香水百合总黄酮提取液体外抑菌活性研究

建立了香水百合(Lilium casa blanca)中总黄酮提取液体外抑菌活性的测定方法。以70%乙醇水溶液提取香水百合中的总黄酮,以芦丁为标准品,利用分光光度法测定其总黄酮含量。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌为供试菌,采用滤纸片法和最低抑菌浓度法(MIC)测定了提取液的体外抑菌活性。结果表明,香水百合中总黄酮含量为137 mg/g(13.7%);总黄酮提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13.25 mm,对大肠埃希氏菌的抑菌圈平均直径为9.75 mm;最低抑菌浓度分别为0.587 5 mg/m L(金黄色葡萄球菌)和2.350 0 mg/m L(大肠埃希氏菌)。香水百合总黄酮提取液具有一定的抑菌活性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比大肠埃希氏菌好。     

银杏叶提取物体外抑菌作用研究

目的研究银杏叶提取物（Extract of Ginkgo biloba Leaves,EGb）对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌作用．方法通过测定抑菌环直径和最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）检测EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体外抑菌效果．结果EGb对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径为16．5mm,MIC值为12．5mg／mL;EGb对大肠埃希菌的抑菌环直径为14．5mm,MIC值为25mg／mL．结论EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌都有抑菌作用,EGb作为天然抗菌剂与防腐剂具有广阔的开发利用前景．     

HPLC结合响应面法优化柳叶蜡梅总黄酮提取工艺及其抑菌活性研究

采用高效液相色谱法测定柳叶蜡梅中黄酮类成分芦丁、槲皮素、山奈酚的含量,在单因素考察基础上,采用响应面法研究乙醇浓度、提取时间、提取温度对柳叶蜡梅黄酮类成分得率的影响,并采用滤纸片法对优化提取的柳叶蜡梅黄酮成分进行抑菌效果研究。结果表明,影响黄酮含量的因素为乙醇浓度>提取时间>提取温度;最佳提取工艺为提取温度90 ℃,料液比1:15,乙醇浓度79.0%,提取时间1.7 h;柳叶蜡梅中黄酮类成分为芦丁0.861 mg·g^-1,槲皮素0.504 mg·g^-1,山奈酚0.492 mg·g^-1,总提取量为1.857 mg·g^-1,与预测值的偏差为1.50%。优化提取的总黄酮对多种病原菌有抑制作用,对蜡样芽孢杆菌和大肠埃希菌有较强的抑制作用,抑菌圈直径分别为13.21、11.18 mm。可见,响应面优化柳叶蜡梅总黄酮提取工艺方法可行,提取的总黄酮具较好的抑菌效果,具有良好的开发前景。     

构树叶提取物抑菌作用研究

[目的]探索构树叶不同提取部位的抑菌作用,为深入开发构树叶资源奠定基础。[方法]采用抑菌环试验和营养肉汤稀释法对构树叶抑菌效果进行了试验观察。[结果]构树叶乙酸乙酯部位和正丁醇部位对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌环直径都大于15mm,乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的最低抑菌浓度（MIC）都是为25.0 mg/ml,正丁醇部位对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为12.6、6.3 mg/ml。[结论]构树叶的乙酸乙酯部位和正丁醇部位有明显的抑菌作用。     

淫羊藿内生真菌的分离及抑菌活性研究

从淫羊藿根、茎、叶分离出23株内生真菌,对分离出的真菌利用琼脂块法进行初选与滤纸片法进行复选,并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)4种微生物为指示菌对分离到的内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,分离得到的内生真菌中有10株菌株具较好的抑菌活性。对大肠埃希菌抑菌效果最好的为标号K7的菌株,抑菌圈直径为18.0 mm;对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的均为标号B3的菌株,其抑菌圈直径分别为18.0、15.0 mm;而对灰霉病菌抑菌效果最好的为标号K6的菌株,其抑菌圈直径达到12.0 mm。     

不同规格黄芪多糖体外抑菌作用研究

用打孔法研究不同规格的黄芪多糖对标准型大肠埃希氏杆菌、临床型大肠杆菌、标准型金黄色葡萄球菌和临床型链球菌的体外抑菌作用,结果表明,自提黄芪多糖对临床型大肠杆菌的抑菌圈直径达12 mm±0.09 mm,对其他菌的抑菌圈均在7 mm左右;市售黄芪多糖对几种菌的抑菌圈直径均在10 mm以下或者无抑菌效果.     

