神经介素U在体外对猪树突细胞活性及功能的影响

[目的]本文旨在探讨不同浓度神经介素U(NMU)对外周血单核源树突细胞(DC)刺激T淋巴细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响。[方法]采集小梅山猪外周血,用集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导外周血单核细胞形成未成熟树突细胞,再加入脂多糖(LPS)刺激获得成熟的树突细胞,同时观察DC形态。加入不同浓度(0.01、0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU并分别培养2、4、8和12 h后,收集细胞上清液,用ELISA法测定IL-4、IL-5和IL~(-1)3的浓度。加入不同浓度(0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU培养24 h后,收集细胞,用CCK-8试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒分别检测DC刺激混合淋巴细胞时细胞的增殖和DC凋亡率。[结果]NMU(0.1~100 nmol·L~(-1))能够抑制未成熟树突细胞(i DC)的细胞凋亡(P0.01),且NMU与NMU+LPS作用效果相一致,10 nmol·L~(-1)NMU组与10 nmol·L~(-1)NMU+LPS组都能降低i DC凋亡,凋亡率分别为2.383%和2.360%,与LPS组相比,NMU+LPS组抑制i DC细胞凋亡效果极显著(P0.01),说明NMU与LPS协同发挥抑制i DC细胞凋亡作用;与对照组相比,0.1~100 nmol·L~(-1)NMU能极显著促进m DC分泌IL-5(P0.01)和抑制IL-4分泌(P0.01)。NMU对IL~(-1)3的影响呈现多样性,低剂量(0.01~0.1 nmol·L~(-1))NMU在2、4 h抑制m DC细胞分泌IL~(-1)3(P0.05),中剂量(1~10 nmol·L~(-1))NMU在2 h先抑制m DC分泌IL~(-1)3(P0.05),4 h后又促进其分泌(P0.05),高剂量(100~1 000 nmol·L~(-1))NMU则促进m DC分泌IL~(-1)3(P0.05)。经NMU诱导后,i DC和m DC均能促进T淋巴细胞增殖(P0.01)。[结论]在一定浓度范围内,NMU能够抑制猪树突细胞的凋亡,并提高其细胞活性和促进树突细胞刺激淋巴细胞增殖的功能,并能影响树突细胞细胞因子分泌,提示神经介素U参与了对猪免疫功能的调节。     

猪细小病毒对猪外周血淋巴细胞分泌猪白细胞介素18转录时相影响的探讨

猪细小病毒体外感染外周血淋巴细胞（PBMC）后引起细胞免疫反应尚不清楚,为了更好的了解猪细小病毒（PPV）感染PBMC后引起猪白细胞介素18的反应,探讨宿主-病毒之间的作用关系,运用荧光定量PCR技术,测定和分析了PPV感染PBMC后引起的病毒DNA含量的变化和猪IL-18的分泌水平。结果猪IL-18的表达量在3,6,12,24 h增加,1,48,72 h下调。可见,猪细小病毒感染可引起PBMC分泌猪白细胞介素18的增加。     

中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞转化功能的影响

为选择具有免疫增强活性的中药多糖及其最佳作用剂量,用淋巴细胞转化试验测定了不同浓度的紫锥菊多糖(EPPS)、板蓝根多糖(IRPS)、黄芪多糖(APS)、山药多糖(CYPS)和牛膝多糖(ABPS)等5种中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞增殖功能的影响.结果表明,EPPS,IRPS,APS,CYPS,ABPS均能显著地直接或协同LPS,ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);5种多糖促进猪脾脏淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度密切相关,且不同多糖促进淋巴细胞增殖的最佳剂量不同.     

硒对雏鸡T淋巴细胞转化和自然杀伤细胞活力的影响

将１日龄罗曼系商品代蛋用健康公雏３６０羽随机均分成３组。对照组饲喂基础日粮,补硒Ⅰ组和补硒Ⅱ组在饲喂基础日粮的同时分别添加０．３和０．６ｍｇ／ｋｇ硒。分别于７,２１,３５和４９日龄采用微量全血培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定雏鸡外周血Ｔ淋巴细胞转化率,ＬＤＨ释放法测定ＮＫ细胞活力,荧光分析法测定血硒含量,化学法测定ＧＳＨ－Ｐｘ活性。定期称重并进行临床观察。结果表明,补硒能显著并持续地增强雏鸡外周血淋巴细胞对ＰＨＡ的应答能力和ＮＫ细胞活力。另外,还对全血淋转试验３Ｈ－ＴｄＲ掺入法进行了讨论。     

