三肽囊素分子生物学研究进展

综述了三肽囊素分子生物学方面研究近况。三肽囊素作为一种重要的活性物质，其生物学活性和作用机理得到广泛研究，但有关分子生物学方面研究近几年才开始。     

重组囊素肽的构建表达及其对禽流感灭活苗免疫效果的影响

为重组表达不同拷贝串联囊素(BS)活性肽及评价其对禽流感灭活苗的免疫效果,本研究以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽,按照大肠杆菌偏爱密码子设计其引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种囊素肽编码基因,分别克隆至p ET-32a中,构建重组质粒p ET-BS1、p ET-BS2和p ET-BS3,并转化于大肠杆菌Origami TM B中诱导表达。SDS-PAGE和western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式表达,与天然囊素肽具有相似的免疫原性。将3种重组囊素肽分别与禽流感灭活病毒联合免疫雏鸡,免疫效果检测表明,与单独免疫灭活病毒组相比,3种重组囊素肽均能够明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;但仅BS1能够同时提高血清中IL-4和IFN-γ的含量。本研究通过原核表达制备了3种具有良好免疫活性的重组囊素肽,为其作为免疫增强剂提供了实验依据。     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的免疫器官细胞凋亡的影响

研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡免疫抑制模型中免疫器官细胞凋亡的影响。将180只1日龄粤黄鸡随机分成环磷酰胺组、正常对照组、三肽囊素组以及三肽囊素 环磷酰胺组。利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dTUP缺口末端标记法(TUNEL)，对不同组鸡的免疫器官细胞凋亡进行计数。结果发现，环磷酰胺组细胞凋亡数比对照组明显增多(P＜0．05)，而三肽囊素 环磷酰胺组细胞凋亡数显著少于环磷酰胺组(P＜O．05)；三肽囊素组的细胞凋亡数比环磷酰胺组少，且差异显著(P＜0．05)。由此可知，三肽囊素对环磷酰胺所诱导的细胞凋亡具有抑制作用。     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下的阻断作用

本文研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的墟岗黄鸡红细胞免疫功能的抑制模型的影响。180只一日龄墟岗黄母鸡随机分成对照组,三肽囊素组,三肽囊素 环磷酰胺组,环磷酰胺组四个组,三肽囊素组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注0.01mg/kg剂量的三肽囊素;环磷酰胺组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注40mg/kg剂量的环磷酰胺,对照组鸡注射等量的生理盐水。结果表明,14日龄和35日龄时各试验组鸡的红细胞总数没有显著差异,而在56日龄时,环磷酰胺组显著低于其它三组(P<0.05);从14日龄开始,环磷酰胺纽的RBC-C3bR花环率显著低于其它三组,而环磷酰胺组的RBC-IC花环率显著高于其它三组,并持续到实验结束。结果提示,三肽囊素可阻断由环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下。     

囊素的研究进展及其在动物生产中的应用

囊素是一种小分子肽类物质,对畜禽具有广泛的免疫学和生理学活性作用.为此,从结构、作用机理、生物学活性、制备及在动物生产中的应用等方面对囊素相关研究进行介绍,以期为囊素在畜牧养殖实践应用中提供参考.     

三肽囊素对猪瘟和猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响

为提高猪瘟和猪蓝耳病疫苗的免疫效果,试验通过口服、注射两种方式,研究了三肽囊素对猪瘟和猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响.结果表明:口服和注射一定剂量的三肽囊素均可提高猪瘟和猪蓝耳病疫苗抗体水平和阳性率,且效果与三肽囊素剂量有关.在提高猪瘟疫苗免疫效果方面,注射1μg/kg剂量的三肽囊素效果较好,口服30μg/kg剂量组效果最...     

法氏囊活性肽的研究进展

法氏囊活性肽（囊素）是目前法氏囊组织提取物中唯一一种化学组成已被确定的活性因子，近十年来，对囊素的研究工作取得了很大进展。本文对囊素的生物学活性、组织定位、作用机制及其应用前景进行了综述。     

法氏囊活性肽BP5免疫生物学功能研究进展

<正>法氏囊(Bursa of fabricius,BF)是禽类特有的中枢体液免疫器官,相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。三肽囊素(Bursin,BS)是从BF组织中分离的第一个活性肽。作为BF的重要活性组成成分,不仅可以提高禽类免疫功能,而且对哺乳动物也具有重要的免疫学活性及生理作用~([1-4])。以往的研究主要集中在囊素的生物学功能方面,近年来,随着技术     

囊素对猪外周血单个核细胞的免疫刺激活性研究

囊素是存在于禽腔上囊中能诱导B细胞分化的活性肽类物质,其化学组成为三肽Lys-His-Gly-NH2。本试验探讨了猪外周血单个核细胞的分离培养条件,并研究了人工合成的囊素对体外培养的猪外周血单个核细胞（PBMC）的免疫刺激活性。采用猪PBMC体外增殖实验,3H-脱氧胸苷（3H-TdR）掺入法测定刺激指数（SI）。结果表明,用猪淋巴细胞分离液（1.110g/cm3）在1500r/min、30min条件下细胞得率及细胞活力最高,分别为7.26×107、91.5%。体外培养的PBMC经不同浓度的囊素刺激24h后,细胞体积明显增大、数目增多,在同一视野中细胞聚集成团的数目明显增多。4μg囊素/孔与8μg囊素/孔组每分钟脉冲数（cpm值）分别达821.60±6.90和916.70±9.25,刺激指数（SI值）分别达4.32±0.12、4.83±0.15,表明囊素对体外培养的猪PBMC具有明显的免疫刺激活性,且在一定浓度范围内囊素对猪PBMC的免疫刺激活性有剂量依赖关系。     

