鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性

鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG 0.2～1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响.经Lablmage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在.将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性.12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长.     

绵羊β-防御素的研究进展

β-防御素是由上皮细胞产生的富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,具有广谱抗微生物活性,可代替抗生素应用于畜牧生产实践中,保障畜产品的生物安全。文章对绵羊β-防御素的分布、结构、生物学功能以及体外表达等最新研究进展作一综述,旨在供研究者参考。     

猪源β-防御素2和3的研究进展

防御素是一类阳离子抗菌肽,广泛存在于动物和植物体内。猪源β-防御素2和β-防御素3能抵抗猪体内病原微生物,并能调节机体免疫功能,对生殖发育也有一定的生理作用。猪源β-防御素2能促进仔猪生长,对猪红细胞毒性低,能在毕赤酵母中高效表达,其转基因猪也具有较好的抗病性能。因此,猪防御素具有潜在的应用价值。本文就猪源β-防御素2和β-防御素3在体内的表达分布和调控因素、参与调节的信号通路、在生殖发育和畜牧养殖方面的新功能及应用潜力进行综述。     

哺乳动物β-防御素研究进展

防御素是广泛分布于动植物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,它在先天性免疫系统宿主防御机制中起着重要的作用。笔者从哺乳动物β-防御素的组成分布入手,对β-防御素的分子结构与染色体定位、基因表达调控、生物学作用及应用前景等最新研究作一全面综述。     

禽类β-防御素的研究进展

本文对禽类β-防御素的分子结构、组织分布、抗菌作用以及基因工程研究进展进行了综述。     

驯鹿β-防御素reBD-1 cDNA的克隆及序列分析

从驯鹿舌黏膜上皮组织中提取总RNA，采用RT—PCR技术扩增出reBD-1的cDNA，并重组到pBlueselect T载体，经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定，证实所克隆的reBD-1的cDNA为β-防御素，因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框（ORF），该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素，该前原防御素含有伊防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。驯鹿β-防御素属首次发现，为更好地了解驯鹿黏膜防御机制有很大的帮助。     

骆驼β-防御素-1(caBD-1)基因在组织中的表达定位检测

防御素是一类富含半胱氨酸的阳离子抗微生物肽，具有广泛的抗微生物活性。哺乳动物防御素分子内含有由6个保守半胱氨酸残基形成的3对二硫键，根据其分子内二硫键的连接位置不同可分为α-防御素和β-防御素。防御素分子既可亲水又可亲脂，使其能与靶细胞膜相互作用并折断靶细胞膜，使靶细胞膜上形成通道，最终使靶细胞破裂死亡。     

β-防御素研究进展

β-防御素是近年来发现的一类广泛存在于动物体内具有广谱抗微生物活性的阳离子多肽。它具有抗细菌、真菌、螺旋体和部分带囊膜病毒及杀伤肿瘤细胞等多功能效应,在解决细菌耐药、抗病毒、调动机体的免疫功能及抗肿瘤方面有重要作用,并且一般不产生耐药性,因而其已成为当前学术界中一个引人关注的研究热点。文章就β-防御素的分子结构、生物学活性、作用机理、应用等方面做一综述。     

β-防御素caBD-1 mRNA在骆驼组织器官中的表达

根据已知的骆驼β-防御素caBD-1 cDNA序列设计了1对预计扩增产物为203bp的引物，通过RT—PCR检测骆驼的整个消化道黏膜、肝、胰腺、气管黏膜、肺、肾、膀胱黏膜、卵巢、子宫内膜、脾、淋巴结、心等器官内caBD-1 mRNA的表达。结果显示：caBD-1 mRNA在整个消化道、气管、膀胱、子宫等管状器官内的黏膜层有表达，而在实质性器官如心、肝、胰腺、肺、脾、淋巴结、卵巢、肾中无表达。提示，骆驼体内的这种内生性抗微生物肽有助于骆驼的黏膜宿主防御。     

猪β防御素-1的研究进展

猪β防御素-1 (porcine β-defensin 1,PBD-1)是广泛分布于猪消化道、呼吸道、肝肾等多种组织细胞内的一类活性多肽,在猪防御系统中有着重要的作用,大量研究结果证明PBD-1具有独特的作用机制,几乎无耐药性, 已引起各国研究者的日益重视。目前对PBD-1科研工作在不断深入,可以相信PBD-1将在动物养殖、疾病预防和提高畜产品品质方面发挥重要作用。作者就PBD-1的分布、分子结构、抗菌作用机制和基因表达调控研究进展作一综述。     

粤北三黄鸡β-防御素基因的表达及其生物活性研究

采用RT-PCR 方法从三黄鸡肝脏中扩增β-防御素 Gal-6基因的 cDNA 片段,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAL-6,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21进行原核表达。结果表明,成功获得201 bp的鸡β-防御素基因,SDS-PAGE 电泳分析表明,原核表达的重组鸡融合蛋白分子质量约为32 kD。此外,表达的该重组蛋白对金黄色葡萄球菌有较高抗菌活性。     

