K_(88)、K_(99)、F_(41)三价基因工程菌的构建

利用基因工程技术构建的带有K_(99)和F_(41)两种纤毛抗原基因的重组质粒与K_(88)抗原工程菌C_(84)的质粒转化同一受体菌,得到双质粒。同时表达K_(88)、K_(99)、F_(41)三种纤毛抗原的菌株。用小白鼠试验初步证实。该菌株生物学性质稳定,对动物安全,对K_(88)、K_(99)和F_(41)强毒菌的攻击具有较强的保护作用。     

大肠杆菌K_(88)质粒及肠毒素质粒接合转移特性的研究

不同血清群大肠杆菌的K_(88)质粒、发酵棉子糖(Raf~+)及肠毒素质粒的接合转移频率,由于菌株不同,其转移频率也不同,而且K_(88)~+总是伴随Raf~+发生转移。肠毒素质粒虽然也具有可传递性,但机率显著低于K_(88)~+和Raf~+。肠毒素质粒在接合过程中的不活跃性和低接合率,不仅有利于通过接合消除毒力因子(质粒),也相对的提高了K_(88)和K_(99)基因工程菌的安全性。     

表达K_88K_99双纤毛抗原及K_99纤毛抗原的产肠毒素大肠杆菌的构建

应用转化法:将带有K_99纤毛抗原的重组质粒PHK_99分别转化到具有K_88纤毛抗原的产肠毒素菌株B_6(O_149K_91K_(68)ac)“和不具K_88抗原的产肠毒素菌株(O_14K_85),获得了35株抗氨苄青霉素的转化子。在这35个转化子中,有32个能同时表达K_(88)、K_(99)两种纤毛抗原,有3株能表达K_(99)纤毛抗原。这些转化子仍具有产肠毒素的特性。     

大肠杆菌K_(88)-K_(99)抗原工程苗预防仔猪黄痢试验(第二报)

1985年我们用中科院上海植物生理研究所研制的大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗,在桐庐县良种场、乔司农场及杭州种猪试验场预防仔猪黄痢,获得了比较满意的结果。在此基础上,1986年8月—12月,我们在萧山县棉花原种场牧场、萧山县湘湖农场及萧山县良种场进一步做了预防仔猪黄痢试验。用大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗对怀孕母猪作母源免疫,进行预防仔猪黄痢试验。     

大肠杆菌K_(88)-K_(99)抗原工程苗对仔猪黄痢的预防效果

为预防仔猪黄痢病,我们应用大肠杆菌K_(88)-K_(99)抗原工程苗在丽水市良种场进行了预防接种,取得了较好的效果,现简述如下。材料和方法一、菌苗:上海植物生理研究所生产的大肠杆菌 K_(88)-K_(99)抗原工程苗,批号     

大肠杆菌定居因子K_(88)抗原ELISA检测法

本文报告用ELISA双抗体夹心法检测大肠杆菌定居因子K_(88)抗原。K_(88)大质粒转化子和K_(88)基因重组子。结果说明此法灵敏度较高,特异性较好,可直接检测菌液,有快速、简便的优点,可以作为检测k_(88)基因克隆是否表达的一种筛选方法,亦可考应虑用于大肠杆菌k_(88)菌株的检测。     

K_(88)抗原工程菌株构建中的电镜观察

在K_(88)抗原工程菌株的构建中,通过对供体菌、受体菌相接合菌的电镜观察发现,在接合菌C-84中,菌体表面长有纤细、柔韧的纤毛,与供体菌B-5所见相似.而在受体菌1548中,未见有纤毛,证明不含肠毒素质粒的K_(88)抗原,工程菌株的构建已经完成.     

ELISA检测粪便中产肠毒素型大肠艾希氏菌K_(99)抗原

研制了一种采用酶联免疫吸附试验(ELISA)直接检测患病犊牛粪便中大肠艾希氏菌K_(99)抗原的方法。为此用纯化的(凝胶电泳和色层定点法)K_(99)抗原免疫家兔,运用SPDP(不同功能的因子)将获得的特异性免疫球蛋白G同磷酸酶联合。根据对犊牛大肠杆菌病临床病例和一例用大肠艾希氏菌K_(99)~+菌株实验性感染动物的研究,证明本法对检测粪便中K_(99)     

腹泻羔羊中埃希氏大肠杆菌K_(99)阳性菌株的分离鉴定

用Minea培养基从某疫群腹泻羔羊中分离的151株E.coli中。检出K_(99)阳性菌12株,其中6株K_(99)表达非常稳定。用羔羊肠环结扎和乳鼠灌胃测毒,仅K_(99)表达稳定的6株菌呈阳性反应,     

E.coli纤毛抗原K_(99)菌株电子显微镜观察试验

肠致病性埃希氏大肠杆菌(E.co1i)的粘附因子K_(99)抗原,是一种易热蛋白质,从形态上看是一种纤毛结构,这种纤毛可以粘附于小肠上皮细胞,使细菌在小肠中聚集产生肠毒素而致病。这种纤毛的致病作用越来越引起人们的重视,在兽医研究方面,现已发现猪的肠致病性大肠杆菌带有K_(88)、K_(99)和987P三种纤毛抗原,在引起新生仔猪腹泻     