浙江金线莲组织培养体系的建立

通过对类原球茎诱导、增殖、分化和生根条件的探索,建立了浙江金线莲(ZJJ)的快速繁殖体系。结果表明:在液体培养基中,类原球茎诱导的最佳条件为TDZ 0.6 mg·L^-1+NAA 0.4 mg·L^-1,诱导率为62.5%;在固体培养基中,类原球茎诱导的最佳条件为TDZ 0.6 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1+6-BA 2.0 mg·L^-1,诱导率为59.3%;类原球茎增殖的最佳条件为稀效唑1.5 mg·L^-1+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1,增殖系数为8.4,其中稀效唑是类原球茎增殖的主要因子;类原球茎分化的最佳条件为6-BA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1,分化率为87.3%;植株生根诱导的最佳培养条件为1/2 MS+NAA 1.0 mg·L^-1+IBA 1.0 mg·L^-1,生根率达100%。     

甜樱桃砧木吉塞拉6号组织培养体系优化

以吉塞拉6号为试验材料,进行组织培养体系优化。结果表明:以75%乙醇灭菌30 s,0.1% HgCl₂灭菌10 min效果较优,MS+0.2 mg·L^-1 IBA+0.5 mg·L^-1 6-BA+30 g·L^-1蔗糖为初代培养基,MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+30 g·L^-1蔗糖为最佳增殖培养基,1/2 MS+0.3 mg·L^-1 IBA+0.3 mg·L^-1 NAA+30 g·L^-1蔗糖为最佳生根培养基。其中,活性炭含量是影响生根的关键因素。以椰糠和草炭为介质,能增强根系韧性,提高移栽成活率。     

粳恢35成熟胚的再生体系

以粳恢35成熟胚为外植体,研究粳恢35成熟胚在不同培养基中的诱导和分化,建立最佳的粳恢35再生体系培养方法。结果表明,不同培养基的诱导率和分化率不同;愈伤组织在NMBD2培养基增殖效果较好;分化培养基是加入6-BA 2 mg·L^-1、NAA 1 mg·L^-1、脯氨酸 500 mg·L^-1、谷氨酰胺500 mg·L^-1和 水解酪蛋白 300 mg·L^-1 的NMB培养基,分化效果最佳。并且无菌干燥处理 1 d 更利于愈伤组织的分化。     

一叶萩组培快繁技术

采用不用浓度激素配比对一叶萩组培快繁进行研究果表明,一叶萩最适外植体为茎段,接种成活率为96%,最佳初代培养基为6-BA 0.50 mg·L^-1+IBA 0.20 mg·L^-1;最佳增殖培养基为6-BA 0.50 mg·L^-1+IAA 0.20 mg·L^-1+GA₃0.10 mg·L^-1,增殖系数达8.7;生根率最高的培养基为1/2MS+NAA 0.10 mg·L^-1,培养30 d左右,生根率达88%,平均根长1.7 cm;最佳移栽基质是蛭石,成活率达90%。     

香樟叶叶绿素的提取及对液态食品中金黄色葡萄球菌的抑制作用

以香樟叶叶绿素提取量为指标,采用超声波辅助有机溶剂法研究永州香樟叶叶绿素的提取工艺,并初步探索提取的香樟叶叶绿素对液态食品中金黄色葡萄球菌的抑制作用。结果表明,香樟叶叶绿素的最适提取工艺为丙酮-乙醇(2:1,体积比)为溶剂,料液比1:20 g·mL^-1,超声时间8.8 min,浸提温度50 ℃,浸提时间3.9 h,连续提取2次。在此条件下,香樟叶叶绿素的平均提取量为4.667 mg·g^-1。抑菌实验表明,在盐水体系中以10 mmol·L^-1的香樟叶叶绿素杀菌效果最好。     

