小鼠胚胎直接投入液氮冷冻保存试验

室温下,将292枚小鼠胚胎在含128.9g/L甘油PBSS(含20％犊牛血清的磷酸盐缓冲液)和含193.2g/L甘油+85.6g/L蔗糖PBSS内分别孵育片刻,装管后直接投入液氮冷冻保存。冻胚快速解冻后,用含342.3g/L蔗糖PBSS脱去甘油,用PBSS清洗后镜下观察评定,胚胎回收率为86.9％(254/292),胚胎形态正常率为77.1％(196/254)。其中部分桑椹胚经体外培养,囊胚发育率为71.4％(20/28)。将110枚冻胚移植给7只受体,3只妊娠,产仔12只(5,7),妊娠率为43％(3/7),产仔率为10.9％(12/110),其中囊胚移植1只受体妊娠产仔3只,产仔率为25％(3/12)。     

奶牛胚胎一步冷冻保存的研究

用ＦＳＨ－ＰＧＦ＿（２α）超排黑白花奶牛２２头，以非手术方法采得７～８日龄胚胎６８枚，其中４５枚胚胎用于一步冷冻试验。水浴解冻后共回收４０枚胚胎。用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖一步除去保护剂，胚胎形态完好率为９０％（３６／４０）；荧光染色阳性率为８７．５％（７／８）；体外培养发育率为７５％（６／８）；冻胚移植受体妊娠率为４３．５％（１０／２３）。     

牛胚胎直接投入液氮快速冷冻技术的研究

取超排获得的优质桑葚期和早囊期，胚胎４３枚，经过玻璃化液处理，液氮中保存５－９８天后进行解冻，有２４枚完好，其中７枚胚胎经ＣＯ２培养箱中培养２４小时，有４枚继续发育（５７％）。移植奶牛４头（单胚），１头受胎产犊；移植黄牛６头（双胚），１头受产犊；另１头早期流产。     

奶牛胚胎冷冻保存技术的研究

<正> 自从Whittngham发现经超低温冷冻保存的小鼠胚胎可以成活后,超低温冷冻保存哺乳动物胚胎的方法取得很大进展。目前许多国家都在对不同的胚胎冷冻保护技术进行探讨,如加入冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻程序的选择、脱除保护剂的方法等,试图寻找一个胚胎冷冻和解冻的最佳方案。我们从87年开始从事这方面的研究,其目的是探索胚胎冷冻的方法和步骤、寻找适宜于基层生产单位应用的解冻和脱除冷冻保护剂的简易方法。为今后胚胎移植的推广应用打下基础。     

自制简易胚胎冷冻器冷冻奶牛胚胎试验

用FSH+PGF_(2)超排黑白花奶牛,以非手术方法采得7日龄早期胚胎。应用含10％甘油卵细胞培养液作为胚胎冷冻保护液,采用自制简易胚胎冷冻器冷冻,在-196℃液氮中保存。冻胚在35℃水浴中解冻,应用92.1g/L甘油+171.2g/L蔗糖PBSS,46g/L甘油+171.2g/L蔗糖PBSS和171.2g/L蔗糖PBSS三步脱去甘油,用含20％犊牛血清PBS将胚胎清洗2遍后装管移植。共解冻18枝冻胚,16枚可用。可用胚率为84.2％(16/18)。采用非手术方法移植16头受体牛,5头妊娠产犊,移植妊娠率为31.5％(5/16)。     

西德高产奶牛胚胎引进移植试验

解冻西德高产奶牛冻胚16枚,其中可用胚13枚,3枚为部分变性胚。将其分别移植给16头受体牛,3头妊娠产犊,二母一公,犊牛健康活泼,毛皮细薄光亮。     

旋毛虫液氮冷冻保存试验

本试验系采集人工感染旋毛虫小白鼠的肌肉,经消化后,用PBS离心清洗三次,取沉淀用10％甘油的PBS制成虫体悬液,细管分装,在液氮罐口以1℃/分的速度降温至—36℃,然后投入液氮(-196℃)低温保存,解冻后约80％的虫体存活,效果良好。     

小鼠胚胎冷冻保存试验

应用4～10周令的杂种 CB6/Han 和纯种 C57BL/Han 小鼠73只进行试验,共采胚胎523枚,将发育正常,形态完好的157枚胚胎低温冷冻保存。解冻后回收率为83.4％,其中45％(59枚)形态完好,(囊胚56％,桑椹胚20％)。将其培养24—48小时后,71.2％(42枚)继续发育到扩张囊胚(其中囊胚为76.5％,桑椹胚为37.5％)。应用3′6′—二乙酰基荧光素(FDA)染色进行胚胎质量评定,对胚胎无损害。     

奶牛冷冻胚胎规模化移植效果研究

为了提高奶牛良种化程度,对奶牛冷冻胚胎的规模化移植效果进行了研究。结果表明:PG二次肌注法的发情率显著高于(P<0.05)PG一次肌注法,两种方法的发情同期率均超过85%,受体牛发情时间多集中在肌注PG后48～72h;胚胎解冻后的复苏率达到82.58%,且早期囊胚与囊胚的复苏率要高于桑椹胚(P>0.05);共移植受体牛218头,受胎97头,受胎率为44.5%,且春、秋季的移植效果差异不显著(P>0.05)。为奶牛冻胚的规模化移植研究提供了参考依据。     