应用MCA-ELISA检测腹泻仔猪粪样中的大肠埃希氏菌K_(88)粘着素抗原

将抗大肠埃希氏菌 K_(88)粘着素抗原的单克隆抗体(MCA)标记辣根过氧化物酶,建立了一种 MCA-ELISA,其对 K_(88)阳性菌株的检测限为1×10~4个菌。本法对113株大肠杆菌分离培养物的检查结果与直接凝集试验结果完全符合,两种方法都检出 K_(88)阳性菌株28个。K_(88)阴性菌株85个。用这一方法从103例腹泻仔猪粪样中检出阳性10例,而用经典分离培养法仅检出6例。     

大肠杆菌K88,K99双价基因苗预防仔猪黄白痢试验报告

引起仔猪黄痢、白痢的埃希氏大肠杆菌荚膜抗原主要有K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)四种,而K_(88)、K_(99)抗原型的大肠杆菌最为常见,也是引起仔猪黄、白痢主要血清型的大肠杆菌.为了探讨大肠杆菌K_(88)、K_(99)双价基因工程冻干菌和抗痢宝对仔猪黄、白痢病预防效果,作了本试验.     

K_(88)、K_(99)基因工程菌菌毛抗原的提纯及其检测

采用SephadexG－100凝胶过滤和酸盐沉淀两种方法从基因工程菌（GHG001）提纯K88、K99菌毛抗原,经SDS－PAGE测定,所提纯的K88、K99抗原的分子量分别为25000和17000道尔顿.     

K_(88 )及 K_(88-)大肠杆菌对仔猪小肠上皮粘着作用的比较研究——用病理组织切片法发现大肠杆菌的另外二种表面粘着素

对人工感染黄痢发病仔猪的小肠作组织切片检查发现,在国内流行的仔猪黄痢病原性大肠杆菌中除了 K_(88)~ 菌株外,还有二类 K_(88)~-大肠杆菌也能粘着于仔猪小肠绒毛上皮。它们对不同动物红细胞的凝集性及它们的表面 K 抗原都互不相同.表明它们各自具有不同类型的表面粘着素。其中一个菌株的血凝持性与国外报导的 K_(99)~ 大肠杆菌很相似,另一类菌株则有待进一步详细鉴定。本文讨论了病理组织切片技术对于发现细菌的未知粘着素的诊断意义。     

K_(88)大肠菌免疫血清治疗仔猪黄痢的效果观察

仔猪黄痢是带有肠上皮细胞吸着素和能生产肠毒素(Ent)的大肠埃希氏菌引起的一种下痢病。近几年来,通过对肠致病性埃希氏大肠杆菌的发病机制和免疫学的深入研究,国内外已开始应用 K_(88)疫苗免疫怀孕母猪,使初生仔猪通过初乳获得母源抗体而得到对黄痢的被动免疫。     

化学诱变剂和紫外线对K88抗原工程菌及产肠毒素性大肠杆菌质粒作用的比较

某些产肠毒素性大肠杆菌可致仔猪黄痢病,危害养猪业。猪源性产肠毒素性大肠杆菌有两种致病因子,其一为肠毒素,其二为粘附因子(即纤毛抗原)。后者有K_(88)、K_(66)、987P和F_(41)四个血清型,但以K_(88)纤毛抗原产生菌居多。现已知道K_(88)基因和肠毒素基     

吉林省猪源致病性E.coli K_(88~ )株的检测及两种检测方法的比较

病原性 E.coli K_(88)抗原的发现(Φrs-kov,1961)大大地推动了大肠杆菌病的研究。近年来,国内外学者就 K_(88)抗原的多种特性进行了大量的研究工作。现已查明:凡具有 K_(88)抗原的 E.coli 株均能吸附在小肠粘膜的绒毛上,并产生两种肠毒素,即热稳定肠毒素(ST)和热敏肠毒素(LT)而导致仔猪发生腹泻。因此,检测病原性 E.coli的 K_(88)抗原无疑对流行病学的调查和免疫学的防治研究起着重要作用。     

仔猪黄痢致病大肠杆菌K_(88)抗原研究——用M.R.E.血凝反应筛选含K_(88)抗原的致病大肠杆菌

<正> 在肠道病原性大肠杆菌引起的仔猪黄痢中,菌体表面抗原K_(88)对于发病和免疫来说都有相当重要的作用。近几年来,国外在预防初生仔猪腹泻上研制出一些效果较好的疫苗,其中主要成分之一就是这种K_(88)抗原。在我国,不但这方面尚未详细研究,而     

河北某农场仔猪腹泻大肠杆菌K_(88)抗原菌株的分离与鉴定

自河北某农场分离的21株仔猪腹泻大肠杆菌K_(88)抗原菌株全部有致溶血作用,并对小鼠显示不同的致病性。其血清分布在8个O抗原组,其中O_8菌株占优势,并在省内首次分离到具有K_(88)抗原的O_8菌株3株。O_8菌株对氟哌酸、卡那霉素、新霉素很敏感,对喹乙醇不敏感。     

K88,K99,987P基因工程三价苗的免疫效力试验

对六个批次的K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗作免疫效力测定。第一次试验,对用三个批次基因工程三价苗被动免疫(通过初乳)的仔猪,以三种强毒菌进行攻击,死亡率上均获得100%保护,黄痢腹泻发病率上获得98%保护;而对照仔猪,对三种强毒菌的攻击,发病率均达100%,死亡率分别是K_(88)为96%、K_(99)为72.7%、987P为80%,平均83.3%。第二试验的另外三个批次的基因工程三价苗的被动免疫(通过初乳)仔猪,虽然三种强毒菌的攻击剂量各增加三分之一,但保护率仍达到与第一次试验一致的结果;而对照仔猪,黄痢腹泻发病率均达100%,死亡率分别为K_(88)100%、K_(99)95%、987P91%,平均95%。