神经介素U在体外对猪树突细胞活性及功能的影响

[目的]本文旨在探讨不同浓度神经介素U(NMU)对外周血单核源树突细胞(DC)刺激T淋巴细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响。[方法]采集小梅山猪外周血,用集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导外周血单核细胞形成未成熟树突细胞,再加入脂多糖(LPS)刺激获得成熟的树突细胞,同时观察DC形态。加入不同浓度(0.01、0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU并分别培养2、4、8和12 h后,收集细胞上清液,用ELISA法测定IL-4、IL-5和IL~(-1)3的浓度。加入不同浓度(0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU培养24 h后,收集细胞,用CCK-8试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒分别检测DC刺激混合淋巴细胞时细胞的增殖和DC凋亡率。[结果]NMU(0.1~100 nmol·L~(-1))能够抑制未成熟树突细胞(i DC)的细胞凋亡(P0.01),且NMU与NMU+LPS作用效果相一致,10 nmol·L~(-1)NMU组与10 nmol·L~(-1)NMU+LPS组都能降低i DC凋亡,凋亡率分别为2.383%和2.360%,与LPS组相比,NMU+LPS组抑制i DC细胞凋亡效果极显著(P0.01),说明NMU与LPS协同发挥抑制i DC细胞凋亡作用;与对照组相比,0.1~100 nmol·L~(-1)NMU能极显著促进m DC分泌IL-5(P0.01)和抑制IL-4分泌(P0.01)。NMU对IL~(-1)3的影响呈现多样性,低剂量(0.01~0.1 nmol·L~(-1))NMU在2、4 h抑制m DC细胞分泌IL~(-1)3(P0.05),中剂量(1~10 nmol·L~(-1))NMU在2 h先抑制m DC分泌IL~(-1)3(P0.05),4 h后又促进其分泌(P0.05),高剂量(100~1 000 nmol·L~(-1))NMU则促进m DC分泌IL~(-1)3(P0.05)。经NMU诱导后,i DC和m DC均能促进T淋巴细胞增殖(P0.01)。[结论]在一定浓度范围内,NMU能够抑制猪树突细胞的凋亡,并提高其细胞活性和促进树突细胞刺激淋巴细胞增殖的功能,并能影响树突细胞细胞因子分泌,提示神经介素U参与了对猪免疫功能的调节。     

CD158受体表位封闭对急性髓系白血病患者NK细胞杀伤活性的影响

目的 研究急性髓系白血病患者NK细胞CD158受体表位封闭对自身白血病细胞杀伤活性的影响.方法 分离急性髓系白血病患者及健康志愿者外周血NK细胞,以自身白血病细胞及K562细胞为靶细胞,用CCK-8试剂盒检测CD158a、CD158b单克隆抗体封闭前后NK细胞在1：1、5：1、10：1效靶比下对靶细胞的杀伤活性.结果 患者与正常人NK细胞对K562细胞均有高度杀伤活性,且随效靶比增大而增高（P＜0.01）.效靶比为1：1、5：1、10：1时,患者NK胞在封闭前对白血病细胞杀伤活性分别为（1.5±0.3）%、（5.6±0.8）％、（11.8±0.6）%,封闭后分别为（21.8±0.7）％、（38.6±0.9）％、（53.9±1.4）％,各效靶比组封闭前后差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 急性髓系白血病患者NK细胞CD158受体表位封闭可提高NK细胞对自身白血病细胞的体外杀伤能力.     

