酶联免疫吸附检测法在农药残留检测中的应用

随着农药种类和用量的不断增加,农药的残留对人体的危害以及食品进出口的影响日益严重,因此进行农药残留检测工作非常重要,其中最重要的是建立高效的检测方法。酶联免疫吸附检测法(ELlSA)特异性高、灵敏性强,在农药残留检测中的研究和应用也越来越多,本文综述了其在农药残留检测方面的应用现状、存在问题及建议。     

农药残留酶联免疫吸附分析技术研究进展

酶联免疫吸附分析法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的特点,在现场筛选和大量样品的快速检测中显示了其独特的优势。简要介绍了农药残留酶联免疫吸附分析技术的关键环节及其应用,并对该技术存在的问题和应用前景进行了讨论。     

农药残留检测中酶联免疫吸附技术的研究进展

随着农药种类和用量的不断增加,农药的残留对人体的危害以及食品进出口的影响日益严重,因此进行农药残留检测工作非常重要,其中最重要的是建立高效的检测方法。而EIA技术中的酶联免疫吸附(ELISA)技术特异性高、灵敏性强,在农药残留检测中的研究和应用也越来越多。笔者主要综述了农药残留的现状、酶联免疫吸附技术原理和分类及其在农药残留检测方面的应用,并根据当前研究现状及存在问题进行了研究展望并提出了发展建议。     

除虫脲在荔枝上残留及安全评价

【目的】对除虫脲在荔枝上的安全性进行评价,为该药在荔枝上的合理使用提供科学依据。【方法】通过建立除虫脲在荔枝全果和果肉的前处理方法和液相色谱—二级管阵列紫外检测器的仪器方法,对除虫脲进行定量分析;通过两年(2013~2014年)两地(广东、广西)的残留试验,研究除虫脲在荔枝上的残留及消解动态。【结果】除虫脲在荔枝果肉和全果上平均回收率分别为84.1%~84.8%和82.7%~84.9%,相对标准偏差分别为2.9%~4.3%和3.2%~4.2%,最小检出量为5×10-10 g,在荔枝全果和果肉上的最低检测浓度均为0.01 mg/kg。除虫脲在荔枝上的消解半衰期为3.5~4.9 d;以125.0~187.5 mg/kg剂量、施用3~4次,采收间隔期为7和10 d时,荔枝果肉上的残留量均小于0.01 mg/kg,全果上的残留量分别为0.05~0.23和0.01~0.05 mg/kg。【结论】除虫脲在荔枝上防治荔枝蒂蛀虫时施用剂量以125.0 mg/kg为宜,施药次数3次,安全间隔期10 d。     

酶联免疫吸附分析技术在农药残留分析中的应用

简述酶联免疫吸附分析技术的原理、方法类型以及关键的技术要点,并对该技术在农药残留分析检测中的应用前景进行了展望。     

单细胞凝胶电泳检测除虫脲残留对小鼠肝脏DNA损伤的研究

除虫脲是一种低毒、低残留、没有致突和致癌性的农药,但是它光解后在蔬菜上的某些残留物,如对氯苯、对氯苯基脲等有一定的毒性。采用单细胞凝胶电泳试验,研究除虫脲在蔬菜上残留的混合物对小鼠肝脏细胞DNA的损伤作用,应用CASP软件分析彗星图像,得出彗星尾部DNA百分含量、彗星尾长、尾距和Olive尾距4个指标,通过SPSS软件分析表明,残留混合物导致的彗星拖尾现象与空白组有显著区别。研究表明,尽管除虫脲原体没有致突性,但是它在蔬菜上残留的混合物具有一定的致突、致畸、致癌性,所以不仅应对其原体化合物进行评价,还必须对它的分解物和代谢物同时进行安全评价。     

酶联免疫分析方法在有机磷农药残留检测中的应用研究进展

对近年来酶联免疫分析方法(ELISA)在有机磷农药残留检测分析中的研究进展及其前景进行了阐述。     

三唑酮及其代谢物残留检测的酶联免疫方法的建立

通过对三唑酮分子结构进行改造,制备得到三唑酮半抗原及人工抗原、免疫动物、制备特异性单克隆抗体.在筛选三唑酮单克隆抗体的基础上,建立了三唑酮及其代谢物三唑醇残留检测的酶联免疫方法.结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.175X+1.086,相关系数R2为0.9950,半数抑制浓度(IC50)为3.0μg...     

