中国沙棘体细胞胚胎间接发生与植株再生

以中国沙棘组培苗茎尖为外植体,在1/4 MS基本培养基上,对愈伤组织、胚性愈伤组织及体细胞胚胎进行诱导,探讨植物生长调节剂配比对中国沙棘愈伤组织、胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生的影响。结果表明:在KT 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L的最佳组合中,暗培养20 d后,愈伤组织的诱导率达到90.10%;暗培养30 d后,胚性愈伤组织的诱导率达到77.67%;将胚性愈伤组织转移到新鲜诱导培养基上,光培养20 d,平均体细胞胚发生数达到15.48。为了得到完整的再生小植株,将胚状体转移到不含任何生长激素的体细胞胚发育及植株再生培养基上,分析了KT和白砂糖不同浓度的组合对小植株再生的影响。结果发现:WPM + KT 0.05 mg/L + 白砂糖 20 g/L + 琼脂粉 6.5 g/L + CH 0.5 g/L处理上的植株再生率达到60.30%。该研究建立起了完整的中国沙棘体细胞胚胎间接发生的再生体系。      

白花泡桐体细胞胚胎发生及植株再生

植物体细胞胚胎发生及植株再生为高等植物在细胞水平上进行遗传操作及品种改良提供了可靠的依据和有效途径。近年来,国内外科学工作者已对多种木本植物的体细胞胚胎发生及植株再生进行过研究。泡桐为玄参科植物,是我国的重要速生用材树种,有关其器官发生和原生质体游离及植株再生的研究国内外已有报道,而目前有关体细胞胚胎发生及植株再生研究只有兰考泡桐的报道。为了顺利进行泡桐的基因工程和细胞工程操作及新品种的快速繁育,本文研究了2种基因型泡桐叶片和茎段的体细胞胚胎发生及植株再生。一、材料与方法(一)试验材料材料为用2001年9月…     

湿地松及其杂种的体细胞胚胎发生与植株再生

【目的】明确适合湿地松Pinus elliottii及其杂交种的体细胞胚胎发生条件,建立体胚成熟萌发的技术。【方法】以2016年6月采集的2个湿地松家系(EE1,EE2)、2个湿地松杂交种家系(EC,EH)的未成熟合子胚(含胚乳)为材料,从诱导、增殖、成熟到萌发配制3个系列培养基,比较外植体采集时间、家系、基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。用显微镜进行胚性愈伤组织鉴别后,进一步挑选诱导形成的胚性愈伤组织进行增殖、成熟、萌发,最终获得再生植株。【结果】湿地松及其杂交种合子胚的发育进程可划分为8个阶段,阶段Ⅱ、Ⅲ为未成熟胚,适合体胚发生,EC最早出现阶段Ⅲ合子胚。外植体诱导产生具有胚性胚柄团(ESM)结构的胚性愈伤组织,可进一步增殖。诱导培养基对愈伤组织形成及胚性愈伤组织占比具有较大影响,3种诱导培养基(T1、T2和T3)产生愈伤组织效率最高的为T1培养基(49.0%),胚性愈伤组织所占愈伤组织的比例最高为T2培养基(22.4%)。培养基配方的诱导率存在基因型间的差异,T1培养基整体诱导率低;T2培养基对家系EE1诱导率最高,为5.82%;T3培养基对参试材料均能诱导成功,且平均诱导率最高,为3.75%。随采样时间延后,家系EE1、EH的体胚诱导率逐渐增加,家系EE2、EC的体胚诱导率则随采样时间延后逐渐降低。体胚诱导率与合子发育阶段结果基本一致,阶段Ⅲ合子胚均出现较晚,前期诱导率低。胚性愈伤组织继代24次以后,胚活性逐渐降低。成熟培养基T1S和T3S可完成胚的成熟,平均每克成熟培养基分别成熟23.3和15.9个子叶胚,萌发率为32.1%,移栽保存率为47.8%。【结论】诱导培养基T3对参试家系均能诱导成功,T3具有较广泛适用性,各家系在阶段Ⅲ合子胚出现时表现出较大的诱导率,阶段Ⅲ合子胚可能为体细胞胚发生的最佳诱导阶段。建立了湿地松及其杂种体细胞胚发生方法并形成了再生植株。     