L-肉碱对H_2O_2诱导氧化应激FHM细胞的影响

[目的]本文旨在研究L-肉碱对氧化应激状态下胖头鱥肌肉细胞系(fathead minnow muscle cell line,FHM)细胞活力、脂质过氧化及抗氧化功能的影响。[方法]以FHM细胞为研究对象,以H_2O_2为氧化应激因子,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度L-肉碱(0.001、0.01、0.1、0.5、1.0和5.0 mmol·L~(-1))预处理6 h分别对0.2和0.6 mmol·L~(-1)H_2O_2诱导的细胞氧化应激活力的影响,并采用生物化学方法检测L-肉碱预处理对氧化应激FHM细胞中脂质过氧化程度及抗氧化酶的变化。[结果]0.2和0.6 mmol·L~(-1)H_2O_2刺激FHM细胞1 h,细胞活力分别降低至72%和58%。与H_2O_2组相比,0.001~1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱预处理使低氧化水平(0.6 mmol·L~(-1)H_2O_2)的FHM细胞活力显著升高;且0.001、0.5和1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱均显著降低不同氧化水平细胞中MDA含量。与0.2 mmol·L~(-1)H_2O_2组相比,0.001、0.01、0.1和1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞T-GSH含量;0.001、0.01和1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞中T-SOD活性;0.5~5.0 mmol·L~(-1)L-肉碱组细胞中CAT活性显著增加;添加0.001~1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞GPx活性,但γ-GCS活性只有0.5 mmol·L~(-1)L-肉碱组显著升高。与0.6 mmol·L~(-1)H_2O_2组相比,0.001~1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞中T-GSH含量,0.01~5.0 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞中CAT活性,0.001 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提高细胞T-SOD活性,0.01 mmol·L~(-1)L-肉碱显著提升细胞γ-GCS活性;同时,L-肉碱的处理显著增强细胞GPx活性。[结论]高浓度(0.6 mmol·L~(-1))H_2O_2对FHM细胞的损害较大;0.001~1.0 mmol·L~(-1)L-肉碱可提高FHM细胞活力和抗氧化能力,并对细胞抵抗H_2O_2诱导的不同程度氧化应激有积极作用。     

不同浓度硫化氢对肠上皮细胞炎症、线粒体功能和氧化应激的影响

[目的]本试验使用硫氢化钠(NaHS,硫化氢供体)处理Caco-2细胞,研究硫化氢(H_2S)对肠上皮细胞炎症、氧化应激和线粒体硫化物代谢功能的影响,探究H_2S影响肠道健康的可能机制。[方法]试验分为4个组,分别为对照组、低(0.1 mmol·L~(-1))、中(1 mmol·L~(-1))、高(2 mmol·L~(-1))浓度的NaHS组,处理24 h后测定各组细胞活力、炎症细胞因子基因表达、硫化物代谢酶基因表达和氧化应激指标。[结果]与对照组相比,NaHS能够增强肠上皮细胞活力,2 mmol·L~(-1) NaHS显著上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)的基因表达水平(P0.05),0.1 mmol·L~(-1) NaHS上调线粒体硫化物代谢酶硫醌氧化还原酶(SQR)、硫代硫酸盐硫转移酶(TST)、硫双加氧酶(ETHE1)和亚硫酸氧化酶(SUOX)的基因表达,而2 mmol·L~(-1) NaHS下调SQR的基因表达,显著提高丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性(P0.05),显著降低超氧化物歧化酶(SOD)活性(P0.05),0.1 mmol·L~(-1) NaHS显著提高MDA含量(P0.05),1 mmol·L~(-1) NaHS则显著降低SOD活性(P0.05)。[结论]低浓度H_2S能增强细胞活力,提高线粒体硫化物代谢能力和氧化应激水平。高浓度H_2S能促进炎症反应,提高氧化应激水平,影响线粒体硫化物代谢能力,可能对肠道健康产生不利影响。     

乳酸脱氢酶释放法检测鸡自然杀伤细胞活性条件的优化

以肉仔鸡外周血自然杀伤(NK)细胞作为研究对象,探讨乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性中5个最为关键的影响因素,选用Yac-1淋巴瘤细胞作靶细胞.结果表明:效靶细胞比为15∶1,在含2%犊牛血清的RPMI 1640维持液中,效靶细胞于37℃、5%CO2条件下作用2 h,于37℃恒温条件下酶促反应10 min,检测波长为492 nm可获得满意结果;验证试验结果表明,优化的LDH释放法检测鸡外周血NK细胞活性的方法是可行的.     

