应用RT-PCR方法检测牛轮状病毒的研究

牛轮状病毒主要引起犊牛腹泻,近年来,其国内感染率不断增加,本研究参照牛轮状病毒VP7基因序列,设计合成特异性检测引物,通过RT-PCR反应条件的优化,建立了检测牛轮状病毒的一步法RT-PCR方法,并应用该方法进行了临床样品的检测。结果显示,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。本研究为牛轮状病毒的检测提供了一种敏感、特异、快速、简单的方法,具有很好的临床应用价值,值得推广应用。     

牛轮状病毒及检测方法的研究进展

牛轮状病毒可引起牛严重腹泻、脱水、排出水样稀粪,是一种在世界范围内流行的传染病,严重影响犊牛健康。该病毒感染率高,流行广泛,基因型众多,确诊及防控困难。研究牛轮状病毒检测方法能够更好地掌握牛轮状病毒各基因型的的流行状况,根据流行率高的基因型制备疫苗。本文综述牛轮状病毒的病原特性、流行病学调查、临床症状、病理变化及感染机制,介绍牛轮状病毒的检测方法,以期为牛轮状病毒的研究提供参考。     

ELISA检测荷斯坦牛粪便中轮状病毒抗原及临床意义

本文以秋冬季腹泻的荷斯坦牛为研究对象进行采样,应用轮状病毒单克隆抗体检测其抗原,以检测粪便中的轮状病毒,探讨荷斯坦牛轮状病毒检测的临床价值及本地轮状病毒在不同年龄段荷斯坦牛中的流行情况。结果表明,2月龄以内的犊牛阳性率最高(45%),其次是3～6月龄和6月龄以上的奶牛,分别为36%和17%。表明本地荷斯坦牛轮状病毒感染已普遍存在,主要集中在6月龄以内的犊牛,6月龄以上的奶牛感染率较低。本试验为该地区今后荷斯坦牛轮状病毒的临床检测及其流行病学调查提供参考。     

ELISA检测兰州不同动物粪便中轮状病毒抗原及临床意义

为探讨动物轮状病毒检测的临床价值及本地轮状病毒在不同动物中的流行情况,本研究以秋冬季腹泻的动物为研究对象进行采样,应用轮状病毒单克隆抗体检测其抗原的方法,检测粪便中的轮状病毒。在进行牛、羊、犬粪便轮状病毒检测中发现犬的阳性率最高,其次是牛和羊。表明本地的轮状病毒感染主要集中在幼犬中。本试验为今后动物轮状病毒在临床应用中的检测及动物轮状病毒检测试剂盒的研制等作以参考。     

黑龙江某规模化牛场犊牛腹泻病原检测及防控建议

2020年5-6月份,黑龙江省某奶牛场的新生犊牛出现精神沉郁、消瘦、水样腹泻等临床症状.为确诊发病原因,采集腹泻犊牛肛拭子、粪便等样品20份,采用PCR技术检测牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻黏膜病病毒及隐孢子虫,细菌分离培养和致病性试验鉴定可能的致病细菌.结果表明,在20份腹泻粪样中,未检出牛轮状病毒、牛冠状病毒...     

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立

利用CsCI密度梯度离心化的牛轮状病毒作为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(EuSA).用牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌制备的对照包被抗原与牛轮状病毒阴性和阳性血清反应,其结果均无交叉反应,说明该方法具有良好的特异性,可用于牛轮状病毒抗体的检测.     

牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻/粘膜病病毒5'端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒244 bp片段的RT-PCR一步法。该方法对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒NADL、OregonC24V和长春184毒株各标准毒株检测,结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。检测460份不同样品,与病毒分离试验比较,符合率100%,证明该方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的一步法RT-PCR技术可用于牛病毒性腹泻/粘膜病的检测及流行病学调查。     

应用ELISA检测青海省部分地区牛轮状病毒抗体

<正>牛轮状病毒是引起犊牛腹泻的重要病原之一。在我国,有报道对华东地区牛血清中轮状病毒抗体的调查发现,奶牛、黄牛的抗体阳性率分别达到85.4%和83%,说明我国牛轮状病毒感染较为普遍。轮状病毒的检测主要是针对病毒核酸、病毒抗体或抗原蛋白检测和病毒分离。目前青海省对轮状病毒感染的流行情况尚缺乏系统的研究,鉴此,笔者收集青海省部分地区牛血清样品,进行了牛轮状病毒抗体的血清学     

乳胶凝集反应检测牛轮状病毒感染的结果

使用维尔根轮状病毒乳胶凝集反应检测了临床上出现腹泻症状的１３９头犊牛，同时用补体结合反应试验（补反）与之作对照检测。结果显示：凝反的检出率为９５．６８％，而补反的检出率为７３．３８％，证明此凝反检测牛轮状病毒感染，具有检出率高，快速和操作简便的优点。     

规模化奶牛场犊牛腹泻的病原检测与分析报告

为了调查某规模化奶牛场犊牛腹泻的发病原因,试验采用血清抗体检测、细菌分离培养、寄生虫卵镜检和病毒核酸检测方法对腹泻犊牛的血样和粪便进行了检查。结果表明,该奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病病毒抗体阳性率为65.00%,牛轮状病毒抗体阳性率25.00%,牛冠状病毒抗体阳性率15.00%;分离到1 株结肠弯曲杆菌和1 株空肠弯曲杆菌;所检腹泻犊牛粪便和血液样品中,4 份粪便样品和1 份血液样品检出牛冠状病毒,2 份粪便样品检出轮状病毒,1 份粪便样品和1 份血液样品检出牛病毒性腹泻/黏膜病病毒,同一份粪便样品中同时检出牛病毒性腹泻/黏膜病病毒和牛冠状病毒;通过镜检,球虫卵囊检出率77.78%,在1 份粪样中发现蛔虫卵,2 份粪样中发现其他线虫卵。该牛场流行性腹泻的原因可能为夏季高温潮湿引起犊牛免疫力下降导致的多病原体感染。     