Susceptibility breakpoint for cefquinome against Escherichia coli and Staphylococcus aureus from pigs

Cefquinome is the only fourth-generation cephalosporin used solely for veterinary applications.In this study,we established the wild-type cut-off (CO_(WT)) and pharmacokinetic/pharmacodynamic cut-off (CO_(PD)) of cefquinome against Escherichia coli and Staphylococcus aureus.A total of 210 E.coli and 160 S.aureus isolates were collected from pigs in Guangdong Province between 2014 and 2018.The minimum inhibitory concentrations (MICs) were determined using a microdilution broth method.MIC_(50) and MIC_(90) were 0.06 and 0.25μg m L~(–1) for E.coli and 0.5 and 1μg m L~(–1) for S.aureus,respectively.Statistical analysis and the ECOFFinder Program showed that the CO_(WT )for cefquinome against E.coli and S.aureus were0.125 and 2μg m L~(–1),respectively.The resistance rates were 11.9%for E.coli and 6.25%for S.aureus.Based on a5 000-subject Monte Carlo simulation,the CO_(PD) value for cefquinome against E.coil and S.aureus was 0.25μg m L~(–1) under the recommended dose (2 mg kg~(–1),twice a day for 3 days),confirming that infections caused by strains with MIC≤0.25μg m L~(–1) could be effectively treated.Following adjustment of the dosing regimen to 4.5 mg kg~(–1),effective treatment (90)was achieved for S.aureus infections with MIC_(90) 1μg m L~(–1).This susceptibility breakpoint determination is significant for resistant surveillance and cefquinome dosage guidance against E.coli and S.aureus in pigs.     

奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立

为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S rRNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1 500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与GenBank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24 h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10⁴、4×10⁴、1.5×10⁵ CFU·mL^-1。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。     

thanatin 串联抗菌肽原核表达研究

抗菌肽thanatin是一类广谱性的阳离子抗菌活性肽,对病原性真菌有很好的杀灭效果。为了提高thanatin抗菌肽表达丰度,将3个thanatin单体拷贝基因进行串联,与MBP蛋白进行融合表达,表达的产物经过酶切纯化后,通过Western blot和质谱鉴定,结果表明3×thanatin在大肠埃希菌中成功表达,对核盘菌的抑菌活性测定结果表明,原核表达的3×thanatin最低抑菌浓度为6.6 μmol·L^-1, 而化学合成的thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌浓度约为64 μmol·L^-1,3×thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌活性提升了约1个数量级。     

浙江省新昌县茶叶炭疽病病原鉴定及其药剂敏感性测定

为了确定浙江新昌茶叶炭疽病的病原菌,采用组织分离法对其进行病原菌分离和病害特征描述,通过对病原菌形态结构特征的观察、致病性的试验和rDNA ITS序列的测定比较,对病原菌进行了鉴定,并针对该病原菌采用生长速率法进行了药剂敏感性测定。病原鉴定结果表明,引起浙江省新昌县的茶叶炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌(Colletotrichun gloeosporioides);15种药剂敏感性测定结果表明,250 g·L^-1吡唑醚菌酯乳油、65%代森锌可湿性粉剂、45%咪鲜胺微乳剂、250 g·L^-1丙环唑乳油和70%甲基硫菌灵可湿性粉剂对茶叶炭疽病菌丝生长具有较强的抑制效果(EC₅₀<1 mg·L^-1);325 g·L^-1苯甲·嘧菌酯悬浮剂、10%苯醚甲环唑水分散颗粒剂、430 g·L^-1戊唑醇悬浮剂、38%唑醚·啶酰菌水分散颗粒剂和10%己唑醇悬浮剂的抑制效果次之(1 mg·L^-150<10 mg·L^-1);12.5%烯唑醇可湿性粉剂、25 g·L^-1咯菌腈悬浮种衣剂和42.8%氟菌·肟菌酯悬浮剂的抑制效果相对较差(EC₅₀>10 mg·L^-1);50%多菌灵可湿性粉剂和50%啶酰菌胺水分散颗粒剂对茶叶炭疽病菌丝生长基本无效。     