肾素-血管紧张素系统2条通路在油酸致大鼠BRL-3A细胞非酒精性脂肪肝中的作用

[目的]通过建立油酸诱导的大鼠肝脏间质BRL-3A细胞非酒精性脂肪肝(NAFLD)损伤模型,探讨BRL-3A细胞中RAS的ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang-1-7/Mas这2条通路相互负向调节与NAFLD细胞损伤的关系。[方法]采用不同浓度油酸(0.025、0.05、0.1和0.2 mmol·L~(-1))处理BRL-3A细胞24 h,通过检测细胞活力、细胞内甘油三酯(TG)含量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及油红染色确立NAFLD细胞模型条件,然后选取低、中、高3个浓度(0.025、0.1和0.2 mmol·L~(-1))油酸作用于细胞24 h,用ELISA法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)水平;Western blot分析细胞内血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)、Mas受体(MasR)蛋白水平;斯皮尔曼相关分析法分析油酸浓度与细胞内ACE、ACE2表达水平的相关性。[结果]1)用0.1 mmol·L~(-1)油酸处理BRL-3A细胞24 h,成功建立BRL-3A细胞NAFLD模型。2)油酸处理24 h后,BRL-3A细胞出现脂滴沉积,在0.025 mmol·L~(-1)油酸(低浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平有升高趋势,AngⅡ水平与AT1R表达水平下降,ACE/ACE2值下降;0.1 mmol·L~(-1)油酸(中浓度)组ACE、AT1R表达水平显著升高,其他RAS成员变化不明显;0.2 mmol·L~(-1)油酸(高浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平下降,AngⅡ水平和ACE、AT1R表达水平及ACE/ACE2值升高。3)斯皮尔曼相关分析显示,油酸浓度、血液相关生化指标(TG含量、AST和ALT活性)和脂滴数及脂滴面积与ACE2表达水平和Ang1-7水平负相关,而与ACE表达水平和AngⅡ水平正相关。[结论]BRL-3A细胞中的2条轴共同参与了油酸致BRL-3A细胞NAFLD损伤的发生和发展过程。低浓度油酸时,ACE2介导的Ang1-7/MasR通路占优势;高浓度油酸处理细胞损伤加重,ACE介导的AngⅡ/AT1R通路占主导地位。ACE2与油酸致细胞炎性损伤的程度呈显著负相关关系。     

玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞乳酸产生及相关蛋白表达的影响

[目的]本文旨在探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)乳酸产生的影响,[方法]以Wistar大鼠SC为研究材料,采用不同浓度的ZEA(0、0.1、1、10、20、30μmol·L~(-1))处理24 h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放检测试剂盒检测ZEA对SC的毒性作用;乳酸测试盒检测ZEA对SC内、外乳酸产生的影响;丙酮酸测试盒检测ZEA对SC内丙酮酸产生的影响; Western blot检测SC乳酸代谢通路相关蛋白的表达;免疫荧光法检测乳酸产生关键酶LDH荧光强度的改变。[结果]随着ZEA浓度的增加,ZEA对SC的细胞毒性逐渐增大(P0.01);与对照组相比,染毒组细胞内、外乳酸含量和细胞内的丙酮酸含量显著或极显著下降(P0.05或P0.01),葡萄跨膜糖转运蛋白1(GLUT1)和乳酸脱氢酶(LDH)在1、10、20、30μmol·L~(-1)ZEA染毒组的蛋白表达量极显著降低(P0.01);单羧酸转运蛋白4(MCT4)在30μmol·L~(-1)ZEA染毒组的蛋白表达量呈显著降低(P0.05);免疫荧光检测结果表明,LDH的荧光强度随着染毒浓度增加而降低,与对照组相比,10、20、30μmol·L~(-1)ZEA染毒组细胞内的蛋白表达量均极显著下降(P0.01)。[结论]ZEA可以抑制SC乳酸产生,干扰SC对生殖细胞的能量供应,进而对雄性生殖功能产生损伤。     

