果树中基因枪法遗传转化的研究进展

目前,应用于果树遗传转化的方法主要有农杆菌介导法和DNA直接导入法。介绍了DNA直接导入法中基因枪转化技术的原理、类型和基因枪的轰击参数、受体材料、基因型、轰击前后的培养条件等对其遗传转化频率的影响,并系统地概述了基因枪法在选择标记基因、报告基因、改良果树性状相关基因、启动子及多基因遗传转化中的应用研究进展,同时对果树基因枪转化研究中存在的问题及应用前景进行了讨论。     

蛹虫草遗传多样性分析

比较12个蛹虫草菌株菌丝生长特性、子实体农艺性状,分析其酯酶同工酶,研究蛹虫草菌株的遗传特性及亲缘关系.结果表明:12个蛹虫草菌株的菌丝生长速度、菌丝密度、菌丝形态有一定差异,匍匐状菌丝更有利于现蕾;农艺性状不同的菌株间其酯酶同工酶酶带也不同,子实体农艺性状差异大的菌株其亲缘关系较远.酯酶同工酶电泳技术为蛹虫草良种选育...     

草菇基因枪法遗传转化体系的建立

 草菇菌株V1308对潮霉素、卡那霉素、遗传霉素、膦丝菌素的抗性测验结果表明, 该菌株对潮霉素敏感, 而对其它三者不敏感。进一步测定结果显示, 潮霉素的最低筛选浓度在PDSA固体培养基上为75 μg·mL ^{- 1} , 在PDSB液体培养基中为50μg·mL ^{- 1}。以含有35S启动子、gus报告基因、潮霉素抗性基因的质粒pCAMB IA1301为表达载体, 采用基因枪法对草菇菌丝体进行遗传转化。结果表明, 基因枪的最佳轰击参数为: 氦气压力1 100 Psi, 真空压力87.88 kPa, 靶距离6 cm, 轰击次数1次。Southern杂交结果显示, gus基因已整合进V1308基因组中。GUS组织化学检测结果证明, gus基因在V1308菌丝体中获得了表达。草菇出菇试验结果显示, 转基因草菇和对照都能正常形成子实体, 子实体组织分离长出的菌丝体经GUS组织化学检测, 证明了外源基因gus能够在转基因草菇的菌丝体中稳定表达。     

基因枪法遗传转化双孢蘑菇菌褶

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)2793为试材,采用基因枪法对其菌褶进行遗传转化,相对转化率为2.69％,转化子经PCR检测表明,外源潮霉素B抗性基因已经被转入到菌丝体中.     

蛹虫草、白化蛹虫草菌丝硒耐受性比较研究

目的:研究亚硒酸钠对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝生长影响。方法:CM-1518、白化蛹虫草CM-Y1518为试验蛹虫草菌株,研究亚硒酸钠(0～700 mg/L)对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝长势、菌丝平均长速及菌落形态影响。结果:蛹虫草菌丝硒耐受性高于白化蛹虫草,当培养基中亚硒酸钠质量浓度不超过650 mg/L时,蛹虫草均可生长,硒耐受极值为700 mg/L;当亚硒酸钠质量浓度不超过200 mg/L时,白化蛹虫草均可生长,硒耐受极值为250 mg/L。     

运用SSR分子标记分析蛹虫草遗传多样性

以蛹虫草全基因组为模板查找Simple Sequence Repeats(SSR)位点并设计筛选引物进行聚类分析。从100对SSR引物中选出30对多态性高、重复性好的SSR引物,共获得215条多态性条带。根据遗传相似系数(GS)采用不加权成对群算术平均法(UPGMA)进行遗传相似性聚类:材料间GS值的变化范围为0.527~0.995,以GS值为0.761水平可将46株蛹虫草分为6类;菌株亲缘关系与地域来源有一定相关性,且栽培菌株多为同一品种。     

人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸成分测试分析

通过对人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸的测试分析,结果表明：在野生蛹虫草中含有的１７种氨基酸,在人工培育蛹虫草中几乎都含有,并且在以蚕蛹为培养基质生长的蛹虫草中氨基酸总量及人体必需的八种氨基酸总量均高于野生型及其它人工培育型的蛹虫草。     

利用无菌柞蚕蛹培育蛹虫草的研究

研究对现有利用柞蚕蛹培育蛹虫草的技术进行了探讨及改进,通过单因素试验,比较了不同的前处理及接种方法。结果表明,通过高温高压法对柞蚕蛹灭菌,并以浸泡的方式进行接种,可以将蛹体完全僵化所需时间缩短至8 d,僵化率及发草率可提高至100%。利用正交试验设计进一步优化,结果表明,在栽培种的液体培养基中,按50%的比例添加柞蚕蛹浸提液,在115℃的温度下对柞蚕蛹进行高温高压灭菌,以将蛹体浸泡于栽培用菌液中10 s的方式来接种,为较优方案,所得柞蚕蛹虫草复合体中虫草素含量可达0.296%。主次因素排序为灭菌温度浸提液含量浸泡时间。研究成果的应用可以为优质蛹虫草的快速生产,开辟一条新途径。     

