一株乳酸菌培养条件优化及对胆盐和酸性环境耐受性的研究

对一株猪源乳酸菌HEW-A208的培养条件进行优化,并研究其对胆盐及酸性环境的耐受性。通过对菌落数、菌落大小和溶钙圈大小3项指标进行检测,确定乳酸菌分离培养基为最优培养基;在p H2.5、3.5和4.5环境下处理150 min对该菌无显著影响,在p H 1.5环境下处理30 min该菌仍保持较高的存活率;胆盐对该菌生长有一定影响,但短时间内低质量分数处理影响较小。相同胆盐质量分数下,培养时间越长,活菌数越低,胆盐质量分数高于0.2%时该菌生长基本停滞。     

鹅粪便中特基拉芽孢杆菌和类肠膜魏斯氏菌的分离鉴定

【目的】从鹅粪中分离芽孢杆菌属和乳杆菌属细菌,为鹅源功能菌研究和合理用药提供参考。【方法】收集30只50周龄健康北方白鹅的直肠粪便,利用特异性培养基和生化反应试验分离筛选菌株,筛选的菌株通过DNA提取、PCR扩增16S rDNA测序鉴定后,与GenBank中参考菌株进行比对构建进化树,进行相似性比对确定菌株种类。培养48 h后检测细菌的生长特性、最适酸碱度和温度,以pH 7.0、无胆盐环境下细菌生长状态为对照,检测其耐酸耐胆盐能力,并进行药敏试验检测其对抗菌药的耐受性。【结果】经分离筛选共获得9株细菌,通过生化试验最终选出2株菌,根据进化树的进化距离和相似性比对确定其分别是特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2。生长特性结果显示,特基拉芽孢杆菌CC2FG2在培养基pH为6.5、温度为30 ℃条件下培养16 h的增殖效果最好,可以耐受1.2%胆盐,活菌数是无胆盐的69.2%,耐酸特性比较强,培养基pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的81.5%;抗菌药耐受性结果显示,其对氧氟沙星、诺氟沙星、卡那霉素、链霉素、克拉霉素、红霉素、复方新诺明和万古霉素敏感,对头孢呋辛,头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、呋喃妥因、环丙沙星、庆大霉素和四环素不敏感。类肠膜魏斯氏菌JY0R2在培养基pH为6.0、温度为36.5 ℃的环境中培养18 h增殖效果最好,在1.2%胆盐下活菌数是无胆盐的50.6%,在pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的87.6%,对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、克拉霉素和红霉素敏感,对卡那霉素、呋喃妥因和四环素中度敏感,对头孢呋辛、头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、复方新诺明、万古霉素、庆大霉素和链霉素不敏感。【结论】鹅源特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2具有很好的耐酸、耐胆盐特性,且特基拉芽孢杆菌可以与部分β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、硝基呋喃类和四环素类抗菌药联合使用,类肠膜魏斯氏菌可以与部分β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药联合使用。该结果可为鹅源功能菌的研发提供参考。     

一株牦牛源约氏乳酸杆菌FYL1的分离鉴定

为了对牦牛源约氏乳酸杆菌进行生理生化鉴定,并明确其生物学特性,进而为运用于相关领域的临床探究提供理论根据,试验采用传统经典的MRS选择培养基,取牦牛小肠黏膜活检组织逐级纯化分离乳酸杆菌,然后对最终分离出的菌株做生理生化学判定及16S rRNA基因测序,并对其耐受强酸和高浓度胆盐、抑制致病性大肠埃希氏菌的特性以及生物安全性等进行进一步分析。结果表明:从健康牦牛犊小肠黏膜活检组织中最终纯化出1株牦牛源约氏乳酸杆菌FYL1,可在MRS选择培养基中生长良好,能够耐受pH值为2的强酸和0.40%高浓度胆盐条件,对于致病性大肠埃希氏菌O111有着很好的抑制效果;而且具备良好的生物安全性能,生理生化鉴定此菌株为约氏乳酸杆菌。说明该牦牛源约氏乳酸杆菌FYL1具备良好的生物安全性,对强酸、高浓度胆盐的耐受特性和抵抗致病性大肠埃希氏菌的生物学性能皆较好。     

