兔巴氏杆菌大肠杆菌油乳与中药灭活苗的研制及试用

以多杀性巴氏杆菌(C—481)、致病性大肠杆菌O8s、O119、O18等菌株制备的兔巴氏杆菌 大肠杆菌油乳与中药灭活菌苗。经实验室免疫试验和中间试验证明。该菌苗在免疫后第14天即可产生坚强的免疫力。经攻毒试验证明，该菌苗的保护率为93％。免疫期为9个月，免疫效果普通反应良好。该菌苗在4℃可保存18个月以上。室温阴暗处可保存10个月以上。临床证明该菌苗能有效地控制巴氏杆菌病与大肠杆菌病在兔群中的流行，可推广应用。     

兔巴氏杆菌-大肠杆菌油乳与中药灭活苗的研制

以多杀性巴氏杆菌(C-481)、致病性大肠杆菌O85、O119、O18等菌株制备的兔巴氏杆菌-大肠杆菌油乳与中药灭活菌苗，经实验室免疫试验和中间试验证明，该菌苗在免疫后第14天即可产生坚强的免疫力；经攻毒试验证明，该菌苗的保护率为93％，免疫期为9个月，免疫效果良好。该菌苗在4℃以下可保存18个月以上，室温阴暗处可保存10个月以上。临床使用证明，该菌苗能有效的控制巴氏杆菌病与大肠杆菌病在兔群中的流行，可在生产中推广应用。     

鸡大肠杆菌多价灭活油乳疫苗的研制

选择从河北省不同地区分离的6个优势血清型O78、O2、O111、O36、O35大肠杆菌菌株，经培养、混合、灭活后，用白油、吐温、司本－80按一定比例混合，制成鸡大肠杆菌多价油乳灭活疫苗。经安全性检验、稳定性检验、免疫力检验，结果表明，该苗安全有效，性能良好，接种后无不良反应，免疫肉鸡雏鸡后第7d可检测出抗体，在第56d抗体达到最高水平(7.3log2)，使鸡获得免疫保护，对大肠杆菌的感染率、发病率有明显下降，     

自家灭活苗预防蛋鸡大肠杆菌、巴氏杆菌混合感染

2005年6月，我县某蛋鸡养殖户因其鸡群出现异常死亡，剖检死鸡发现有多脏器病变而送检，主诉该批鸡28日龄，共有3000只，一周前发生球虫病，病情不是很严重而且已用氯苯胍等抗虫药物控制，两天前鸡群有少量鸡出现精神沉郁、不食、拉绿色稀粪、呼吸困难且口鼻有黄色带泡沫的黏液等症状，剖检发现病鸡腹腔内有白色膜状物，并伴有多脏器病变，禽主当即用环丙沙星拌料饲喂，但发病有加重趋势，故而送检。     

自家灭活苗预防蛋鸡大肠杆菌、巴氏杆菌混合感染

2005年6月，我县某蛋鸡养殖户因其鸡群出现异常死亡，剖检死鸡发现有多脏器病变而送检，主诉该批鸡28日龄，共有3000只，一周前发生球虫病，病情不是很严重而且已用氯苯胍等抗球虫药物控制，两天前鸡群有少量鸡出现精神沉郁、不食、拉绿色稀粪、呼吸困难且口鼻有黄色带泡沫的黏液等症状，剖检发现病鸡腹腔内有白色膜状物，并伴有多脏器病变，禽主当即用环丙沙星拌料饲喂，但发病有加重趋势，故而送检。     

鹅巴氏杆菌油乳剂灭活苗的研制应用

从病死鹅体内分离出多杀性巴氏杆菌,制成油乳剂灭活疫苗,效力试验一免后15~l20d,2次加强免疫在一免后180d都保持100%的保护率;临床应用于紧急接种,配合蒽诺沙星饮水,仔鹅成活率达88%,成年鹅成活率达96.1%。     