柑橘中除虫脲的残留及膳食安全风险评估

2018年,在湖南的长沙和张家界、浙江兰溪等12个地点开展除虫脲的最终残留试验,并在湖南长沙、江西高安、广西南宁、福建漳州等4地进行除虫脲的残留消解动态试验,采用高效液相色谱–串联质谱法(HPLC–MS/MS)测定除虫脲在柑橘全果和果肉中的残留量,并进行除虫脲的膳食安全风险评估。柑橘样品先采用乙腈超声提取,再经PSA和无水硫酸镁净化,最后用HPLC–MS/MS分析测定,外标法定量,柑橘全果和果肉中除虫脲的添加水平为0.01、0.10、1.00、5.00mg/kg时,平均回收率分别为89%～102%和76%～99%,相对标准偏差分别为7%～11%和8%～9%;除虫脲在柑橘全果和果肉中的定量限均为0.01 mg/kg;除虫脲在柑橘全果和果肉中的残留量随着时间的推移呈波动性缓慢下降,其消解半衰期分别为13.0～18.0 d和9.6～34.0 d;质量分数25%除虫脲可湿性粉剂在柑橘上以125 mg/kg(制剂用量为2000倍液)施药3次,施药间隔7 d,于末次施药后第35天采样测定,除虫脲在柑橘全果和果肉中的残留量分别为<0.01～0.55 mg/kg和<0.01～0.93 mg...     

选择兽药残留酶联免疫试剂盒的关键因素

目前,酶联免疫试剂盒已广泛应用于兽药残留和违禁添加药物的检测,但市面上ELISA试剂盒质量参差不齐,如何选择合适的试剂盒已成为检测机构准确检测的关键。通过产品外观、灵敏度、标准曲线、稳定性、特异性等指标对试剂盒的选择做出客观性评价,以供同行业检测人员参考。     

绿色农药灭幼脲不育作用研究进展

灭幼脲以其独特的杀虫方式 ,及其广谱、高效、低毒、低成本、残效期长等优点 ,被誉为“绿色农药”。目前 ,灭幼脲已被用于防治农林、果树、蔬菜、贮粮、畜牧、卫生等 90多种害虫。灭幼脲对昆虫的卵、幼虫、蛹、成虫都有一定的生物活性。其中 ,灭幼脲对成虫的不育作用 ,实质上是对子代卵孵化的抑制。研究表明 ,灭幼脲可由雌性成虫摄入并传递给卵 ,进而影响胚胎发育期间几丁质的代谢 ,抑制卵的孵化     

固相萃取-高效液相色谱法测蔬菜中的除虫脲残留量

采用乙腈提取、固相萃取和高效液相色谱法相结合的方法,测定了多种蔬菜中除虫脲的残留量。结果表明,浓度范围在1～50μg/mL内,其峰面积与进样质量的线性相关系数为0．9986,方法的回收率为86．5％～102．3％,相对标准偏差RSD(n=5)在3．2％～5．6％,最低检出浓度为0．002 mg/kg。该法具有灵敏、准确,前处理简单易行等优点。     

氨基隐性孔雀石绿抗体的制备及ELISA方法的建立

以N,N-二甲基苯胺、对硝基苯甲醛为原料,合成改造了氨基隐性孔雀石绿半抗原,并通过紫外、红外、质谱鉴定。结果表明,氨基隐性孔雀石绿半抗原改造成功。采用重氮化法合成了氨基隐性孔雀石绿人工抗原,并通过紫外光谱进行鉴定,结果显示偶联蛋白成功。免疫大白兔制备了隐性孔雀石绿抗体,抗体效价达6.4×10~4。建立了隐性孔雀石绿ELISA方法,最低检测线为0.1μg/L。     

拟除虫菊酯类农药半抗原合成及酶联免疫分析

酶联免疫分析(ELISA)是农药残留检测的一种重要方法,具有方便快速、特异灵敏等优点.主要介绍了拟除虫菊酯类农药半抗原的合成方法,对拟除虫菊酯分子的环丙烷、氰基和芳香环进行修饰;对拟除虫菊酯水解产物进行修饰;增加一个连接臂作为半抗原.同时介绍了酶联免疫分析的研究进展,对拟除虫菊酯类农药半抗原的合成及酶联免疫分析进行了讨论和展望.酶联免疫分析在拟除虫菊酯类农药的残留检测中将起到越来越重要的作用.     