戊糖片球菌的耐酸及耐胆盐能力研究

本实验对戊糖片球菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验.结果表明,在pH 2.5、3.5条件下培养4h后,戊糖片球菌PP的活菌数分别能达到108 cfu/mL和1010 cfu/mL以上.在胆盐质量分数为0.1％、0.2％和0.3％的MRS培养基中培养4h后,戊糖片球菌PP生长良好,活菌数均在106cfu/mL以上,其中胆盐质量分数为0.1％时,戊糖片球菌PP存活率能达到133.3％.模拟胃液和模拟肠液实验结果表明,该菌株能够有效通过胃环境,能在肠道中繁殖.结果可见,戊糖片球菌PP具有较强的耐酸耐胆盐能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求.     

1株关岭黄牛瘤胃源发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为了分离具有优良益生特性的牛源乳酸菌，探究其用于畜牧微生态制剂研发的潜力，试验采集健康关岭黄牛瘤胃液，接种于MRS肉汤培养基富集后分离乳酸菌，使用含0.3%胆盐的无菌PBS初步筛选耐胆盐乳酸菌，通过革兰氏染色镜检和16S rRNA测序进行鉴定，并对分离菌的生长特性、产酸能力、耐受特性、药物敏感性、抑菌特性及细胞黏附性进行分析。结果表明：经筛选分离得到1株菌，命名为NCO,经革兰氏染色、镜检和16S rRNA测序鉴定为发酵乳杆菌；该菌具有良好的生长和产酸能力，培养4 h后进入对数生长期，16 h后达到稳定期，培养28 h的菌液pH值为4.43;对低pH值、胆盐、胃液和肠液环境具有耐受能力；该分离菌对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素耐药；其培养上清液对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌具有极强的抑制作用；该分离菌对Caco-2细胞的黏附数量为43.5 cfu/个，具有一定黏附性。说明分离菌NCO具有优良的生物学特性，有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。     

猪源嗜酸乳杆菌La-0231菌粉生产工艺优化

为了优化猪源嗜酸乳杆菌La-0231菌粉生产工艺。采用单因素试验、正交试验,优化发酵温度、培养基初始pH值、氢氧化钠流加浓度、发酵时间、离心时的流量设定值、预冻温度、冷冻干燥中物料仓的真空度,并对冻干菌粉进行了耐酸、耐胆盐性能测试。结果表明,优化的5吨生产罐发酵控制参数为：发酵温度37℃,培养基初始pH值为6.40,氢氧化钠的流加浓度为25%,发酵时间为16 h,发酵液最终pH值范围在4.20～4.80之间,OD_{600 nm}值在6.00以上,发酵液的活菌数为6.80×10⁹CFU/mL。离心时的流量设定值以216L/h为优。确定预冻温度为-45℃～-50℃最佳,冷冻干燥中物料仓的真空度设定以50 Pa较为适宜。优化后猪源嗜酸乳杆菌La-0231菌粉生产工艺,冻干菌粉活菌数含量为4.56×10¹¹CFU/g,水分含量3.19%;经耐酸、耐胆盐性能测试,显示其具有良好的耐酸、耐胆盐特性。     

胆盐水解酶基因在干酪乳杆菌LC2W中的表达

从胆盐水解酶的特性出发,在干酪乳杆菌LC2W中过量表达Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ 4种胆盐水解酶同工酶,通过酶活性的测定研究胆盐水解酶对干酪乳杆菌水解胆盐的作用.结果表明:实现了4种胆盐水解酶在干酪乳杆菌LC2W的过表达;利用茚三酮显色法测定的4种重组菌胆盐水解酶活性较宿主LC2W都不同程度地降低;在干酪乳杆菌LC2W中过量表达L.plantarum ST-Ⅲ的胆盐水解酶基因达不到提高该菌水解胆盐能力的目的.     

不同增菌液和培养基对沙门菌分离效果的比较研究

通过对各种增菌液和培养基的比较以及组合筛选,选择一种较为有效和简便的分离沙门菌的方法.采用6种常用的选择性培养基对9种血清型的沙门菌以及常见的共生肠道菌大肠杆菌和阴沟肠杆菌分别进行培养,根据生长特点对选择性培养基进行初步筛选,然后对3种常用选择性增菌液进行筛选,将筛选出的增菌液与培养基进行不同组合,检测各血清型沙门菌与大肠杆菌、阴沟肠杆菌的混合物在不同组合中的增菌和分离效果,并对其进行评价.研究结果表明,最佳分离培养方案为样品经SC和TTB增菌后再用显色培养基或者XLT4培养基进行选择性培养.本研究结果优化了沙门菌的常规分离培养方法,可用于不同样品中沙门菌的分离培养,提高沙门菌分离率.     