奶牛体外生产胚胎玻璃化冷冻技术研究

利用乙二醇(EG)及二甲基亚砜(DMSO)作为主要冷冻保护剂,对牛体外生产囊胚进行了冷冻保存试验,探讨了不同冷冻剂组合、平衡时间、蔗糖浓度、冷冻方法对牛胚玻璃化冷冻的影响,结果显示:牛胚置于30%DMSO、15%DMSO 15%EG和30%EG等3种不同冷冻保护剂,其解冻后发育率分别为75.3%、81.8%及71.4%(P＞0.05),差异不显著;含有10%EG与10%DMSO冷冻保护剂平衡30 s、45 s及60 s,其解冻后发育率分别为54.5%、75%和44.4%,45 s显著较30 s及60 s者高(P＜0.05);以15%DMSO 15%EG冷冻保护剂中添加0.25、0.5及1.0 M的蔗糖浓度,其解冻后牛胚后续发育率分别为50%、75.0%及33.3%,蔗糖添加浓度为0.5 M者效果显著较佳(P＜0.05);利用GMP、MDS及Cryoloop3种不同冷冻方式进行冷冻,其解冻后发育率分别为66.7%、71.1%及80.0%,三者间并无显著差异(P＞0.05).     

库车小白杏的组织培养及玻璃化法超低温保存试验初探

[目的]采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存.超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定.[方法]以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择.[结果]选择MS +0.5NAA +0.2 6 -BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择MS +0.1 NAA +0.1 6- BA +0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根.[结论]用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度- 30℃、玻璃化液保护剂脱水60 min、40℃水浴5 min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高.     

液氮超低温保存对小麦种子发芽力与活力的影响

[目的]研究液氮超低温保存对小麦种子发芽力与活力的影响,为小麦种质资源超低温贮藏提供理论依据。[方法]选用收获后自然干燥的郑麦9023、皖麦48、扬麦158和安农1032（糯小麦）4个小麦品种种子,分别密封于塑料冷冻管中,放入液氮罐中保存7 d,取出后常温解冻24 h,采用幼苗生长测定、冷浸试验、电导率测定和模拟田间出苗率测定等方法,测定种子的各项活力指标。[结果]起始发芽率为87.7%~97.3%的小麦种子,液氮保存7 d后,其幼苗生长测定发芽率为82.0%~94.0%,冷浸试验发芽率为79.3%~98.0%,模拟田间出苗率为43.7%~58.0%。[结论]初步认为小麦种子可以进行液氮超低温保存。     

蛹虫草菌丝液体培养基中适宜碳源和氮源的研究

以蛹虫草斜面固体菌种为试验材料,研究了5种碳源（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖和可溶性淀粉）和4种氮源（蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏和柠檬酸氢二铵）对蛹虫草菌丝产量的影响,以确定培养基的最佳碳源和氮源种类;同时分别研究了不同浓度的最佳碳源和氮源对蛹虫草菌丝产量的影响。结果表明：最适宜碳源为可溶性淀粉,适宜浓度为20 g/L;最佳氮源为酵母膏,适宜浓度为5 g/L。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

为了建立适于树莓茎尖的超低温保存技术程序,试验以树莓茎尖为试材,对树莓玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明适于树莓的超低温保存技术流程是先低温驯化21d,在含0.8mol/L蔗糖的固体培养基预培养4d,再经玻璃化液(PVS2)处理120min后浸入液氮,解冻后茎尖存活率达75%。     

灵芝液体发酵及产多糖的初步研究

液体发酵培养具有周期短、工艺简单、成本低、产量大、适于工厂化生产等优点，大大提高了灵芝多糖的生产能力，对开发灵芝保健食品和药品有重要意义。     

现场分割奶牛胚胎产生同胚双犊的研究

采用简易徒手胚胎分割法,一分为二分割奶牛胚胎。应用非手术方法,每头受体移植成对二分胚。移植4头受体,2头妊娠,其中1头产公犊1头,1头产母犊2头。该母犊为同胚双犊,健康,发育正常。     

马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

为构建马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存体系,以6个马铃薯品种为试验材料,研究了预培养时间、茎尖大小、玻璃化液、玻璃化液处理时间及恢复培养基对马铃薯存活率和再生率的影响。结果表明:茎尖大小为1mm左右时,预培养24h后,于PVS2玻璃化液中浸泡30 min,而后转入MS+0.5 mg·L-1 Zeatin+0.10mg·L-1 NAA+1.0mg·L-1 GA3培养基中培养,其成活率和再生率最高。     

羊栖菜对氮、磷的吸收速率研究

在实验室条件下,研究了羊栖菜对不同浓度N、P及其不同形态的N的吸收速率.结果表明:不同N、P浓度下,羊栖菜吸收N、P的速率存在显著差异(P＜0.05),羊栖菜对N、P的吸收速率随各处理组N、P浓度的升高而增加,并在N、P分别为50/μmol/L和5μmol/L时达到饱和吸收速率,其分别为1.369/μmol/(g·h)...