褪黑素对HT-2毒素诱导的牛卵巢颗粒细胞内质网应激与自噬的影响

[目的]本文旨在探讨HT-2毒素对牛卵巢颗粒细胞内质网应激与自噬的影响,并评估褪黑素(Mel)是否能减弱HT-2毒素对颗粒细胞的毒性作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞,使用0、5、25、50、75和100 nmol·L~(-1) HT-2毒素分别处理细胞24 h,或使用褪黑素(100μmol·L~(-1))预处理12 h后再用HT-2毒素(50 nmol·L~(-1))处理24 h。采用CCK-8检测细胞增殖,用细胞免疫荧光技术检测细胞自噬,用RT-qPCR分析内质网应激与自噬关键基因CHOP、GRP78、Atg7和p62 mRNA表达,用Western blot检测内质网应激和自噬相关蛋白的表达。[结果]与对照组相比,HT-2毒素可导致卵巢颗粒细胞的增殖并呈浓度依赖性减少。免疫荧光染色显示HT-2毒素诱导的细胞自噬呈浓度依赖性增加(P0.01)。内质网应激相关基因CHOP和GRP78 mRNA及蛋白表达呈浓度依赖性上调(P0.01),自噬相关基因Atg7 mRNA表达呈浓度依赖性增加(P0.01),p62 mRNA及蛋白表达呈浓度依赖性减少(P0.01)。褪黑素预处理显著减轻了HT-2毒素诱导的内质网应激和自噬。[结论]HT-2毒素可诱导牛卵巢颗粒细胞的内质网应激和自噬并呈浓度依赖性增加,褪黑素可以缓解HT-2毒素诱导的内质网应激和自噬作用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导PC12细胞凋亡及对相关基因Bcl-2、Bax、Bid mRNA和蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9表达水平的影响。[方法]用不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·m L~(-1))对PC12细胞染毒24 h,采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量PCR、Western-blot等方法,研究DON对PC12细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。[结果]不同浓度的DON均可诱导细胞凋亡,各试验组细胞凋亡率均极显著高于对照组(P0.01),并随着染毒剂量的增加而升高,在1 000 ng·m L~(-1)时达到峰值;与对照组相比,各试验组Bax mRNA表达水平和Bax/Bcl-2值均极显著增加(P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01),而Bid mRNA表达水平在DON浓度超过250 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01);Western-blot检测结果显示,各试验组cleaved-Caspase 9蛋白表达量均极显著高于对照组(P0.01),而cleaved-Caspase 3蛋白表达量在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著增加。[结论]DON能够诱导PC12细胞发生凋亡,凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid及蛋白Caspase3、Caspase9等参与了DON诱导PC12细胞凋亡的调控。     

鄂药砍户达正丁醇萃取层物质的抗氧化活性研究

目的用三种不同方法(抗氧化试剂盒法)测定鄂药砍户达正丁醇萃取层的抗氧化性。方法对砍户达正丁醇部位进行硅胶柱色谱分离,通过抗氧化试剂盒测定总萃取物及流分Fr. 10、Fr. 16、Fr. 20、Fr. 25的总的抗氧化的能力(T-AOC)和清除羟自由基的能力,以及过氧化氢酶(CAT)活力。结果当萃取物浓度在833. 33μg·m L~(-1)至5 000. 00μg·m L~(-1)范围内,总萃取层提取物及流分Fr. 10、Fr. 16、Fr. 20、Fr. 25的总抗氧化能力(T-AOC)与浓度的变化呈正相关,4组流分中,Fr. 16抗氧化能力最强,其浓度在5 000. 00μg·m L~(-1)时,总抗氧化能力(T-AOC)为91. 01 U·m L~(-1);总萃取层提取物的过氧化氢酶(CAT)活力随浓度的增大呈现先增大而后急剧减小的趋势,4组流分的过氧化氢酶(CAT)活力也出现类似的变化趋势,其中Fr.16、Fr. 20均有较高的过氧化氢酶(CAT)活力,当萃取物浓度在166. 67μg·m L~(-1)时,Fr. 16的CAT活性可达到33. 22 nmol·min-1·g-1,Fr. 20的CAT活性可达到32. 55 nmol·min-1·g-1。当萃取物浓度在3 333. 33μg·m L~(-1)至8 333. 33μg·m L~(-1)范围内,总萃取层提取物及4组流分清除羟自由基能力与浓度变化呈正相关,4组流分中,Fr. 16清除羟自由基的能力最强,当浓度在8 333. 33μg·m L~(-1)时,羟自由基清除率为96. 22%。结论砍户达正丁醇萃取层物质具有较显著的抗氧化性。     

甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成及增殖的影响

[目的]本试验旨在探究甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成功能以及增殖的影响。[方法]首先采用免疫组化法鉴定甲状腺素受体(TRα/β)在猪卵巢组织的表达情况,随后体外培养猪卵巢原代颗粒细胞,选取低(10-8mol·L~(-1))、中(10-7mol·L~(-1))、高(10-6mol·L~(-1))3种浓度的甲状腺素(T4)孵育24 h,采用酶联免疫法检测细胞培养液中孕酮(P4)和雌二醇(E2)水平,并采用蛋白印迹法检测颗粒细胞内激素合成相关酶蛋白(3β-HSD、CYP19)的表达情况。采用MTT法检测各浓度甲状腺素对细胞活力的影响,利用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光染色验证不同浓度甲状腺素对颗粒细胞增殖的影响。[结果]免疫组化结果显示:TRα/β在猪卵巢不同发育阶段卵泡的颗粒细胞、膜细胞中有广泛表达,在卵母细胞的胞质中也有分布,在闭锁卵泡中也见明显表达。猪卵巢原代颗粒细胞经甲状腺素处理后,细胞培养液中的孕酮和雌激素水平都显著低于空白对照组(P0.05),并且各剂量处理组间孕酮呈现出剂量依赖性降低趋势;雌激素在低浓度和高浓度甲状腺素处理组较中浓度处理组高。蛋白免疫印迹结果显示:与对照组相比,3β-HSD和CYP19蛋白在较高浓度甲状腺素(10-7和10-6mol·L~(-1))处理组的表达量均显著降低(P0.05);而在低浓度甲状腺素(10-8mol·L~(-1))处理组,CYP19蛋白表达量显著降低(P0.05),但3β-HSD蛋白表达无显著差异。此外,MTT细胞毒性和增殖试剂盒检测结果显示:不同浓度甲状腺素处理并不影响细胞活力,这与PCNA免疫荧光强度统计结果一致,进一步证实了甲状腺素对原代颗粒细胞增殖没有影响。[结论]甲状腺素能够作用于卵巢颗粒细胞,干扰类固醇激素的合成,其作用机制可能是通过改变激素合成相关蛋白3β-HSD和CYP19的表达来完成的。而甲状腺素对颗粒细胞激素合成的干扰效应并不影响细胞增殖状态。     

猪屎豆抗氧化活性成分的提取及活性测定体系的优化

[目的]研究猪屎豆（Crotalaria mucronata Desv.）乙醇提取物的抗氧化活性。[方法]采用超声波辅助乙醇提取法提取猪屎豆抗氧化活性成分,用H2O2-鲁米诺化学发光体系测定清除羟自由基（·OH）的效率。并对测定体系进行优化。[结果]在料液比为3.6∶1,乙醇体积分数为70%,提取时间为30min,提取温度为80℃,猪屎豆乙醇提取物对·OH的清除效果最佳。清除率测定体系中,H2O2浓度为0.60%和Luminol浓度为1.00×10-4mol/L时测定结果较准确。[结论]猪屎豆乙醇提取物对·OH有很好的清除作用。     

MyD88抑制剂ST2825对丝状支原体山羊亚种 感染宿主细胞的影响

为分析MyD88在丝状支原体山羊亚种(Mmc)感染肺泡上皮细胞中的分子机制。以山羊肺泡上皮细胞为材料,用不同浓度的MyD88抑制剂(ST2825)与细胞孵育,MTT法检测细胞活性,试剂盒检测caspase-3的活性,以及实时定量PCR检测MyD88和TNF-a mRNA的表达水平,试剂盒检测H_2O_2浓度和NO浓度。当ST2825浓度为5、10和20μmol·L~(-1)不影响细胞活性,而浓度为40μmol·L~(-1)时细胞活性显著降低;感染比例(MOI)为10,感染时间为8、12和24 h,Mmc可以显著提高MyD88 mRNA的表达水平(P0.01);可显著提高caspase-3的活性,而ST2825能够显著降低caspase-3(P0.05);感染时间为24 h,Mmc可显著提高TNF-a mRNA的表达水平、H_2O_2浓度和NO浓度(P0.05),而ST2825在10和20μmol·L~(-1)的浓度时,可显著降低Mmc介导的caspase-3活性、H_2O_2浓度以及LDH水平(P0.05),ST2825在5、10和20μmol·L~(-1)浓度时可显著降低TNF-a mRNA的表达水平和NO浓度(P0.05)。     

明胶对鸡胚盘细胞的增殖和多功能性的影响

[目的]本试验旨在解决鸡胚盘细胞(c BC)不易贴壁的问题及应用E8培养基建立新的鸡胚盘细胞培养体系。[方法]在E8培养基基础上,应用10 g·L~(-1)明胶和人重组玻连蛋白(h VTN)包被培养板,对比其在促进鸡胚盘细胞贴壁速度、促进增殖和维持多功能性方面的差异。[结果]使用10 g·L~(-1)明胶包被培养板后,鸡胚盘细胞12 h内即可迅速贴壁。10 g·L~(-1)明胶处理组中5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)阳性细胞率显著高于对照组(P0.01),并且能够抑制凋亡基因P21、Fas的mRNA表达(P0.05),进而促进细胞增殖,并且能够促进多功能基因Nanog、PouV的表达来维持c BC的多功能性。[结论]10 g·L~(-1)明胶可以作为一种新的包被试剂来进行cBC的培养,与人重组玻连蛋白相比,明胶体现了更高的性价比,具有较高的应用价值。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对IPEC-J2细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响及其自噬机制