猪肠源粪肠球菌的体外耐受性研究

对仔猪直肠内容物分离的粪肠球菌进行体外耐受性研究。以粪肠球菌体外存活率为考察指标,通过耐酸性、耐胆盐、耐高温试验来研究菌株的体外培养特性。耐酸性试验采用pH为2.0、3.0和7.0培养基培养菌株3h,其存活率分别为2.18%、121.01%和134.02%;胆盐浓度在0.1%~0.3%培养菌株,生长良好且存活率均在70%以上;耐高温实验是在50℃和60℃处理30min后存活率菌小于50%,菌株对高温敏感。结果表明,仔猪肠源粪肠球菌有较好的耐酸性及耐胆盐能力,但对高温敏感。     

一株饲用酪酸菌特性及培养条件的研究

对本实验室分离保藏的一株饲用酪酸菌的一些特性进行了研究,发现该菌株具有较强的耐热性、耐酸性,对胆盐具有较强的耐性,对大肠杆菌有较强的抑制作用。对其碳源、氮源、无机盐等培养基组成进行了研究优化,并确定了最适培养温度等培养条件。     

反刍动物复合微生态制剂的研制

模拟反刍动物瘤胃内环境对枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、肠球菌、啤酒酵母、酿酒酵母5种菌进行相关生物学特性研究。试验结果表明,这5株菌安全、菌株间无颉颃性、耐酸碱、耐胆盐、颉颃常见病原菌,符合研制反刍动物微生态制剂的要求。进而对这5种菌的发酵培养基和发酵参数进行了研究、优化,从而开发出一种新型复合微生态制剂及其发酵生产工艺。     

中药饮片金银花微生物污染状况考察

对河北、安徽及四川3省10家不同企业、不同环节的20批中药饮片金银花进行检测，全面考察微生物污染程度。按照《中华人民共和国药典》2020年版(四部)通则1108中药饮片微生物限度检查法，对20批中药饮片金银花采用常规平皿法(倾注法)进行需氧菌总数(TAMC)、酵母和霉菌总数(TYMC)、耐热菌总数、耐胆盐革兰阴性菌及沙门菌检测，参照其他国家药典增加金黄色葡萄球菌和洋葱伯克霍尔德菌的检验，统计微生物限度污染情况。结果显示，饮片中TAMC与耐热菌和耐胆盐革兰阴性菌呈正相关系；5批样品检出霉菌，在种植和加工环节尤为突出；15%的饮片耐胆盐革兰阴性菌N>10³;50%的饮片检出大肠埃希菌；沙门菌、金黄色葡萄球菌及洋葱伯克霍尔德菌均未检出。从考察结果看，亟需完善国内中药饮片分类体系，建立适合国内中药饮片的培养体系和标准，从而加强中药饮片种植和加工环节微生物污染的管控。     

乌鸡肠道中一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验采用添加碳酸钙的MRS培养基作为筛选培养基，从乌鸡肠道中筛选乳酸菌，并对分离到的菌种进行16S rDNA基因序列鉴定以及益生性能研究，测定其生长速率、产酸能力、耐酸和耐胆盐性能、抑菌能力及抗生素敏感性。试验结果表明：分离到的溶钙圈较好的菌株N为乳酸菌，分离菌株N产酸能力强，达到对数期的时间短，在低pH、高胆盐浓度时，仍具有较好生长活性。 [关键词] 乳酸菌|乌鸡|益生性能     

一株地衣芽孢杆菌的体外益生作用研究

本研究对从腊肉中分离得到的13株芽孢杆菌进行筛选，选择对大肠杆菌K88、K99具有最强抑制效果的一株菌，进行下一步的耐酸耐胆盐的试验，结果表明，筛选得到的这株芽孢菌能够很好地耐酸耐胆盐，用16SDNA基因片断的PCR扩增与序列分析，该菌株YB6与地衣芽孢杆菌的同源性为98％。本试验为动物饲用益生菌产品的开发和推广应用打下基础。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