犬、猪转移因子对犬淋巴细胞体外转化增殖影响的比较研究

无菌采取犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素P(PHA-P)、犊牛血清(FCS)对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上,研究不同浓度犬、猪转移因子(transferfactor,TF)对犬淋巴细胞增殖的影响,增殖的结果用MTT法测定。结果表明,当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml,PHA-P为12.5μg/ml,FCS为10%时,淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下,犬、猪TF浓度在0.195￣25mg/ml时,对淋巴细胞转化增殖均有促进作用,但犬、猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml,且犬、猪TF单独作用于淋巴细胞的效应明显优于与PHA-P的协同作用。结果证实,同源或异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果,同时研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了实验依据。     

猪白细胞介素2的毕赤酵母表达及活性测定

电转化重组pPICZαA-PoIL-2于巴斯德毕赤酵母X-33,经筛选、PCR鉴定,获得含PoIL-2成熟蛋白基因的重组酵母菌株,诱导表达后进行表达产物的SDS-PAGE鉴定,可产生相对分子质量约为18ku的表达产物。以MTT比色法测定,该重组PoIL-2具有对猪外周血淋巴细胞的生物学活性。     

24种中药对猪沙门氏菌的体外抑菌活性

采用纸片扩散法和平板稀释法分别测定了金银花、马齿苋、石榴皮等24种单味中药以及12个复方中药对3株猪沙门氏菌的体外抑菌效果和最低抑菌浓度(MIC值).结果表明,抑菌效果与最低抑菌浓度值随着中药成分与菌株的不同而呈差异,金银花、诃子、黄芩等12种单味中药对猪沙门氏菌有显著的抑制作用,以黄芩、黄连、黄柏(三黄汤)为主的复方及含有诃子、苦参、白头翁的9个复方具有良好抑菌效果.     

载脂蛋白A1对小鼠淋巴细胞频率及活性的影响

以载脂蛋白A1 (ApoA-Ⅰ)基因敲除及转基因小鼠为基础,利用流式细胞术检测小鼠体内T细胞、B细胞和NK细胞及其亚型频率、表面活化型分子表达情况,探讨ApoA-Ⅰ水平对小鼠淋巴细胞频率及活性的影响.结果 表明:相对于野生小鼠,生理状态下ApoA-Ⅰ基因敲除小鼠脾脏、外周血CD8+T细胞及效应型(CD8+ NKG2D+、CD8+ CD44+CD62L-、CD8+ CD44+ KLGR1+、CD8+ IFN-γ+)细胞频率显著下调,而以上指标在A poA-Ⅰ转基因小鼠中上调.CD4+T细胞、调节性T细胞(CD4+ CD25+ FoxP3+)、B细胞和NK细胞频率在3组小鼠中均无显著差异.该研究说明ApoA-Ⅰ参与调控CD8+T细胞活性,但对CD4+T细胞、B细胞及NK细胞无显著影响.     

甘氨胆酸对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响

本研究旨在探索不同浓度的甘氨胆酸(Glycocholic acid,GCA)对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响。在0.02μg/ml,0.035μg/ml,0.07μg/ml,0.21μg/ml,1.05μg/mL不同浓度的GCA作用下,应用倒置显微镜观察了体外脾淋巴细胞的核形态,采用琼脂糖凝胶电泳法检测了脾淋巴细胞的DNA片段,采用流式细胞仪测定了脾淋巴细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻百分率;采用分光光度法测定了凋亡细胞氧化还原反应活性——GSH的含量;通过ELISA法检测了Caspase-3和Caspase-9的活性。结果:GCA能够使脾淋巴细胞细胞产生核固缩和凋亡小体;显著引起脾淋巴细胞DNA片段化(P<0.05),极显著的诱导脾淋巴细胞磷脂酰丝氨酸外翻(P<0.01);显著降低GSH的含量(P<0.05);显著提高Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05)。结论:GCA具有显著的提高小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的作用(P<0.05)。     