不同结构对囊素样肽的免疫活性影响

化学合成单拷贝（BS）、30拷贝串联（KG30）和30拷贝分支结构（MAP）3种不同结构的囊素样肽，通过体外外周血淋巴细胞刺激增殖试验、杂交瘤细胞抗体分泌刺激试验、E-玫瑰花环试验和体内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、新城疫疫苗免疫应答的测定，比较了其免疫增强活性。结果表明，BS和MAP的活性显著高于KG30，BS体外试验活性优于MAP，而MAP体内试验活性优于KS。结构对囊素的活性有显著影响，以分支结构的囊素增强免疫效果最好。     

三肽法氏囊素的制备技术研究进展

囊素是存在于禽腔上囊中的小分子肽类物质,其化学组成为三肽Lys-His-G1y-NH2.大量的研究证实囊素对禽类及哺乳动物具有免疫增强作用,并在疫苗佐剂、饲料添加剂、感染性疾病的辅助治疗、免疫缺陷病、抗肿瘤等方面显示了广阔的应用前景.囊素的大量制备已成为目前研究的热点并已取得很大的进展.这些技术有组织提取法、化学合成法、原核表达法、抗独特型抗体法等.本文对这些技术的原理、方法、优缺点、产物的生物活性等方面的研究进展做一综述.     

三肽囊素抗独特型ScFv噬菌体展示文库的构建

利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应（SOE）,以（Gly4Ser）3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,且ScFv DNA与噬菌粒载体pHENI的连接产物转化于大肠杆菌TGl,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素抗独特型抗体全套单链噬菌体抗体库,并将该抗体库展示在噬菌体表面,以利用噬菌体展示技术的强大筛选能力筛选出与三肽囊素同功能单链抗体（Bursin-ScFv）。     

囊素三肽的研究进展

囊素是法氏囊提取物中的一种化学组成已被确定的活性因子,具有很强的免疫调节作用。迄今为止对囊素的研究已经取得了很大的进展,为了更好地研究和应用囊素,作者拟对囊素的化学本质、组织定位、生物学活性、制备方法、含量测定、分子生物学研究及其作用机理进行综述。明确目前囊素研究中需要进一步探索的问题和应用前景。     

囊素的研究进展

为更好地研究和利用囊素的免疫调理活性，从囊素的产生、存在部位、生物活性及其作用机理等方面论述了囊素的研究现状，指出了有关囊素的亟待解决的问题和应用前景。     

三肽囊素对鸡血浆蛋白组分及IL-2与IL-6含量的影响

144只1日龄黄羽肉鸡随机分为4组,第7日龄时第Ⅰ～Ⅳ组分别注射0、0.005、0.010、0.030mg/kg剂量的三肽囊素,在14、35及56日龄时每组各取一个重复,取血浆,醋酸纤维薄膜电泳检测血浆蛋白各组分的比率,放射免疫法检测血浆IL-2与IL-6的含量.结果显示不同剂量的三肽囊素可提高血浆γ球蛋白水平:对血浆...     

合成囊素三肽对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为验证囊素三肽对猪瘟疫苗的免疫增强作用,通过3个剂量、2种与疫苗配伍方式进行细胞源和脾淋源猪瘟疫苗的猪体免疫试验.于免疫后14d、28d和42d采血,测定猪瘟抗体阳转率.结果表明,囊素三肽可以显著提高猪瘟疫苗(细胞源或和脾淋源)的免疫应答效果.推荐使用剂量为100μ g/头份,肌肉注射,安全无毒.     

禽类防御素研究进展

防御素是一类不超过100个氨基酸的阳离子活性肽。因其能有效地杀灭细菌、某些真菌、螺旋体和囊膜病毒等微生物,成为世界范围内的一个研究热点。其中,仅β-防御素存在于禽类。依据禽类β-防御素分子结构、来源与氨基酸组成,可将其分为不同的类别。禽防御素广泛分布于禽的血液和消化道、呼吸道、泌尿生殖道上皮细胞等部位。进化关系分析表明,其他哺乳动物与鸟类抗菌肽来自于共同的β-防御素远古基因。禽类防御素的生物学活性显示其具有潜在的经济意义。为此,就其分类与组织分布、进化、生物学活性、基因工程及应用进行综述。     

合成三肽囊素阳性噬菌体模拟七肽的免疫活性初步研究

为探讨三肽囊素(Bursin)模拟七肽的免疫活性及其与Brusin的相关性,本研究根据Bursin阳性噬菌体展示七肽库中筛选得到的氨基酸序列(MTTNLQQ)人工合成该七肽.以ELISA和竞争ELISA检验合成七肽与Bursin在体外的免疫学反应的相关性;比较不同剂量的合成七肽(设定Bursin作为对照)对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗(La sota株)在鸡体诱导的特异性免疫应答的影响.结果显示合成七肽与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)能够特异性结合并且该结合作用可被Bursin阻断;动物试验的结果表明,低剂量(0.09 mg)的合成七肽对疫苗诱导的体液免疫应答的增强作用与Bursin相当,而且高剂量(0.3 mg)的合成七肽对细胞免疫应答具有一定的增强作用.因此,认为七肽序列MTTNLQQ具有与Bursin类似的免疫活性.     

三肽囊素对墟岗黄鸡免疫器官组织结构的影响

三肽囊素（Bursin，BS）是Audhya等1986年利用层析技术首次从鸡法氏囊中提纯的一种三肽，其氨基酸组成顺序为Lys-His-Gly-NH2；Viamoutes等研究认为BS分布于法氏囊滤泡皮髓质分界上皮（CME）、树状网状上皮细胞（DREC）和滤泡表面上皮（IFSE）基底膜中；1990年Audhya等证实BS不仅存在于鸟类法氏囊和骨髓中，