病毒检测信息两则

1、用套式PCR检测A群轮状病毒 德国研究人员研制了一种套式逆转录PCR(RT-PCR)检测A群轮状病毒。这种方法建立在基因片段6的一个靶区。检查了人、牛、猪、狗、猫、马和羊的轮状病毒株,还检查了已经用其他方法检测过     

牛轮状病毒重组VP7蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立

以纯化的原核表达的牛轮状病毒VP7蛋白为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他5种常见牛病病毒(IBRV、BCV、BRSV、ETEC、Cj)的阳性血清无交叉反应,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%;对来自不同牛场的血清样本检测结果显示,该检测方法与病毒中和试验检测结果符合率达87.2%。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为BRV的快速诊断、免疫牛群血清抗体监测及轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR 快速检测方法的建立

本研究按照牛轮状病毒(BRV)结构蛋白VP6基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了BRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术。对BRV进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,TaqMan实时荧光RT-PCR最低可检测到100个拷贝病毒RNA;与牛病毒性腹泻病毒(BVD)、猪瘟病毒(CSFV)、牛结核杆菌(MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)不发生交叉反应;所制作的标准曲线在10²~10⁹拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.997;与常规的RT-PCR相比,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量BRV进行准确检测,对BRV的诊断有重要意义。     

猪轮状病毒检测技术研究进展

猪轮状病毒(PoRV)是导致哺乳仔猪和断奶仔猪腹泻的主要原因之一。该疫病的暴发流行,给养猪业造成巨大的经济损失。因此,快速可靠检测PoRV的方法,有利于及时诊断和防控该病。目前,用于检测猪轮状病毒的方法很多,论文对于近年来检测PoRV的方法进行了论述,包括病毒分离培养鉴定、病毒电镜形态检查、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析试纸条检测技术、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和逆转录-环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)、原位杂交技术(ISH)、纳米孔测序等,并分别介绍了不同检测方法在应用中的优缺点,为有效诊断及防控PoRV感染提供技术指导。     

我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测.在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90).阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型,新疆另一牛场的4份样品属于G6型.对所有阳性样品进行病毒分离,获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26.G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次.     

牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立

牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻,对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合,建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明,CPA体系Mg²⁺最佳物质浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度,60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原,层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线,未出现交叉反应。结果显示,CPA BCoV-N具有较高的特异性,CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器,简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增,封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染,对结果的判断更加直观客观,是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。     

我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G1OP[11]型牛轮状病毒的分离鉴定

应用轮状病毒RNA电泳方法，对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品，平均阳性率为12％（11／90）。阳性样品经RT-PCR分型鉴定，新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型，新疆另一牛场的4份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离，获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株，经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒，命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。     

内蒙古包头市部分规模化牛场BRV流行病学调查

为了解内蒙古自治区包头市部分规模化牛场牛轮状病毒(BRV)的流行情况,在包头市部分规模化牛场采集275份血液样本和300份粪便样本,采用RT-PCR和ELISA方法对血液样本和粪便样本进行牛轮状病毒抗原和抗体检测。结果显示,BRV抗原总阳性率为21.34%,抗体总阳性率为4.00%。在检测样品中,0～2月龄犊牛的抗原阳性率和抗体阳性率均最高,分别为51.00%和10.00%,本研究检测结果可为规模化牛场牛轮状病毒的防控提供参考。     

一例冠状病毒、轮状病毒混合感染引起犊牛腹泻的诊治

2022年3月,河南省某规模化奶牛养殖场发生一起新生犊牛腹泻病例,在流行病学调查、临床症状观察、病理剖检的基础上,采集6头腹泻犊牛的新鲜粪便进行了寄生虫卵检查、小球隐孢子虫、牛轮状病毒、冠状病毒、大肠杆菌K99抗体检测,血液样品进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,组织样品进行了细菌分离。结果表明牛轮状病毒抗原6头阳性,阳性率100%;冠状病毒抗原4头阳性、2头阴性,阳性率66.7%;其他病原均为阴性。根据临床症状、病理变化和实验室检测结果,确诊该病例为牛冠状病毒和轮状病毒混合感染引起的犊牛腹泻。根据诊断结果,采取了改善饲养管理、补液、收敛、止泻等综合性防治措施,疫情得到了有效的控制,为临床防治犊牛腹泻提供了参考。     

新疆部分地区牛轮状病毒VP6基因的原核表达与免疫反应性分析

为了原核表达牛轮状病毒VP6蛋白,检测该蛋白的反应原性,对牛轮状病毒内衣壳蛋白VP6保守区设计并合成引物,表达牛轮状病毒VP6蛋白,应用Western Blot分析该蛋白的反应原性。结果显示,利用PCR方法成功扩增出目的基因,经过测序与酶切鉴定,正确构建了表达载体pET-32a-VP6,SDS-PAGE电泳显示表达产物在60 k D表达重组蛋白。表明经过Western Blot检测,该蛋白具有良好的反应原性,为后续该蛋白作为诊断抗原奠定了基础。