枸杞体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以甘肃农业大学林学院实验基地内“宁杞 2 号”枸杞为材料,幼果用 0.1 % HgCl2进行消毒,在无菌条件下取出未成熟胚进行诱导,在胚成苗后进行继代和生根培养。培养结果表明:以 MS 为基本培养基,附加 6-BA1.0 mg/L和 IBA0.5 mg/L对体细胞胚胎诱导最有效;在 2,4-D为 1.0 mg/L和 1.5 mg/L时的培养基上胚性愈伤组织诱导率较高,分别为 51.0 %和 56.7 %;黑暗低温(10℃)处理 5d 不但可以促进细胞胚胎的发生,而且可以提高其发生的频率(60.0%)。     

三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生研究

以三叶木通成熟种子的幼胚为材料,探讨不同浓度2,4−D（1.0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、6−BA（0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、KT（0.2、0.5、1.0 mg/L）的植物生长调节剂对三叶木通愈伤组织的诱导及体细胞胚胎发生的影响,分别筛选出诱导愈伤组织、体细胞胚、次生胚增殖、植株再生的最适培养基,以此间接途径建立三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明：三叶木通种子最佳灭菌处理方式为0.1 % HgCl₂灭菌18 min,无菌水冲洗干净后接种在添加了0.05 % PPM的愈伤诱导培养基上;三叶木通幼胚诱导愈伤组织的最佳培养基是 MS+2.0 mg/L 2,4−D+0.2 mg/L NAA,愈伤诱导率为95.67%;胚性愈伤诱导三叶木通体胚发生的最佳培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L 6−BA,体胚诱导率为55%;次生胚增殖的最佳培养基为MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6−BA,增殖倍数达19.84,体胚随继代次数增多逐渐分化,次生胚增殖活力变弱;成熟的体胚分化后一部分可再生成苗,在MS中能起到壮苗作用,再生植株转移至人工光照培养箱中炼苗3~5 d再转入V（泥炭土）∶V（蛭石）∶V（珍珠岩）为2∶1∶1的基质中能够稳定生根成活且形态正常。     

西洋参体细胞胚胎发生及植株再生

西洋参不同外植体诱导愈伤组织的能力存在明显差异,以子叶的愈伤组织诱导率最高。愈伤组织的分化能力随继代培养而增强,5％聚乙二醇可促进西洋参体细胞胚胎的发生。去除硝酸铵有助于西洋参再生小植株根系的生长发育。     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

[目的]对日本落叶松体细胞胚胎发生进行系统研究。[方法]以日本落叶松5个品种的未成熟合子胚为外植体,研究基本培养基、品种基因型、杂交系和纯系品种对日本落叶松愈伤组织诱导的影响,以及ABA对体细胞胚成熟及植株再生的影响。[结果]通过对日本落叶松胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的成熟培养获得再生植株。2种基本培养基中,DCR对胚性愈伤组织的诱导频率最高,达54.0%;落叶松品种之间的愈伤组织诱导率有差异,以杂交品种愈伤组织的诱导率最高,达71.4%,优于纯系的落叶松品种（27.3%～50.0%）;在体细胞胚的成熟培养过程中,ABA可严重影响体细胞胚的发育,并影响到其以后的萌发能力和植株再生。[结论]杂交品系更有利于胚性愈伤组织诱导,ABA对日本落叶松体细胞胚胎发育起重要作用。     

