猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与初步鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与初步鉴定杨汉春管山红＊尹晓敏＊甘孟侯（中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４）猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）是猪的一种新病毒性传染病，首先在北美洲和欧洲发现，曾有“蓝耳病”、“神秘病”等之称［１，２］。该病现已遍布...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株的分离与鉴定

从河南省某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该病毒能在 Marc-145细胞上增殖并产生特征性的细胞病变 (CPE),在 Vero、PK-15细胞上不出现CPE.该病毒能被猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清特异性地中和,用 PCR反应能扩增出 720 bp的特异性片段.分离病毒回归 30日龄仔猪可出现高热和呼吸道症状.初步鉴定该分离株为猪繁殖与呼吸综合征病毒.     

天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒株的分离与鉴定

从天津地区发病猪分离到一株病毒SJ，对其进行了较系统的鉴定，并与PRRSV美国分离株P进行了比较。分离株在Marc-145上连续传4代后，开始出现规律性的病变，在vero，BHK21细胞上不出现CPE。电镜下可见典型的PRRS病毒粒子。特异性的免疫荧光试验和病毒中和试验表明分离毒为PRRSV。分离回归30日龄仔猪可出现高热和呼吸道症状。     

上海地区猪繁殖—呼吸综合征血清学检测及病毒分离与鉴定

猪繁殖一呼吸综合征（PRRS）是一种新的病毒性传染病,可引起母猪繁殖障碍、仔猪死亡、有成猪呼吸困难和生长滞缓,从而对养猪业造成严重的经济损失。1987年美国首次发现本病后在2年内席卷了美国19个州和加拿大2个省,1990年西德首次发现这种疾病,并很快传入荷兰、比利时等欧洲国家,以后传入亚洲,日本、菲律宾、韩国等均有报道。PRRS已成为90年代威胁全球养猪业的新的传染病。1996年自郭宝清（哈尔滨）报道我国东北、华北、华中、华南等10个猪场的猪群中存在PRRS后,关于该病的研究成为业内人士十分关注的热点。近年来,在上海地区…     

猪繁殖-呼吸综合征病毒上海株的分离鉴定

从上海地区５个发病猪场的病料中,分离到３株致Ｍａｒｃ－１４５细胞病变的病毒：ＳＨ１、ＳＨ２和ＳＨ３,理化特性研究表明,３株分离毒均对氯仿、乙醚、甲醛、热（５６℃）、酸（ｐＨ６以下）、碱（ｐＨ８以上）敏感。负染可见病毒以大小不等的具囊膜的球形粒子为主,囊膜上有纤突,直径为６０￣１００ｎｍ;超薄切片可见病毒粒子分散在细胞浆内,直径为４５￣８０ｎｍ。间接免疫荧光试验表明,３株分离毒均与ＰＲＲＳＶ高免血清呈强阳性反应,而与ＨＣＶ、ＰＰＶ、ＰＲＶ、ＴＧＥＶ高免血清的反应均呈阴性。综上可见,所分离的病毒为ＰＲＲＳＶ。     

猪繁殖与呼吸综合症

猪繁殖与呼吸综合症张素巧（河北省石家庄市动物检疫站０５００００）猪繁殖和呼吸综合症（ＰＲＲＳ）是近年来新发现的一种病毒性传染病。该病于１９８７年首次在美国发现,由于当时未能确定其病因,故称之为“神秘”猪病。此后,在德国、荷兰、法国、英国、西班牙、比利...     

猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒蛋白结构与功能

猪繁殖与呼吸障碍综合症是目前严重危害养猪业的一种传染病。近年来国内外对其进行了广泛深入的研究，本文综述了其病原及其基因的分子结构特点。     

猪繁殖和呼吸系统综合征的血清学检测及病毒的分离和鉴定（初报）

用间接免疫荧光抗体试验检测２７９头从加拿大进口种猪血甭中的猪繁殖和呼吸系统综合征病毒抗体，结果有３头为美液株阳性，隔离期间，有４５头发病其中１３头死亡，症状都相似，符合ＰＲＲＳ的特征，从病死猪Ｅ８８．８的肺组织中分离到１株能ａｒｃ１４ｔＨＳ２Ｈ产生细胞病变的病毒。将该分离物搠种Ｍａｒ１４５和ＨＳ２Ｈ细胞，４８小时后用乙醇固定，分别以美洲株和欧洲株的标准阳性血清作ＩＦＡ试验，可见到特异性的胞浆荧光。     

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定

为了对从湖南某发病猪场送检的血清中分离到的1株蓝耳病病毒进行鉴定,试验通过接种Marc-145细胞传代后产生明显而稳定的细胞病变,又经过RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)检测成功验证;通过对分离株的ORF5基因的测序结果表明,ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株LV株及北美经典毒株VR-2332、国内经典美洲株CH-1a的相似性分别为64.5%、87.4%、93.0%,说明其属于美洲型;而将NSP2高变区的测序结果与JXA1等高致病性变异株的Nsp2比较后发现,都在同一位置不连续缺失30个氨基酸。说明成功分离到1株北美型变异株,最终将其命名为PRRSV CZ-HN株。     

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的致病性分析

为追踪猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）分离株的变异特点,本研究于2016年从河北和福建疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）发病猪场采集病料,接种Marc-145细胞,产生合胞体样细胞病变,RT-PCR和间接免疫荧光试验鉴定为HP-PRRSV,将其分别命名为PRRSV CZ16A和NP16A。为研究PRRSV分离株CZ16A和NP16A对猪的致病性,将分离毒株经噬斑纯化后分别接种PRRSV抗原、抗体双阴性的60日龄健康仔猪,通过临床观察、解剖病理变化及病毒血症检测等指标初步探讨两株PRRSV的致病性。结果表明,分离株CZ16A和NP16A感染猪后均能够在动物体内复制,并引起体温升高,但两株PRRSV分离株均未引起试验动物的发病和死亡,剖检结果显示NP16A分离株能引起动物肺部实变、淋巴结肿大,其毒力比CZ16A分离株稍强。     

Pathogenic Analysis of Two Strains of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

Samples of sick pigs suspected of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) infection were collected from Hebei and Fujian provinces in China in 2016. Studies were carried out to investigate the variation characteristics of the isolated virus strains.The virus isolates were propagated in Marc-145 cells and caused syncytial cytopathic effect. RT-PCR and indirect fluorescent assay (IFA) results showed that the isolates were HP-PRRSV and hence designated as PRRSV CZ16A and NP16A, respectively. In order to study the pathogenicity of CZ16A and NP16A, the isolated strains were purified by plaque-isolation, and then inoculated to 60-days-old healthy pigs, which were negative in both of PRRSV infection and antibody. Clinical observation, histopathological changes and viremia detection were carried out to evaluate the pathogenicity of these two strains of PRRSV. Results showed that both isolates could replicate in pigs and cause a high body temperature, but these two strains of PRRSV isolates could not cause morbidity or mortality in experimental animals.Autopsy results also showed that NP16A could cause consolidation of the lung, lymph node enlargement in tested animals, suggesting that its virulence was a little stronger than CZ16A.     

两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析

从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

从辽宁某猪场采取病料,经处理后接种Marc-145细胞进行PRRSV分离,结果有2份病料在该细胞上盲传后可见典型的CPE,经测定其毒价为10^-6.5TCID₅₀/mL。间接免疫荧光试验可见黄色荧光,用电镜对纯化的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,直径约为50~70 nm。该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化和热敏感。对有CPE的细胞培养物进行RT-PCR,结果为阳性。接种试验动物出现典型的PRRS临床症状和死亡。结果表明,成功分离到一株PRRSV。     