柞蚕蛹虫草高产栽培技术的研究

对人工栽培柞蚕蛹虫草高产条件进行研究,结果显示：采用孢子分离技术选育菌种保证了虫草高产;接种不同状态的菌种时,液体菌种效果好,硬化率高,从而产量也高;接种剂量在0．3-0．5mL时蛹体完全变僵蛹时间明显短,产量也高,接种剂量小于0．2mL时,僵蛹时间长,容易感染杂菌,头部基本坏掉,影响了产量;菌丝生长期25℃恒温培养,蛹体完全变硬时改20℃恒温培养,蛹体硬化快,子实体分布均匀,长势好,产量较高。     

柞蚕蛹虫草栽培试验研究

柞蚕蛹草栽培试验研究表明：将蛹虫草菌液直接注射柞蚕蛹体内有利于菌丝发育,污染少,蛹体僵化快;在进行菌丝培养时以“营养土”覆盖蛹体可加速菌丝生长,蛹体发菌均匀一致,蛹体僵化快;蛹体僵化后,用刀在蛹体的一端进行刻伤,蛹虫草出草快,出草一致,缩短生长周期,出草率离,草的质量好。     

基因枪法介导大白菜小孢子转基因技术研究初报

围绕基因枪微粒的制备、大白菜小孢子对基因枪轰击的耐受能力以及小孢子的胚胎发生能力开展研究,初步建立了以小孢子为外植体的遗传转化体系。高胚胎发生的大白菜材料‘CC-4’的小孢子在基因枪7.58×10~6 Pa爆破压力,9 cm的轰击距离下,利用直径0.6μm,亚精胺包裹的金粒子微弹以每次500μg的金粒子量连续轰击5次,小孢子活力不受影响,培养1 d后GUS基因瞬时表达检测,平均每皿可获得20个以上转化小孢子;小孢子培养15 d后成功获得胚状体,GUS基因瞬时表达检测,平均每皿最多获得4个遗传转化的胚状体,40个花蕾可获得20个以上转化胚状体。初步探讨基因枪法介导大白菜小孢子结果表明:大白菜小孢子数量庞大易收集,可耐受基因枪的多次轰击,并能继续保持胚胎发生的能力,作为新尝试的遗传转化受体,有可能是解决白菜类作物再生困难,提高转基因效率的有效手段。     

低糖虫草复合保健饮料的研制

以北冬虫夏草、山楂、枸杞为主要原料,用甜味剂甜菊糖苷调整甜度,研制出低糖虫草复合保健饮料,用苯酚-硫酸法对饮料中虫草多糖的含量进行测定,结合饮料的感官评定结果,确定该饮料的最佳配方。结果表明:该饮料的最佳配方为北冬虫夏草浸提液20%,山楂浸提液14%,枸杞子浸提液8%,甜菊糖苷0.15%,虫草多糖含量为1 350mg/L。该饮料色泽美观、口感宜人,具有保健功能,适合各类人群。     

RFLP在鳞翅目蛹虫草菌鉴别中的应用

本文应用RFLP技术鉴别两未知菌株S1001和S1002是否系鳞翅目蛹虫草菌(Cordyceps milicaris)。试验以ITSl,TTS4为引物,PCR扩增rDNA的5.8S+ITS区段,扩增产物纯化后用DNA限制性内切酶酶切,获得DNA的RFLP图谱,并同ATCC模式菌株的RFLP图谱相比较。结果表明:三个作为对照的ATC菌株具相同的RFLP图谱,而两待鉴定菌株之间存在差异,且明显不同于ATCC模式菌株,从而证明,两待鉴菌株与ATCC菌株之间在rDNA区域具有明显的结构差异,故推断两待鉴定菌株不隶属于鳞翅目蛹虫草菌。     

蛹虫草的富硒栽培技术初步研究

研究了不同浓度的亚硒酸钠对蛹虫草菌丝体、子实体发育和产量的影响.试验结果表明,培养基中添加亚硒酸钠时,能明显提高子实体中硒的含量,但对菌丝体和子实体的生长有一定的延迟与抑制作用.     

蛹虫草的人工培育历程

回顾了蛹虫草人工培育的研究历程,对虫草素的生物合成途进行总结。对影响蛹虫草子实体生长的一级控制及二级控制因素进行讨论,并针对虫草种植行业今后发展方向提出一些建议。     

蛹虫草产胞外多糖的液体优化培养条件研究

对蛹虫草进行发酵培养基配方正交设计试验 ,经统计学分析后得出的优化培养基配方如下 :玉米粉4% ,黄豆粉 0 6 % ,酵母汁 0 3% ,K2 HPO4 0 0 5 % ,Mg SO4 0 0 5 % ,接种量 3% ,pH5 5。此培养基组合在 2 5℃培养 1 4 4h的胞外多糖产量可达 1 83g/L。碳源因子对胞外多糖的产生影响显著     

高虫草素含量蛹虫草新品种‘海州1号’

 高虫草素含量蛹虫草新品种‘海州1号’ 分离自野生菌株。菌丝白色,浓密。子座橙黄色,圆柱形, 顶端尖细,少分枝,直径2 ~ 5 mm,长12 ~ 15 cm。菌丝生长适宜温度16 ~ 20 ℃,子座形成与发育适宜温度18 ~ 22 ℃,适宜光照强度500 lx。在适宜条件下菌丝满瓶时间5 ~ 6 d,原基形成时间12 d,生产周期45 ~ 50 d,虫草素含量平均24.98 mg ·g-1DW。