化学合成面筋蛋白外啡肽B5对鸡淋巴细胞体外免疫活性的影响

面筋蛋白外啡肽B5是一种通过面筋蛋白的体外酶解所获得的阿片肽,具有一定的免疫学功能,有望成为一新型免疫增强剂。本研究通过化学合成方法制备,并将其加入鸡外周血单个核细胞中,以观察其对淋巴细胞的增殖效应和对IFN-γ和IL-4mRNA水平影响。结果显示,化学合成获得了高纯度的外啡肽B5(HPLC质量分数大于98.435 7%);外啡肽B5能显著促进鸡淋巴细胞的增殖,并能显著提高IFN-γ的mRNA水平(P0.05),对IL-4mRNA无显著影响。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度.应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素(PHA-p)、犊牛血清(FCS)对淋巴细胞增殖的影响.在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transfer factor,TF)对犬淋巴细胞增殖的影响,增殖的结果用MTT法测定.试验结果表明,当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml,PHA-P为12.5μg/ml,FCS为10%时,淋巴细胞增殖效果最佳.在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/ml时,对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用.试验结果证实,异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果,同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据.     

PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞凋亡的影响

选用4头猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2,PCV2）血清抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,分离淋巴细胞,分为对照组和试验组进行体外培养。试验组在培养体系中加入一定量的PCV2。分别在培养后的0、2、4、6、12、24、36和48h收获淋巴细胞。用电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行定性测定,用流式细胞术对细胞周期和细胞凋亡率进行定量测定,同时测定了凋亡相关蛋白半胱天冬酶3（Caspase-3）的表达情况。结果显示,PCV2作用后不同时间,DNA电泳均呈现出具细胞凋亡特征的梯形条带;电镜下出现细胞凋亡各期的形态学变化。从培养后4h开始,试验组淋巴细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．05）;而表示细胞增殖活性的增殖指数（PI）,试验组在2、4、6、12和24h均比对照组显著下降（P〈0．05）;表达Caspase-3的细胞百分率,除0h外,试验组均显著高于对照组（P〈0．05）。上述结果表明,PCV2能引起体外培养的仔猪淋巴细胞凋亡率增加,细胞增殖活性下降,且Caspase-3是PCV2诱导淋巴细胞凋亡的重要调节物。     

培养液对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎早期体外发育的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟质量,优化猪早期胚胎体外培养体系。[方法]以改良TCM199,NCSU-23培养液为基础液,分别添加10%的猪卵泡液（PFF）和10%的优质胎牛血清（FBS）进行卵母细胞体外成熟培养,以成熟率、孤雌胚胎体外发育率等为指标,研究不同培养液对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响。[结果]猪卵母细胞在TCM199,TCM199＋FBS和TCM199＋PFF组成熟42 h的成熟率分别为（54.2±3.5）%、（68.5±3.2）%和（69.3±3.7）%,在NCSU-23,NCSU-23＋FBS和NCSU-23＋PFF组成熟42 h的成熟率分别为（51.6±3.3）%、（63.2±3.1）%和（65.5±3.5）%,添加10%的FBS和PFF在0.05水平上显著提高了卵母细胞成熟率;6组不同成熟培养液得到的成熟卵母细胞在孤雌激活后囊胚发育率差异不显著,但TCM199＋PFF组的囊胚细胞数（36.5±4.8）在0.05水平上显著高于TCM199和NCSU-23组的囊胚细胞数（18.7±3.2和15.5±2.4）。[结论]改良TCM199,NCSV-23培养液中添加10%PFF和10%FBS可显著促进猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎早期体外发育。     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外发育潜力的影响

本研究的目的是探讨在卵母细胞体外成熟过程中向培养液中添加不同浓度的半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟和体外受精的影响．实验结果表明：半胱氨酸在浓度为0．1mg／ml时，卵母细胞体外成熟率和受精率都显著提高（p〈0．05），同时测定了不同浓度的半胱氨酸培养的卵母细胞在24h、38h、46h细胞内GSH含量，其浓度在卵母细胞成熟过程中随成熟时问逐渐升高，当卵母细胞进入MⅡ期时，GSH浓度达到高峰（7．36—8．57pmol／oocyte）．GSH的浓度反映了卵母细胞细胞质的成熟度，可以作为卵母细胞细胞质成熟度的一个特征性指标．     