纳米二氧化钛对水生生物的急性毒性与安全评价

为系统评价纳米二氧化钛(nTiO₂)对水生生物的安全性,研究其对斜生栅列藻(Scenedesmus obliquus)、大型溞(Daphnia magna Straus)、斑马鱼(Brachydanio rerio),以及非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪的急性毒性,并进行安全评价。结果表明,nTiO₂对斜生栅列藻、大型溞、斑马鱼和非洲爪蟾蝌蚪的急性毒性分别为0.140 mg·L^-1(72 h-EC₅₀)、1.26 mg·L^-1(48 h-EC₅₀)、22.0 mg·L^-1(96 h-LC₅₀)和5.02 mg·L^-1(96 h-LC₅₀),毒性级别分别为高毒、中毒、低毒和中毒。     

毒死蜱和百菌清对斑马鱼早期发育阶段的联合毒性效应

为评价毒死蜱和百菌清的单剂毒性和联合毒性,以斑马鱼为受试生物,采用静态法和实时荧光定量PCR方法,研究毒死蜱和百菌清单剂,以及二元组合时对斑马鱼胚胎的急性毒性和对斑马鱼幼鱼性腺轴相关基因的影响。结果显示,毒死蜱和百菌清对斑马鱼胚胎分别表现为中等和高等毒性,96 h-LC₅₀(半致死浓度)分别为2.139 mg·L^-1和0.353 mg·L^-1。毒死蜱和百菌清联合作用类型为协同作用,联合暴露时,对斑马鱼胚胎的96 h-LC₅₀分别为0.38 mg·L^-1和 0.063 mg·L^-1。中浓度(26.7 μg·L^-1)和高浓度(106.7 μg·L^-1)的毒死蜱可以诱导斑马鱼幼鱼体内芳香化酶基因(CYP19α)、卵黄蛋白原基因(VTG1、VTG2)和雌激素受体基因(ERα、ERβ1、ERβ2)不同程度的上调表达;低浓度(1.1 μg·L^-1)百菌清诱导斑马鱼体内VTG1、VTG2、ERβ1和ERβ2基因的上调表达;低浓度(6.7 μg·L^-1毒死蜱+1.1 μg·L^-1百菌清)二元组合会引起斑马鱼体内VTG1、ERβ1、ERβ2和ERα基因下调。说明毒死蜱和百菌清对斑马鱼幼鱼具有雌激素内分泌干扰效应,但毒死蜱和百菌清二元组合对斑马鱼幼鱼的雌激素内分泌干扰效应降低。在评估农药对水生生物的危害时,应充分考虑复合污染时的联合效应。     

11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^-1的11S,并且在E组和F组分别添加1 μmol·L^-1吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1 μmol·mL^-1 Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。     

农作物废弃物焚烧和水体腐化过程对环境的影响

针对食用菌生产中的常用基质——稻草、桑枝条、茭白叶、玉米芯和山核桃蒲等5种农业废弃物,模拟农民2种典型处置方式(燃烧、丢弃水体),研究其对环境质量的影响。结果表明,在相同水平的农作物秸秆投放量下,明火和闷烧下均产生大量的SO₂、细颗粒物(PM_2.5)和NOx等排放物,闷烧产生的排放物明显高于明火燃烧,PM_2.5和SO₂排放以茭白叶最高,分别为2 773.37、3.96 mg·m^-3,NO_x排放以桑枝条最高,达61.5 mg·m^-3。农作物废弃物丢弃水体(浸泡)使水体的pH值下降(除山核桃蒲外),其悬浮物、总氮(total nitrogen, TN)、总磷(total phosphorus, TP)、氨氮、高锰酸盐指数和色度值都升高,在30~50 d时各指标达到峰值。茭白叶水体腐化过程的TN排放量达270.85 μg·L^-1,较其他样品高出5倍以上。农作物废弃物浸泡后,水体中大肠埃希菌在60 d周期内基本呈现“滋生—增长—凋亡”的变化过程,细菌菌落则在10 d时最大,之后逐渐凋亡。农作物废弃物焚烧和水体腐化2种处置方式均会造成环境污染,建议加大对农业废弃物的资源化循环利用。