菌的原核表达

采用RT-PCR方法扩增五指山猪SLA-DQA基因cDNA,克隆入测序载体,测序结果与Gene Bank(登陆号:AY243104)的序列相同,大小为768 bp,该基因编码255个氨基酸残基和一个终止密码,预计蛋白分子量为28 kD.将这个基因克隆到原核表达载体PET-28a(+)中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确,插入到表达载体中,阅读框是正确的,从而构建成重组表达载体PET-28a(+)-DQA.重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳分析,结果表明得到了与预计分子量相同的蛋白.     

大白猪pGH基因的多态性与生长性状的关联研究

本研究利用HRM分型的方法检测了大白猪生长激素(pGH)的多态性,并对其与生长性状进行关联性分析。以246头大白猪作为研究对象,利用DNA提取试剂盒提取耳组织DNA,对20个样本进行PCR扩增后,通过测序方法寻找该基因在该群体中的多态性位点,针对已发现的多态性位点设计HRM专用引物,利用HRM方法对剩余226头大白猪进行多态性检测,将所得结果与生产数据进行关联性分析。结果表明,在pGH基因中检测到一个突变位点1856CT,两个等位基因C和T,三种基因型CC、CT和TT。通过χ~2适合性检验显示,该基因的基因型频率和等位基因频率在小种群中分布差异不显著,符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),但在大种群中该基因的基因型频率和等位基因频率分布差异显著,不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。根据多态信息含量(PIC)分析显示,pGH基因在小群体中该群体处于低度多态(PIC0.25),但在大种群中属于中度多态(0.25PIC0.5)。在与生长性状的关联分析中发现,pGH基因对于20天重以及二月龄重具有较为显著的影响(P0.05)。综上所述,pGH基因对大白猪的生长发育具有一定的影响,为后续大白猪肉质性状与生长性状的现代分子选育提供一定的参考。     

CD163基因敲除大白猪的抗蓝耳病性能和主要生产性能研究

【目的】运用CRISPR/Cas9基因编辑技术和体细胞核移植技术获得CD163基因全敲除(CD163 gene knockout,CD163-KO)的克隆猪,验证该基因敲除大白猪的抗蓝耳病特性,并研究其与野生型大白猪在生理、生产和繁殖性能等方面的差别,评估CD163-KO大白猪的主要生产性能。【方法】用猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株NADC30-like对本研究所获得的11头CD163-KO大白猪和5头年龄、体质量相当的野生型大白猪进行攻毒试验。连续14 d观察猪的临床症状,记录直肠温度变化,检测血清中PRRSV病毒含量和抗体水平。14 d后取肺部组织进行切片,通过PRRSV免疫荧光试验观察肺脏感染情况。采集CD163-KO和野生型大白猪肺泡巨噬细胞进行免疫染色,观察肺泡巨噬细胞表面CD163蛋白的表达情况;采集猪外周血单核细胞进行诱导分化,观察CD163-KO与野生型大白猪诱导分化的巨噬细胞对血红蛋白-结合珠蛋白复合物的摄取情况。最后,统计分析CD163-KO与野生型...     

大白猪生产和繁殖性状遗传趋势的分析

配合混合模型,用非求导的REML方法（DF-REML）分析估计了大白猪生产和繁殖性状的表型和遗传趋势。165日龄体重、90kg体重平均背膘厚和总产仔数的表型趋势分别为1.64、-0.23和0.11,遗传趋势分别为0.76、-0.14和0.01。结果表明,大白猪品系选择试验的165日龄体重和90kg体重背膘厚两个主选性状的选择是显著有效的,生长速度逐代提高,背膘厚逐代下降。辅助的体型选择使得大白猪体型结构逐渐向结实型发展。产仔数的遗传趋势是弱的有利变化,表明在对生长速度与背膘厚合并选择时,对繁殖性能的影响很小。     