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L~(-1))DON处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT、Hoechst 33258、Western blot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L~(-1) DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L~(-1)时,细胞活性显著(P0.05)或极显著(P0.01)下降。4和8μmol·L~(-1) DON处理凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3表达显著增加(P0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。     

水茄组织培养技术体系的建立

[目的]本文旨在建立高效的水茄下胚轴组织培养愈伤诱导和再生植株体系。[方法]以水茄下胚轴为外植体,采用组织培养技术,通过对25个激素组合的分析,研究了愈伤组织诱导与芽分化、继代和生根培养3个技术环节的激素配比,同时对愈伤诱导植株再生过程中的潮霉素筛选压进行了测定。[结果]结果表明,以MS为基础培养基,下胚轴愈伤组织诱导和芽分化以6-BA 2 mg·L~(-1)+IAA 0.1 mg·L~(-1)为宜,增殖系数达6.62;在继代培养中,使用MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+IAA 0.1 mg·L~(-1)即可维持较高的增殖系数6.62;生根培养最佳培养基为1/2MS,培养2周后生根率达90%。8 mg·L~(-1)是水茄外植体再生较为合适的潮霉素筛选压浓度。[结论]本研究以优化激素配方6-BA 2 mg·L~(-1)+IAA 0.1 mg·L~(-1)作为基础培养基成分,为进一步建立农杆菌介导的遗传转化研究奠定了基础。     

H_3N_2亚型犬流感病毒鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的制备与活性分析

[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H_3N_2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体。[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL~(-1),检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。[结果]获得的H_3N_2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶640(1.56μg·mL~(-1))和1∶160(6.25μg·mL~(-1)),中和效价为1∶160(6.25μg·mL~(-1));鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶2 560(0.39μg·mL~(-1))和1∶640(1.56μg·mL~(-1)),中和效价为1∶40(25μg·mL~(-1))。[结论]成功制备了H_3N_2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础。     

超声波法提取牡荆总黄酮的工艺及其抗氧化活性的研究

[目的]研究牡荆总黄酮的最佳提取工艺及其抗氧化活性。[方法]以牡荆叶片为材料,采用单因素和正交试验研究乙醇浓度、固液比、超声时间及超声功率对总黄酮提取率的影响,在此基础上对提取工艺进行优化;以大鼠肝匀浆为材料,测定牡荆总黄酮的抗氧化活性。[结果]各因素对总黄酮提取率的影响由大到小依次为：乙醇浓度〉超声时间〉固液比〉超声功率,当乙醇浓度为30%、固液比为1∶10-1∶20、超声时间为30-60 m in、超声功率为600 W时,总黄酮提取率较高;优化后的提取工艺为：乙醇浓度40%,固液比1∶20,超声时间60 m in,超声功率600 W,此条件下总黄酮提取率为5.886%。[结论]牡荆总黄酮具有较强的抗氧化活性,且在0-0.125 5范围内具有较好的量效关系。     

壳寡糖不同剂量与施药时期对玉米苗期抗旱性的影响

以郑单958为供试材料,将壳寡糖(Mw﹤1000)配制成不同浓度(10 mg·L~(-1)、1 mg·L~(-1)、0.1 mg·L~(-1)、0.01 mg·L~(-1))分别于苗期(一叶期、两叶期、三叶期)喷施玉米叶片,干旱胁迫后测定相关生理指标,以期研究最佳施药浓度及施药时间。结果表明,壳寡糖叶面喷施可以提高玉米的鲜重和相对含水量,降低相对电导率、降低丙二醛、可溶性糖和可溶性蛋白含量。其最佳施药时间为三叶期,最佳施药浓度为1 mg·L~(-1)。     

水杨酸浸种对干旱胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响

采用10%PEG-6000模拟干旱胁迫,研究不同浓度(0、0.001、0.01、0.05、0.1、1.0和2.0mmol·L~(-1))的水杨酸浸种对干旱胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:与对照相比,10%PEG胁迫对玉米种子萌发及幼苗生长有明显的抑制作用,使可溶性蛋白质含量明显降低,MDA含量升高,POD、CAT和SOD活性降低。适宜浓度水杨酸浸种对玉米种子萌发及幼苗生长有明显的促进作用,可溶性蛋白质含量增加,MDA含量降低,POD、CAT和SOD活性增强,其中以浓度为0.01~0.05mmol·L~(-1)效果最好。