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

通过碳化二亚胺法将草甘膦(Glyphosate,GLY)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原和包被原。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测表明,草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为11∶1和9∶1。合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体,ELISA检测抗体溶液效价为1∶1×107,该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。以此抗体建立了草甘膦间接竞争ELISA检测方法(ciELISA),其线性范围为0.78～100μg/mL,线性回归方程为y=15.851 0 lnx+7.780 5,R2=0.993 8。草甘膦的检测限为IC10=1.15μg/mL,IC50=14.35μg/mL。在添加回收试验中,草甘膦添加值5和10μg/g时,玉米粉中的草甘膦回收率为104.12%和81.37%,小麦粉中的回收率则分别为118.94%和为109.39%。结果表明,采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ciELISA方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测。     

硫代磷酸酯类农药通用抗原的合成与鉴定

【目的】合成具有硫代磷酸酯类农药共性结构的系列半抗原,制备此类农药的通用人工抗原。【方法】以烷氧基硫代磷酸盐和卤代羧酸为原料合成半抗原,采用¹HNMR、¹³CNMR及EIS-MS谱图对其结构进行表征。将合成的半抗原分别通过活性酯法、混合酸酐法与牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）偶联,制备免疫人工抗原和包被人工抗原。用紫外扫描法定性分析人工抗原的偶联情况,用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）法间接测定其偶联比。【结果】合成了H1～H6 6种具有硫代磷酸酯类农药共性结构的半抗原,其中H1、H2为包被半抗原,H3～H6为免疫半抗原。制备了H1-OVA、H2-OVA、H3-BSA、H4-BSA、H5-BSA、H6-BSA、H2-BSA、H4-OVA和H6-OVA 9种人工抗原,其偶联比分别为9∶1、10∶1、23∶1、26∶1、39∶1、43∶1、28∶1、14∶1和12∶1。【结论】成功合成硫代磷酸酯类农药的人工抗原,为下一步用其免疫动物制备抗体进而进行有机磷农药酶联免疫分析奠定了基础。     

软骨藻酸快速检测方法技术研究

为比较研究海产品中软骨藻酸日常分析的快速检测技术,筛选出适合不同检测目的的检测技术。本文通过对直接ELISA法、间接ELISA法、胶体金免疫层析法和高效液相色谱法的检测时间、检出限、保质期等进行研究,并对贝类样品中软骨藻酸含量进行测定。结果表明,间接ELISA法的检出限为18ng/L,检测时间为2.5h,在4℃条件下可保存7d;直接ELISA法的检出限为3.58ng/L,检测时间为1.5h,在4℃条件下可保存7d;免疫胶体金试纸条检出限为20ng/L,检测时间15min,在4℃条件下可保存6个月;高效液相色谱法(HPLC)检出限为0.25ng/L,检测时间为6min。从而可以推断这4种检测技术均能达到各国水产品条例软骨藻酸20μg/g限值的要求,而高效液相色谱法检出限最低,免疫胶体金试纸条具有更短的检测时间和较强的稳定性。     

猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法的建立

实验通过纯化猪附红细胞体后免疫小鼠及家兔制备阳性血清,建立了猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法.实验结果表明,以鼠阳性血清1:200稀释后作为捕获抗体,4℃包被过夜,1%明胶溶液37℃封闭1 h,兔阳性血清1:400稀释后作为检测抗体,辣根过氧化物酶标羊抗兔Igc抗体h:8000稀释,37℃显色10min为最佳反应条件.同时进行特异性、敏感性、重复性实验.该方法对猪附红细胞体最低检出量为3.812μg·mL-1,具有良好的特异性、敏感性和重复性,有望作为群体检测方法.     

温室白粉虱抗药性的成虫喷雾测定法

根据 FAO 提出的试验性的温室白粉虱成虫测定抗药性的方法,我们测定了温室或田间的白粉虱成虫经1992年和1993年用4种药剂每年各测定3次 LC_(50)(μg·g~(-1)),差异都不显著,其平均值溴氰菊酯分别为185.50和98.54,氰戊菊酯为1154.06和782.41,乐果为1649.55和1461.08以及优乐得为947.44和1666.59;与1984年的抗性比,1992年溴氰菊酯、氰戊菊酯、乐果分别为28.44,29.72,1.24;而1993年则为15.11,20.15和1.10,趋势稳定一致。而以1龄若虫为试虫1993年测定 LC_(50)(μg·g~(-1))的结果与1984年比较,其抗性比溴氰菊酯、氰戊菊酯、乐果分别为87.30,504.44和0.25。如以1993年成虫与1龄若虫的 LC_(50)进行比较,溴氰菊酯、氰戊菊酯、乐果和优乐得分别为5.64,2.13,62.06和20 858.44。这些结果说明成虫的抗性比虽不如1龄若虫大,但趋势基本上是一致的,既使是生长调节剂优乐得,也能获得满意的结果,充分证实温室白粉虱抗药性监测完全可用成虫替代时间长而烦锁的1龄若虫。最后提出成虫测...