鹅巴氏杆菌油乳剂灭活苗的研制与应用

禽巴氏杆菌病(Avian pasteurellosis）是由多杀性岂氏杆菌(Pasteurella multoeida)引起的禽类一种接触性传染病。此病对鹅造成的危害较大,一年四季均可发生,主要经呼吸道感染,一般呈散发或地方性流行,发病率和死亡率都较高。病症以急性为主．不食,精神萎顿,拉稀,咽喉部有分泌物,喙和蹼发紫,1～2d内可发生死亡。     

蛋鸡大肠杆菌，巴氏杆菌自家灭活二联苗的应用

2005年6月．我县某蛋鸡养殖户因其鸡群出现异常死亡．剖检死鸡发现有多脏器病变而送检．主诉该批鸡28日龄，共有3000只，一周前发生球虫病，病情不是很严重而且已用氯苯胍等抗球虫病物控制，     

鸭源巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗的制备与免疫效果试验

本研究选取鸭致病性大肠埃希菌（E．coli）常见血清型O1、O2、O18、O78和3株分离自发病鸭场、毒力强、免疫原性好的巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P砌）D22、D23、D157作为制苗菌株,分别以鲜血琼脂和马丁琼脂进行固体表面培养制备的抗原与蜂胶佐剂高速乳化,制备鸭多杀性巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗。结果表明,疫苗安全可靠,雏鸭一免后第14天对同源E．coli、Pm攻击免疫保护率为100％和90％;雏鸭二次免疫后第14天的免疫保护率均为100％。用间接ELISA对免疫鸭进行抗体消长规律检测,7日龄商品麻鸭首免后20d抗体达到高峰,抗体维持时间在54d以上;首免7d后进行二免,可产生显著高于一免的抗体水平。疫苗免疫雏鸭能够显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）地增强T细胞的免疫力,可维持3周左右。疫苗在4℃可保存12个月以上。     

鹅感染多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌的分离鉴定

某地一鹅群发生一种以败血、高死亡率为特征的急性传染病其临床表现为沉郁、不食、下痢等病变特征以内脏器官充血、出血和坏死为主。本文从鹅体内分离到16株细菌经鉴定为多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌混合感染;并进行了毒力试验和药敏试验结果表明多杀性巴氏杆菌致病性较强大肠杆菌致病性稍弱两菌混合感染致病性最强。恩诺沙星、单诺沙星和头孢氨苄西林对两种菌均为高敏。其余药物为中敏或不敏感。     

牛多杀性巴氏杆菌znuA基因的原核表达及其免疫保护作用的研究

为研究牛多杀性巴氏杆菌(P.multocida)高亲和力锌吸收蛋白znuA的免疫学活性及其免疫保护作用,本研究利用PCR方法扩增了P.multocida znuA基因,构建表达载体pET-28a-znuA,将其转化E.coli BL21后经诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白约40 ku;以重组znuA蛋白免疫小鼠后用P.multocida菌株Y-1攻毒,结果显示重组znuA蛋白对免疫组小鼠保护率为60%,表明其具有免疫保护作用。本研究首次在原核系统中表达了P.multocida znuA蛋白,且验证了其免疫保护力,为深入探究znuA基因在P.multocida致病过程中的作用及其亚单位疫苗的开发奠定了基础。     

复方中草药"毒菌杀"对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌试验

观察了复方中草药“毒菌杀”的安全性及其对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌情况。结果发现“毒菌杀”安全性高，组成“毒菌杀”的各单味中药及其合剂对大肠杆菌的最低抑菌浓度MIC(g/mL)分别为板蓝根0．05、穿心莲0．05、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．05、生地0．05、甘草0．05、当归0．025，“毒菌杀”方剂为0．05；对沙门氏菌的MIC分别为板蓝根0．05、穿心莲0．025、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．025、生地0．05、甘草0．025、当归0．05，“毒菌杀”方剂为0．025；而牛胆汁对这两种致病菌的最低抑菌浓度分别为2％和1％。说明“毒菌杀”方剂对大肠杆菌、沙门氏菌具有明显的抑制作用。     

