桃花芽休眠解除SSH文库构建及相关基因表达分析

 为了深入研究桃花芽休眠的分子机制,利用抑制差减杂交技术（SSH）,以解除休眠期的花芽的RNA为实验方Tester,以休眠期花芽的RNA为驱动方Driver,构建休眠解除cDNA文库,测定分析了180 个上调表达的cDNA 片段,测序成功128个,除去冗余序列,得到28个单一序列。对序列进行BLAST比对及功能注释,发现这些序列分别属于新陈代谢、氧化还原、信号转导、抗性相关等类别基因。运用qRT-PCR 技术对HisH3、Dhn 和Metallothionein基因进行检测,结果表明它们在花芽休眠解除过程中均上调表达。     

百合鳞茎解除休眠与花期调控的研究

探讨了亚洲百合杂种系(Asiatic hybrids)‘新中心(Nove Cento)’在12℃冷藏过程中冷处理时间长短与花芽分化、花期调控之间的关系。结果表明:从冷藏开始至60d,冷藏时间越长,鳞茎解除休眠所需时间越短,冷藏45d以上,可完全解除鳞茎休眠;百合的花芽分化从冷藏45d开始,栽植后30d基本完成;冷处理时间越长,百合植株开花越早,花茎越矮,而且还会出现二次抽薹开花的现象。     

低温对解除百合鳞茎休眠和促进开花的作用

对目前国内外利用低温处理打破百合鳞茎休眠和促进开花等方面的研究进行了综述。近年来在百合鲜切花周年生产中, 通过低温解除鳞茎休眠, 提高百合鲜切花品质, 调节百合花期等方面的研究均有较大进展, 但有关百合鳞茎的休眠机理和开花机理的研究仍然比较薄弱。在休眠机理方面, 各激素间的互作关系以及分子水平上的研究是今后的重点。     

东方百合鳞茎冷藏解除休眠的养分代谢和酶活性变化

 以自繁的东方百合鳞茎为材料, 研究在2℃、5℃和8℃条件下, 鳞片中淀粉、可溶性总糖、还原糖含量和几种酶活性的变化。在8周的冷藏期内, 淀粉含量持续明显下降, 可溶性糖和还原糖含量增加, CAT、POD、SOD酶的活性在冷藏第1周下降极显著, 而α - 淀粉酶活性在第3周出现峰值, 自冷藏第4周后4种代谢酶活性均处于低水平。本试验中, 不同低温处理间的差异不大, 冷藏第7周后可解除休眠。     

细叶百合鳞茎在低温解除休眠过程中茎尖细胞超微结构的变化

 研究了细叶百合鳞茎低温处理打破休眠过程中的形态变化及茎尖细胞超微结构的变化。结果表明,低温处理0 ~ 12 d,鳞茎物质和能量代谢较弱,鳞茎不能萌发;12 ~ 48 d,鳞茎萌发率较低,线粒体及高尔基体分泌囊泡增多,细胞通过质膜内吞及胞间连丝进行物质交流;48 ~ 72 d,核仁松散,内质网有序排列,在液泡膜与质膜边缘形成内质网桥,内质网桥一直延伸到核膜方向,胞内及胞间联系已经建立;出芽时,内质网桥延伸到胞间连丝,细胞器内部结构及数量增加,休眠完全打破。     

百百鳞茎解除休眠与花期调控的研究

探讨了亚洲百合杂种系（Asiatic hybrids）‘新中心（Nove Cento）’在12℃冷藏过程中冷处理时间长短与花芽分化、花期调控之间的关系.结果表明：从冷藏开始至60 d,冷藏时间越长,鳞茎解除休眠所需时间越短,冷藏45 d以上,可完全解除鳞茎休眠;百合的花芽分化从冷藏45 d开始,栽植后30d基本完成;冷处理时间越长,百合植株开花越早,花茎越矮,而且还会出现二次抽薹开花的现象.     