大白母猪繁殖性状的相关及通径分析

通过对大白猪繁殖性状的测定,进行了繁殖性状间的相关及通径分析,结果表明本场的大白母猪的繁殖性状较优,但尚不够整齐,有待进一步选育提纯。     

不同日龄大白猪视黄素X受体γ基因的表达研究

本研究采用RT—PCR方法对大白猪的RXR—γ基因在1日龄、90日龄、t80日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大畅、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXR—ymRNA在大白猪的心脏、脾脏、大肠、小肠和肌肉组织中持续高表达,而肾脏不表达该基因,肝脏组织也只在360日龄时有微量表达。     

大白种猪的选育进展

组建10个独立血统10头公猪、80头母猪舍3个品系的大白核心选育群,开展高性能专门化品系选育.通过场内种猪测定,采用闭锁与开放相结合的选育策略,应用GBS育种软件估计单项育种值,计算个体综合选择指数.经过4个年份的选育,2009年份比2006年份平均校正增重公猪提高7.90%,母猪提高7.41%,均达到差异显著(P<0.05),达100kg体重日龄缩短了1.176天:平均校正背膘厚公猪下降了9.54%,母猪下降了7.54%,均达到差异显著(P<0.05%),达100kg体重背膘厚EBV值减少0.159mm,母猪总产仔数逐年提高,产仔数EBV值增加0.029头,但改进不明显;综合选择指数提高了3.84%,选育达到预定的育种目标.     

马身猪和大白猪背最长肌Rac1基因发育性表达研究

[目的]探究Rac1基因mRNA和蛋白质在马身猪和大白猪背最长肌组织中的发育性表达规律,揭示Rac1基因与猪肌肉发育之间的关系。[方法]采用qRT-PCR和Western blot技术检测马身猪和大白猪从1日龄到180日龄(1、30、60、90、120、150和180日龄)阶段背最长肌中Rac1基因的表达规律。[结果]Rac1基因mRNA在大白猪1日龄、120日龄和180日龄时表达量较高,与其他日龄相比差异极显著(P0.01),其他日龄表达量均维持在较低水平;马身猪60日龄时Rac1 mRNA表达量最高,极显著地高于其他日龄(P0.01),90日龄次之,其他日龄表达水平较低,且日龄间表达量无显著差异。在蛋白质水平上,从1日龄到180日龄,大白猪Rac1表达量整体呈先降低后升高的趋势,在1日龄时表达量最高,120日龄表达量最低;马身猪整体呈先升高后降低的趋势,60日龄时表达量最高,极显著高于其他日龄(P0.01),随后几个月龄的表达量处于较低水平,显著低于1日龄和30日龄(P0.05)。品种间比较,马身猪Rac1蛋白表达量始终高于大白猪,且在1日龄和60日龄,差异极显著(P0.01),在120日龄和150日龄,差异显著(P0.05)。[结论]猪背最长肌中Rac1基因mRNA和蛋白质的表达量与猪的年龄及遗传背景有关。     

猪Krox20基因的cDNA克隆与表达分析

根据已报道的人和鼠的Krox20基因,以同源性高的区域设计1对简并引物,以猪脂肪组织RNA为模板,通过RT-PCR方法,获得了猪的Krox20基因的部分cDNA,长度是938bp。多种组织的半定量RT-PCR研究表明,仔猪时期,该基因在心脏、肝脏、脾脏、大肠、小肠、脂肪组织和肌肉中均有表达,9月龄成年猪也在上述组织中有所表达,但是表达量不如仔猪,并且还在性腺中检测到该基因的表达。     

榕江香猪Noggin基因的组织表达

采用RT-PCR的方法对榕江香猪Noggin基因的组织表达进行研究,结果显示,Noggin基因在大脑、卵巢、子宫表达,其中大脑的表达量显著高于卵巢和子宫组织（P〈0．05）;脾、肺、脊髓、肝、肾等组织中未检测到Noggin基因的表达;对脑、子宫和卵巢检测分子长194bp的cDNA片段进行测序后,证实表达的片段为Noggin基因,与马、人、鼠、鸡和青蛙存在2～66个碱基的差别。研究结果证实Noggin基因在香猪的大脑、卵巢和子宫中表达,对这些组织可能有直接的调节作用。     

民猪PGD和LDHA基因的表达与冷诱导研究

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A (Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一.为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是否起着一定的生物学作用...     