犊牛腹泻大肠杆菌疫苗的研制与应用

根据南京地区犊牛大肠杆菌腹泻流行病学调查结果,用分离鉴定的犊牛腹泻菌株O78、O26、O15大肠杆菌作菌种,制备油乳灭活疫苗,接种初生犊牛预防犊牛大肠杆菌腹泻。结果表明制备的大肠杆菌油乳灭活疫苗接种初生犊牛能产生良好的免疫保护。     

我国华东地区大肠杆菌、沙门氏菌分离和血清学鉴定

作为我国兽医临床耐药性监测计划的一个起步,对目前畜禽耐药菌株流行情况调查分析.2001年在华东地区选择了5个鸡场和1个孵化厂,进行3次追踪采样和抗菌药使用情况调查,共得到样品254份(泄殖腔拭子165份,饲料、水、尘土57份、饲养员粪便32份).分离到大肠杆菌80株,其中泄殖腔拭子有72株,分离率为43.6%;饲料、水和尘土有4份,分离率为7.0%,饲养员粪便有4株,分离率为12.5%.大肠杆菌0抗原血清型有35种,优势型不明显,O15型最多有8株,占10%.多为每个血清型有1～2株.共分离到沙门氏菌2株,血清型均为O9.所有鸡场采样前均使用过抗菌药.这次调查初步了解该地区抗菌药使用情况及两种细菌在该地区的存在状况和血清型分布,为下一步耐药性检测打下基础.     

禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因的克隆及表达

提取禽源多杀性巴氏杆菌C48—1的染色体,用“鸟枪法”将酶解染色体DNA片段重组到pBR322质粒载体的Pst I酶切点上,再转化到大肠杆菌RRI中.经耐药表型筛选,在约5000个转化菌中,找出了887个具有重组质粒的细菌株,其一般细菌学性质与大肠杆菌RRI相同,构成了禽多杀性巴氏杆菌C48—1染色体DNA的不完全基因文库.分离提纯保护性荚膜抗原,制备抗血清,用~(125)I SPA固相放射免疫技术,从文库中选出13株阳性表达菌株,与用ELISA法复试结果吻合,其中10号和696号菌株表达较强.对10号和696号菌进行了动物试验,结果1次免疫小鼠分别获3/7、2/7的保护,2次免疫分别获6/11和5/11的保护,与之对照的阴性转化菌(119号)以及大肠杆菌(RRI)则无保护力(0/7、0/10).用快速细菌破碎法对13个阳性菌株进行了检测,其外源基因片段在0.5～5.4kb之间.对10号阳性菌免疫电镜观察,在细胞膜及细胞浆内均可见到高电子密度区,显示出外源基因表达的位置和程度.10号菌的重组质粒命名为PPM10,分子量约为5.16kb,用Pst I酶切PPM10,得到约4.3kb和0.86kb的两个片段,因此插入片段约0.86kb.进一步用内切酶分析,证明该插入片段上无Bam HI、Eco RI、Hind III和另外的Pst I酶切点.     

大肠杆菌灭活苗的免疫试验

用甘肃省大肠杆菌的代表血清型和筛选的大肠杆菌菌株原生质体融合菌株及大肠杆菌菌株与沙门氏菌菌株原生质体融合菌株研制的大肠杆菌菌苗进行大肠杆菌灭活苗免疫学试验,试验结果表明菌苗免疫性能好,菌苗的免疫高峰期在30 d左右,凝集抗体滴度在28左右,对动物的保护期在4个月以上,而且稳定性能和安全性能均良好,是一种效果较好的菌苗。     

禽源大肠杆菌和沙门氏菌耐药性研究

本试验主要对山东、河南及安徽共5个养禽场分离的大肠杆菌和沙门氏菌进行耐药性研究．研究结果表明：所有分离菌株对大多数抗菌药物的耐药率都非常高,并且多重耐药情况严重．大肠杆菌和沙门氏菌对磺胺类药的耐药性几乎达到100％,对氨苄西林、四环素、氟喹诺酮类的耐药性也非常严重。