亚硒酸盐增菌基在食品沙门氏菌检验中的应用和改进

为了提高分离食品或外环境标本中沙门氏菌属的阳性率,必须先进行增菌培养(预增菌→选择增菌或直接选择增菌)。可用于沙门氏菌的增菌培养基很多,其中最常用者为亚硒酸盐类培养基。亚硒酸盐胱氨酸肉汤(简称SC)是美国食品药品局推荐的作为食品沙门氏菌检验的标准选择增菌培养基,亚硒     

嗜酸乳杆菌耐性菌株的选育及培养条件研究

试验旨在通过逐步提高培养基酸度及胆盐质量分数的方法,选育出耐酸及耐胆盐效果较强的菌株。以菌珠L102为原始菌株逐步选育出耐性菌株L102b。该耐性菌株在p H 2.0及p H 2.5酸度条件下,存活率较原始菌株提高45.0%以上,在p H 1.5的极低酸度条件下,亦有20.3%的存活率;胆盐质量分数为0.1%~0.3%存活率均在85.0%以上,胆盐质量分数为0.5%时仍有46.2%的存活率。对比原始菌株L102耐酸性能及耐胆盐性能均有明显提高。通过研究单因素及正交试验对选育的耐性菌株L102b的发酵条件,得出菌株L102b的最佳培养条件:转速100 r/min,培养温度35℃,初始p H 6.4,装液量300 m L。     

牛瘤胃微生物的分离鉴定与生化特性分析

【目的】 通过对瘤胃液中分离所得的菌株进行研究，为益生菌制剂的制备提供基础数据。【方法】 采集10头健康荷斯坦奶牛的瘤胃液，通过涂布、特性培养、纯化等步骤获得单一菌株，提取细菌DNA，进行16S rDNA的PCR扩增。通过16S rDNA基因测序鉴定后进行序列比对并构建系统发育树，确定菌株种类。对不同种类的细菌进行0~48 h的培养测定其生长特性，并进行耐酸碱和耐胆盐试验。【结果】 通过涂布分离菌株得到20株分离菌，经PCR扩增后测序发现20株菌属于7种不同的菌，大致确定L7为解淀粉芽孢杆菌、K7为枯草芽孢杆菌、S7为嗜麦芽窄食单胞菌、C2为地衣芽孢杆菌、M7为马链球菌、F7为弗氏酸柠檬杆菌、T7为吉氏库特菌。通过生长曲线可以看出，7株菌分别在24~36 h达到最快生长期。M7和K7对酸有较强的耐受性，而S7、C2和F7对酸性较为敏感，C2对碱的耐受性最强，而T7对胆盐的耐受性最强，S7对胆盐最不耐受。【结论】 本研究从瘤胃中分离得到的7个菌株对酸碱和胆盐具有不同程度的耐受性，以及最适生长周期。     

乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选

用改良的o-phthalaldehyde法对pH3．0和0．3％牛胆酸钠有一定耐受性的10株乳酸菌的体外降胆固醇活性进行了测定。这些菌在含0．3％胆盐的培养基中，37℃厌氧培养24h后，均表现出较强的降胆固醇活性。胆固醇脱除率从30．4％～43．6％不等。其中鸟肠球菌WZ38—2对胆固醇的脱除率最高；其次为植物乳杆菌WHl3—1和WH23—1。     

猪源嗜酸乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

为丰富猪源益生菌资源,研制品质更好及效果更强的猪用微生态制剂,研究从健康仔猪粪便中分离获得9个菌株,通过对菌株形态及生理生化特征得到2株疑似嗜酸乳杆菌菌株,分别命名为L102和L106,通过16S rDNA分析表明,菌株L102和L106均为嗜酸乳杆菌;并对2株菌的益生特性进行研究,结果表明,2株菌均有较强的抑菌能力,菌株L102对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌圈直径均超过22 mm,菌株L106的抑菌圈直径则超过15 mm。但2株菌对酸及胆盐的耐受性一般,用p H 3.0液体培养基处理2 h,菌株L102存活率为77.40%,菌株L106存活率为59.20%;胆盐质量分数为0.30%时,菌株L102存活率为28.20%,菌株L106存活率为18.70%。