民猪NUMB基因克隆与组织表达分析

研究采用RT-PCR技术结合克隆测序方法,克隆出全长2 004 bp NUMB基因序列,其中包括1 782 bp开放读码框,该基因编码592个氨基酸。利用生物信息学分析软件对该基因氨基酸序列预测与分析发现:NUMB蛋白二级结构中,转角占很大比例,且蛋白亲水性较强,结构功能域分析发现该蛋白多肽链存在一个N端磷酸酪氨酸结构域(PTB),位于第37~162氨基酸之间。基于不同物种NUMB蛋白序列所构建分子进化树表明,猪与牛、骆驼亲缘关系最近,而与斑马鱼最远。在m RNA水平上,NUMB基因肺中表达量最高,大肠中表达量最低。     

民猪LPL基因真核表达载体的构建

为了进一步分析脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)基因的生物学功能。采用克隆测序的方法获得了民猪LPL基因的完整CDS序列,将其克隆到pMD-18T载体上,将测序验证正确的基因序列插入到pcDNA3.1(+)质粒载体中,构建了pcDNA-LPL真核表达载体。结果表明,所得序列与GenBank中登录的猪LPL基因同源性为99.30%,说明LPL基因的真核载体构建成功。该研究为在细胞水平上研究LPL的表达和功能奠定了试验基础,为进一步分析LPL基因功能提供了理论依据。     

阉割对金华猪甲状腺组织GNAS基因表达的影响

为研究阉割对甲状腺刺激性G蛋白α亚基(GNAS)基因表达的影响,采用SYBR Green荧光定量PCR分析方法,分析60、90和120日龄阉割组与非阉割组金华猪甲状腺组织中GNAS基因的表达水平。结果表明:在3个时期,无论是阉割组还是非阉割组,金华猪GNAS基因的表达水平均是90日龄低于60日龄,而120日龄又高于90日龄;非阉割组60日龄GNAS基因的表达量最高,而阉割组120日龄GNAS基因的表达量最高。阉割组GNAS基因的表达水平在不同的生长阶段均低于非阉割组。结果提示建立的SYBR-Green荧光定量PCR方法可有效地用于GNAS基因的表达分析;阉割会造成猪GNAS基因的表达量下降。     

陆川猪MYL9基因克隆及其表达差异分析

[目的]克隆陆川猪肌球蛋白调节轻链9基因(MYL9),并进行生物信息学分析及检测其在不同猪种中的表达差异,为明确陆川猪骨骼肌生长规律及研究MYL9的生理功能打下基础.[方法]根据NCBI上的家猪MYL9基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆陆川猪MYL9基因,利用在线软件对其进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测陆川猪和杜洛克猪背最长肌中MYL9基因的表达情况.[结果]陆川猪MYL9基因编码区(CDS)序列长519 bp,共编码172个氨基酸;与NCBI上已公布的家猪MYL9基因(NM_001244472.1)CDS序列比对,陆川猪MYL9基因存在2处碱基突变,分别是195 bp处C→A和498 bp处T→C,均为同义突变;陆川猪MYL9基因推导氨基酸序列与家猪MYL9基因推导氨基酸序列的同源性最高,为99.6%,与鸡的同源性最低,为88.4%.陆川猪MYL9蛋白存在3个N糖基化位点和15个磷酸化位点,不存在跨膜结构域和信号肽,符合一般EFh-PEF超家族的结构特征.陆川猪MYL9蛋白二级结构中α-螺旋占54.65%,无规则卷曲占35.47%,β-转角占8.14%,延伸链占1.74%.MYL9基因在杜洛克猪背最长肌中的相对表达量极显著高于陆川猪背最长肌(P<0.01).[结论]MYL9基因序列在不同物种中具有较高的保守性,其在10周龄陆川猪背最长肌中的相对表达量极显著低于杜洛克猪,与其在不同猪种背最长肌中的磷酸化程度有关,也说明MYL9基因对猪肌肉生长速度有一定影响.