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离、鉴定及遗传进化分析

Two strains of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses (PRRSV) were isolated from serum of some pig farms in Guangdong province and showed PRRSV positive in RT-PCR testing. The two viruses could passage stably and cause typical cenotaphic effect, they were named as LZ-GD and LB-GD. The analysis of variable region sequences of ORF5 and Nsp2 of the two viruses showed that LZ-GD and LB-GD strains were far to Europe strain Lelystad, the homology of nuclear nucleotide sequence were 63.5% and 63.8%, respectively, with classic American strain VR-2332 were 88.7% and 89.1%, respectively, and that with highly pathogenic JXA-1 strain were 99.2% and 99.3%, respectively. There were 30 amino acids deletion in Nsp2. It shared the deletion with JXA-1, HUN4 and other pathogenic variant. Thus, the two strains of PRRSV belonged to highly pathogenic American type.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株FS的分离鉴定与全基因组序列分析

从一例疑似高致病性猪繁殖与呼吸综合征病例中分离到一株病毒,经全基因组测序分析可知此毒株在Nsp2部位发生了30个氨基酸的缺失,GP5蛋白相对保守。本毒株与VR-2332同源性达到88.7%,与欧洲型代表株LV株的核苷酸同源性为58.5％,与国内报道的JN-HS毒株相似性最大,核苷酸同源性达到98.8%。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机制及防制研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属动脉炎病毒科,动脉炎病毒属,感染猪可引起猪繁殖与呼吸障碍综合征,是一种严重危害养猪业的病毒.本文综述了近年来PRRSV与宿主细胞间关系及其致病机制方面的研究进展,并对预防猪繁殖与呼吸综合征的几种疫苗的研制及特点进行了比较分析,为今后猪繁殖与呼吸综合征的控制提供参考.     

家蝇体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步分离与鉴定

为调查养猪场环境中家蝇携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)情况,2010年采集贵州某猪场家蝇样本,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,接种Marc-145细胞分离培养病毒,对分离获得的家蝇样本的PRRSV Nsp2基因进行克隆和序列分析。针对PRRSV N基因家蝇样本扩增出377 bp的特异性片段,阳性家蝇样本接种的Marc-145细胞出现明显CPE现象,针对PRRSV Nsp2基因细胞培养物扩增出1064 bp的特异性片段,测序结果显示,家蝇样本的细胞培养物的PRRSV Nsp2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.1%~98.5%。从而初步推断家蝇也可能成为PRRSV携带者。     

两株高致病性PRRSV河北分离株NSP2和ORF5基因的克隆及遗传变异分析

从河北省保定某两个猪场疑似高致病性猪繁殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒,经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型PRRSV,分别命名为BD1和BD2株。并将其克隆、测序,与国内外PRRSV分离株的Nsp2和E基因序列进行了比较。结果表明,与PRRSV高致病性毒株JXA1、GD、WUH1、SY0608、HUN0701的核苷酸序列同源性为95.3%~96.5%,BD1和BD2株ORF5基因存在部分突变,没有缺失,与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HUB1、Jiangxi-3、Henan-1、WUH1的同源性高达97.2%~99.3%。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及流行病学调查

应用RT-PCR技术,对广西南宁、玉林、来宾、贵港、柳州、钦州、防城港、崇左、贺州、桂林、广东、海南部分地区等十几个地区发生疑似PRRSV感染的28个猪场送检的264份病死猪的肺脏、脾脏、淋巴结等病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的检测;共检测出94份阳性病料,阳性率为35.6%;同时利用PRRSV间接ELISA检测试剂盒检测了2005～2007年期间48个猪场875份血清样品,检测结果显示：有39个猪场感染了PRRSV,感染率为81.3%,有338份血清存在PRRSV阳性抗体,阳性率为38.6%。对阳性病料处理后接种Marc-145细胞,出现明显细胞病变（CPE）,继续扩大培养,收获并分离病毒,-70 ℃保存备用。流行病学调查结果表明,广西及周边地区普遍存在PRRSV的感染,且感染率较高,猪繁殖与呼吸综合征已经成为危害本地区养猪业的重要疫病。