麻城油茶体细胞胚胎发生及植株再生

为建立油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的技术体系,以湖北麻城油茶7月中旬幼胚为试验材料,消毒后切块接种于分别附加了2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT和5.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,进行愈伤组织诱导培养。1个月后统计出愈率,两种处理的愈伤组织诱导率分别为83.23%和45.34%;挑选状态良好的愈伤组织继代于附加了1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,培养2个月后可见明显的胚状体形成,统计胚状体平均发生率为15.25%;随后将胚状体继代于附加了1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA的MS培养基上进行胚状体发育和植株再生培养,获得具备完整子叶的胚状体后,转移至含有3.0 mg/L 6-BA的1/2MS培养基中进行生根培养,获得完整再生植株后驯化移栽至营养钵中继续生长。本研究建立了麻城油茶6个月内获得体细胞胚胎发生及植株再生的技术体系,为建立油茶农杆菌介导的遗传转化技术体系奠定了基础。     

烟草体细胞胚胎发生再生植株

以烤烟K326、红大、云85叶片诱导的愈伤组织为材料,在含不同激素配比的培养基上进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力.结果表明:不同品种之间体胚的发生能力存在较大差异,不同激素配比诱导体胚发生的频率也不同,K326、红大、云85体胚最高的发生频率分别为8.3%、47.4%和61.1%;最佳激素配比分别为2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA、2.0mg·L-1NAA+0.2mg·L-1BA和2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA.试验中观察到烟草体胚发育的各阶段,并最终再生成完整植株.     

月月红月季体细胞胚胎植株再生关键技术研究

以带1 mm叶柄的月季叶片为外植体诱导出胚性愈伤和体细胞胚胎,对月季体细胞胚胎植株再生进行研究。结果表明,月季体细胞胚胎再生与培养基种类、培养基坡度和体细胞胚胎自身类型等密切相关。月季体细胞胚胎在SP/R培养基(含1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+3.0mg/L GA3)上比在EM培养基(含1.0 mg/L 2,4–D+0.1 mg/L TDZ)上能再生出更多小植株,在EP培养基(含3.0 mg/L 2,4–D+0.5 mg/L TDZ)上则逐步褐化死亡;将培养基放置成坡面,有利于体细胞胚胎分化出芽和根,提高植株再生率;在体细胞胚胎的子叶尚未完全开张(呈90°~150°角)前转入倾斜的SP/R培养基可以再生出正常植株,体细胞胚胎子叶充分伸展甚至向外翻转时(大于150°角)再转入倾斜的SP/R培养基,体细胞胚胎则会回到愈伤组织形态,丧失植株再生能力。     

无籽西瓜子叶体细胞胚发生及植株再生研究

‘黑蜜2号’无籽西瓜的种胚经3 d暗培养后,在(16L∶8D)h.d-1的光周期下培养获得无菌苗,以其子叶为外植体进行体细胞胚发生及植株再生的研究.结果表明:从无籽西瓜子叶诱导胚性愈伤组织和体细胞的最适培养基为MS 6-BA 3.0 mg.L-1 NAA 0.1 mg.L-1,诱导的适宜条件为暗培养7 d,再在(16L∶8D)h.d-1的光周期下培养7 d;诱导丛生芽生根的最适培养基分别为1/2 MS IBA 0.3 mg.L-1和1/2 MS NAA 0.3 mg.L-1.     

毛泡桐悬浮细胞培养及其植株再生

先将毛泡桐叶片在MS,WPM,KM_8P和B_5等液体基本培养基中进行悬浮培养,然后建立毛泡桐叶片悬浮细胞培养及其体外植株再生体系.结果表明,毛泡桐叶片愈伤组织悬浮诱导最适培养基为改良MS+0.2 mg·L~(-1) NAA+8 mg·L~(-1)BA;细胞悬浮培养的最佳起始密度为6.67×10~6个·mL~(-1);悬浮愈伤组织芽诱导和根诱导的最适培养基分别为MS+0.3 mg·L~(-1)NAA+17 mg·L~(-1)BA和1/2MS+0.1 mg·L~(-1)NAA.     