猪β-防御素-2转化酿酒酵母方法的比较分析

为了建立操作简单、高效率的猪β-防御素-2转化酿酒酵母的方法,试验比较了酿酒酵母的两种转化方法,即电转化和醋酸锂法。结果显示,两种转化方法对细胞生长状态均有严格的要求。在醋酸锂转化中,以培养10 h,D_{600 nm}为1.051的细胞制备感受态,热激时间为60 min时,转化率为136个/μg DNA;在电转化中,以培养12 h,D_{600 nm}为1.359的细胞制备感受态,电击电压2.5 kV时转化效率为154个/μg DNA。但综合操作效率,最终选择醋酸锂法进行酿酒酵母的转化。     

蒙古绵羊β-防御素-1cDNA的扩增及其序列分析

为了获得蒙古绵羊β-防御素-1（sBD-1）的cDNA序列,从蒙古绵羊瘤胃的上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出sBD-1的cDNA。结果 sBD-1的cDNA长为300bp,该cDNA包含由192bp组成的开放读码框（ORF）,ORF编码64个氨基酸的前原防御素。经过DNA序列分析。证实所扩增的cDNA为sBD-1。     

防御素在反刍动物中的应用

本文综述了防御素的分布、分子结构、抗茵原理以及在反刍动物中的研究应用.     

驯鹿β-防御素-1(reBD-1)mRNA在驯鹿组织器官中的表达检测

为了检测reBD-1 mRNA在驯鹿体内可能的表达器官,研究根据已知的reBD-1 cDNA序列设计了一对预计扩增产物为121 bp的引物,以驯鹿舌、食管、瘤胃、网胃、皱胃、十二指肠、回肠、结肠、肝、肺、气管、肾、膀胱、睾丸、附睾、心脏、脾脏中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测驯鹿的上述器官内reBD-1 mRNA的表达情况.结果显示:reBD-1 mRNA在上述组织器官中均有表达,其中在舌、瘤胃、睾丸中表达最强;在食管、十二指肠、结肠、气管、脾脏中有中等量的表达;在网胃、皱胃、回肠、肝、肺、肾、膀胱、附睾、心脏内的表达较弱.β-防御素reBD-1在驯鹿体内的广泛表达提示reBD-1有助于驯鹿的先天性宿主防御.     

禽防御素在雏鸡抗鸡白痢沙门菌感染中的表达及其分子设计

为了探寻有效防治雏鸡感染鸡白痢沙门菌的新型防御素生物制剂,建立雏鸡感染鸡白痢沙门菌(S.Pullorum)的模型,感染3²4 h后检测十二指肠组织禽防御素(Av BDs)抗感染的防御性表达水平,分析Av BDs的理论等电点,选择活性强且结构稳定的Av BD,对其进行分子设计,以期构建出理论生物活性更强且结构更稳定的改型防御素。结果表明,与对照组相比,雏鸡感染鸡白痢沙门菌324 h后检测十二指肠组织禽防御素(Av BDs)抗感染的防御性表达水平,分析Av BDs的理论等电点,选择活性强且结构稳定的Av BD,对其进行分子设计,以期构建出理论生物活性更强且结构更稳定的改型防御素。结果表明,与对照组相比,雏鸡感染鸡白痢沙门菌3²4 h后十二指肠Av BD-6的表达水平明显上升,差异显著(P<0.05),结合理论等电点分析,选择Av BD-6做设计出发肽,用天冬氨酸替换Av BD-6原有的中性氨基酸,并在C端增加抗菌肽BF2衍生物的α螺旋,成功构建了改型防御素Av BD6-BF2,其理论生物活性与结构稳定性均强于Av BD6出发肽。本研究将为Av BDs生物制剂用于防治鸡白痢沙门菌病的可行性提供参考。     

母牛卵泡期和黄体期子宫颈6种β-防御素的变化

为了解母牛生殖道β-防御素的表达及与发情周期的关系,实验采用荧光定量PCR检测卵泡期和黄体期母牛子宫颈6种β-防御素的变化。实验发现,在子宫颈中卵泡期和黄体期BNBD-4、BNBD-5的表达量无差异(P0.05),而卵泡期TAP、LAP1、BNBD-1、BNBD-10的表达量高于黄体期(P0.05)。母牛子宫颈中6种β-防御素均有表达,其中TAP、LAP1、BNBD-1、BNBD-10的表达量呈周期变化,可能与发情周期中子宫颈口开张程度有关。     

猪β-防御素的表达及其生物学功能研究进展

猪β-防御素是一种先天免疫小分子蛋白质,在宿主防御中起着重要作用.它们不仅具有抗细菌和病毒的活性,还能通过连接先天性免疫和适应性免疫来调节免疫功能,抵抗病原体的感染.基于猪β-防御素的抗微生物活性及其免疫调节功能,其既可以作为提高免疫力的内在潜力,也可以开发成外源应用的抗生素替代品.本文将综述猪β-防御素的表达与分布、...     

β-防御素的研究进展及其应用前景

β-防御素是动物体内广泛存在的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗微生物肽,其抗菌谱广,作用机理特殊,应用潜力高。概述了β-防御素的分子结构、作用机制、生物学活性、基因工程及国内外研究概况,并分析了其在畜牧业中的应用前景。