氟化物对体外培养猪小肠上皮细胞的影响

[目的]研究氟对体外小肠上皮细胞的影响。[方法]以小肠上皮细胞为研究对象,对猪小肠上皮细胞进行分离后,添加2.5、5.0、10.02、0.0μg/ml的氟进行培养,测定小肠上皮细胞的增殖率和碱性磷酸酶的活性。[结果]当氟添加量<10.0μg/ml时,细胞的增殖、碱性磷酸酶活性与对照组之间无显著差异;而高氟组(20.0μg/ml)小肠上皮细胞的增殖、碱性磷酸酶活性则受到显著抑制,并且小肠上皮细胞的形态由多角形变为圆形,细胞核溶解,大部分细胞死亡。[结论]该研究为进一步研究氟对体外小肠上皮细胞的危害机理奠定了基础。     

FSH对体外培养猪卵巢颗粒细胞生长及增殖的影响

采集成年健康母猪的卵巢,收集卵泡颗粒细胞,在配制好的培养液中培养。颗粒细胞原代培养体系建立成功后,分别将不同质量浓度的FSH(0.1,0.5,1,5,25 ng/mL)作用于细胞,每隔48 h换1次培养液,加入新的FSH,倒置显微镜下检测细胞的生长及增殖状况。结果表明,FSH质量浓度越大,细胞生长状况越好,差异有统计学意义(P<0.05);在固定质量浓度的FSH作用下,细胞每次换液后生长状况都会变好。FSH能促进猪卵泡颗粒细胞增殖,并与作用时间长短有关。     

Vc对猪体细胞克隆胚胎体外及体内发育的影响

[目的]提高克隆猪的大批量生产效率,优化体外与体内培养体系。[方法]将所获得的猪体细胞克隆胚胎用含不同Vc浓度的培养液培养,比较体外囊胚发育力和囊胚细胞数,筛选出合适的培养浓度,然后用此浓度培养后的胚胎进行体内手术移植,统计克隆猪的分娩率和产仔情况。[结果]克隆胚胎在激活后用40μg/m L Vc处理22 h,体外培养未显著增加囊胚率,但显著提高了囊胚细胞数。体内移植结果显示,添加Vc未提高妊娠率,但增加了窝均总仔数,克隆效率差异显著。[结论]Vc处理有利于增强体细胞克隆胚的体内和体外发育能力。     

生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

研究了生长激素(STH)、胰岛素(insulin)单独或者联合作用对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:STH、胰岛素对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂呈现双重效应。在mNCSU-23基础液中添加0.15μg/mLSTH组的成熟率和卵裂率显著高于对照组及0.01,0.05,0.1,2μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL,8μg/mL胰岛素组的成熟率显著高于对照组及0.5,2,10μg/mL组;添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率也显著高于对照组及0.5,2,8,10μg/mL组;0.15μg/mLSTH与2μg/mL胰岛素联合添加组的成熟率和卵裂率最高,同其他组相比,差异显著。     

CLA对仔猪外周血T淋巴细胞的细胞毒活性影响

【目的】研究日粮中添加共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)对仔猪外周血T淋巴细胞的细胞毒活性影响,为将CLA作为免疫调节剂调控动物机体的免疫力和应用于畜禽乃至人类的营养实践提供参考。【方法】30头21日龄杜长大断奶健康仔猪按体质量相近、性别比例一致原则两两配对,随机分为对照组和CLA日粮组,分别喂给基础日粮和2%CLA日粮,每组5个重复,每个重复3头猪,63日龄时用肝素抗凝真空管前腔静脉采取血样,测定外周血T淋巴细胞亚群、细胞毒活性、穿孔素和颗粒酶B mRNA表达及脂肪酸组成。【结果】日粮添加CLA不影响仔猪外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+的数量(P0.05),但可显著提高CD8+T细胞总数(P0.05);与对照组相比,CLA组仔猪外周血T淋巴细胞细胞毒活性、穿孔素和颗粒酶B mRNA表达分别提高29.98%(P0.01),32.87%(P0.01)和43.36%(P0.01);未添加CLA时,仔猪外周血T淋巴细胞几乎不含CLA,但CLA组仔猪外周血T淋巴细胞中CLA含量达到0.24%(P0.01)。【结论】日粮添加2%CLA可提高仔猪外周血CD8+T淋巴细胞数,增强仔猪外周血T淋巴细胞细胞毒活性。