同源四倍体泡桐体外植株再生系统建立

以叶片为外植体,建立了同源四倍体兰考泡桐和白花泡桐体外植株再生系统.结果表明,同源四倍体兰考泡桐和白花泡桐幼苗叶片愈伤组织诱导的最适培养基分别为MS NAA 0.3 mg.L-1 BA 8 mg.L-1和MS NAA 0.1 mg.L-1 BA 10 mg.L-1;愈伤组织芽诱导的最适培养基分别为MS NAA 0.7 mg.L-1 BA 14mg.L-1和MS NAA 0.1 mg.L-1 BA 12 mg.L-1;幼芽生根的最适培养基皆为1/2 MS.     

新疆雪莲的体细胞胚胎发生及植株再生

通过对新疆雪莲进行胚性愈伤诱导培养(MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.05 mg/L),体细胞胚胎发生诱导培养(MS+2,4-D 0.1mg/L),体细胞胚胎分化培养(MS+PEG 25 g/L),体细胞胚胎萌发(MS+GA35 mg/L)和壮苗培养(MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3 mg/L),首次通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲的植株再生,生根率100%,成活率达60%,为其大规模人工栽培奠定了基础。     

花生体细胞胚发生及植株再生

以花生优良品种四粒红成熟种子胚轴为外植体,诱导体细胞胚发生并获得了再生植株。将胚轴切成小段,接种于附加40 mg/L的MS培养基上诱导胚性愈伤组织,愈伤组织转移至2,4-D 20 mg/L的MS培养基上形成体细胞胚。体细胞胚发生率达到66.67%;体细胞胚在BA浓度逐渐降低的MS培养基上培养,发育成完整植株。     

影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生的关键因素分析

[目的]棉花体细胞胚胎发生是转基因棉花新品种培育的重要条件,由于棉花不同品种中的基因型差别,棉花胚胎发生率及植株再生率较低.分析影响棉花体胚的成熟和萌发、体胚发生同步化控制、减少褐化率和畸形胚比例,以及提高植株再生率等主要因素,为解决棉花组织培养的关键问题提供参考.[方法]收集近年来棉花体细胞胚发生和应用研究进行总结与分析.[结果]分析了影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生过程的主要限制性因素.[结论]明确了存在的主要问题及给出相应对策,为深入探讨棉花品种的体细胞胚的发生发育规律及高效组织培养体系的建立提供科学依据.     

油棕体细胞胚的诱导和次生胚的增殖研究

油棕体细胞胚的诱导是油棕体胚发生技术体系中最关键的培养过程,通过建立油棕次生胚增殖培养方法可有效地实现油棕组培苗快速的增殖繁育。本研究通过系统的对油棕体细胞胚发生及次生胚再生途径中若干影响因子的比较研究,建立油棕体细胞胚和次生胚再生体系。结果表明:油棕体细胞胚再生体系在不同基因型的油棕品种内诱导率存在较大差别,其中植物外源激素二氯苯氧乙酸(2,4-D)对油棕胚诱导效果较好;油棕次生胚增殖在不同基因型的油棕品种内差异不显著,木本植物培养基(WPM)在油棕次生胚增殖中培养效果最好。     

东北天南星体细胞胚胎发生及植株再生体系的优化

为建立东北天南星体细胞胚胎发生体系,以东北天南星幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果表明,东北天南星叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L,诱导率为98%;体细胞胚胎发育及植株再生最适宜的培养基为MS+6-BA 0.9 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L,体细胞胚萌发率为99.5%,萌发的胚20 d后全部发育成完整植株。     

宜昌百合体细胞胚诱导及植株再生

为了对秦岭野生宜昌百合资源进行保存,并有效地解决其扩繁和再生问题,以秦岭野生宜昌百合为材料,研究不同质量浓度的激素组合、鳞片的不同部位及光暗培养对秦岭野生宜昌百合的体细胞胚诱导的影响。结果表明,鳞片诱导体细胞胚的适宜培养基为MS+0.5 mg/L TDZ(N-苯基-N-′1,2,3-噻二唑-5-脲)+1.0 mg/L NAA(a-萘乙酸)。鳞片基部诱导体胚率最高,为90.00%,鳞片分化体细胞胚的能力为基部>中部>上部。暗培养下诱导率为90.00%,高于光培养条件。