低温解除休眠过程百合鳞片的氨基酸含量变化

对百合鳞片各部位在不同贮藏温度下的游离氨基酸含量和组分进行了定量分析。结果表明:百合鳞片各部位的游离氨基酸含量总体呈先上升后下降的趋势,冷藏的第4周游离氨基酸含量发生显著变化。游离氨基酸含量以内部鳞片>中部鳞片>外部鳞片。各部位鳞片以精氨酸的含量最高、变化最大,其次是谷氨酸、苏氨酸等,精氨酸、谷氨酸等谷氨酸族在百合鳞茎休眠解除过程中起重要作用。     

野生细叶百合组织培养体系的建立

以细叶百合为试材,采用组织培养的方法,研究细叶百合不同部位、不同激素配比及不同发生途径对获得细叶百合再生植株的影响。结果表明:以鳞茎为外植体,通过器官发生途径获得再生植株,其最佳分化及增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;以花器官、幼嫩叶片为外植体通过体细胞发生途径获得再生植株,其愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D2.0mg/L+NAA 1.5mg/L,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L,最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L。     

不同授粉方式对青海细叶百合与亚洲百合杂交结实研究

用青海细叶百合(Lilium pumilum)和亚洲百合杂种系:精粹(Elite)、耀眼(dazzle)、波安娜(pollyanna)3个品种作母本,采用柱头直接授粉和切割花柱授粉两种不同的授粉方式授以不同品种的父本花粉进行杂交试验.通过对各组合间杂交结实进行调查分析,以蒴果坐果率、蒴果膨大程度和有胚率作为判断指标来研究不同杂交配组的亲和性.结果表明:切割花柱授粉并不能克服所有品种的自交障碍,只能在一定程度上促进具有一定亲和性的杂交组合结实,对蒴果坐果率、蒴果膨大程度和有胚率有一定的影响.     

激素处理对百合鳞茎打破休眠及促进开花的效应

用GA350mg/L CEPA100mg/L KT100mg/L组合处理冷藏的百合鳞茎，能缩短冷藏时间，打破休眠，促进开花；加入丙酮溶剂可以提高激素处理的效果。     

柑橘衰退病晚期抑制差减cDNA文库的构建及初步分析

为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理,利用经典的抑制差减杂交技术,以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的c DNA为测试方,以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的c DNA为驱动方进行差减杂交,构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减c DNA文库。随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序,获得了192条有效序列。将这些EST序列聚类拼接后,共获得77条非重复序列。对这些EST进行GO和KEGG分析,发现这些EST的功能主要与胁迫及防御、代谢、转录、转运、蛋白命运等途径相关。用实时定量RT-PCR验证了其中4个基因:几丁质酶基因、茉莉酸响应基因的转录抑制因子1基因(JAZ1)、钙调素结合蛋白基因、咖啡酸—氧甲基转移酶基因,结果表明在衰退病的诱导下,‘不知火’杂柑叶片中这4个基因的表达量均有明显提高,说明这些基因可能参与了‘不知火’杂柑叶片晚期衰退病应答。JAZ1基因的上调表达表明可能宿主衰退病晚期应答过程中的诱导系统抗性受到了抑制。     

百合抗镰刀菌资源鉴定及抗病相关基因筛选

 对20个百合种质资源的组培苗进行尖孢镰刀菌百合专化型（Fusarium oxysporum f. sp. lilii）室内接种鉴定;以筛选出有较好抗性的大花卷丹（Lilium leichtlinii var. maximowivzii Baker）为材料,以镰刀菌诱导12和24 h的作为处理组,无菌水处理作为对照组,采用SMART技术构建了百合经镰刀菌诱导后的抑制差减正、反向两个SSH文库。在正向文库中选择了4个抗病相关的ESTs,用半定量RT-PCR分析这些ESTs的表达情况。经接种鉴定,20个百合种质资源中,对百合镰刀菌表现高抗的有3个,中抗9个,感病8个;SSH文库ESTs片段大小为200 ~ 2 000 bp。依据斑点杂交结果,从正向SSH文库中挑取50个单克隆进行测序和比对分析,得到6种共10条抗病相关EST。通过半定量RT-PCR对其中的4条抗病相关ESTs：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（serine/threonine protein kinase,S/TPK）、谷胱甘肽S–转移酶（glutathione S-transferase,GST）、过氧化物酶（peroxidase,POD）和亲环素（cyclophilin,CYP）的表达情况进行了分析,证明它们在一定程度上都受百合镰刀菌诱导而表现上调表达,推测其可能参与了百合对镰刀菌枯萎病的抗病过程。