蔗糖对铁皮石斛原球茎生长与多糖积累的影响

在确定合适碳源的基础上,研究比较不同蔗糖浓度下铁皮石斛原球茎生长和多糖的积累情况.结果表明,在葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖4种碳源中,蔗糖和葡萄糖对原球茎生长和多糖积累的影响优于乳糖和果糖.在蔗糖浓度为30～60g/L时,浓度越高,原球茎生长受到抑制越大,而且生长周期延长,但多糖含量增加越快,多糖含量越高;当蔗糖浓度超过60g/L时,蔗糖表现出明显的抑制效应;适合多糖积累的蔗糖起始浓度为30 g/L时,有利于原球茎的生长,最大干重量为17.93g/L,多糖最高含量为208.7mg/g,培养40 d时,其产量为3 679.6 mg/L.     

几种因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

通过探讨几种不同因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响,结果表明,MS、1/2MS、B5、N6和White培养基对原球茎的生长和多糖积累有不同的影响;其中,1/2MS和N6培养基适合原球茎生长和多糖积累.当氮源浓度为30～60mmol/L、NO3-/NH4 分子比为40∶20、30∶30时,有利于原球茎生长和多糖积累.通过二次回归正交组合设计,优化拟合得到激素6-BA和NAA的正交回归模型;寻优定量结果表明,6-B A为1.25mg/L、NAA为0.52mg/L时,原球茎最大干重可达14.68g/L;当6-BA与NAA组合的最佳浓度配比为1.41mg/L、0 36mg/L时,原球茎最高多糖含量为274.2mg/g·DW.在以转速、接种量、pH 3因素4水平的L16(43)正交试验中,对原球茎生长影响最大的因子是pH,其次是转速,接种量影响最小;当初始培养液pH为7.0、摇床转速为110r/min、接种量为30g·FW/L时,适合原球茎生长.各因子对原球茎多糖积累的影响程度依次为转速、pH、接种量,当初始培养液pH为5.0、摇床转速为110r/min、接种量为50g·FW/L时,有利于多糖积累     

培养基渗透压对铁皮石斛原球茎生长和多糖含量的影响

以无菌铁皮石斛原球茎为材料,于培养液中分别添加不同浓度的甘露醇以调节其渗透压,研究不同甘露醇浓度对铁皮石斛原球茎生长及多糖含量的影响。结果表明:添加低浓度的甘露醇可促进铁皮石斛原球茎生长及增加多糖含量,添加高浓度的甘露醇能明显抑制铁皮石斛原球茎生长及降低多糖含量。在不同的培养时间,当甘露醇质量浓度为0~20g·L~(-1)时,原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量总体呈上升趋势,当甘露醇质量浓度超过20g·L~(-1),原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量呈下降趋势。培养后35d,各处理的原球茎干重、多糖含量和多糖产量均达最大值,且甘露醇质量浓度为20g·L~(-1)的处理其干重、多糖含量和多糖产量均高于对照和其他处理,分别为17.30g·L~(-1)、361.52mg·g~(-1)和6 255.38mg·L~(-1)。     

中途添加不同浓度蔗糖对铁皮石斛原球茎多糖积累的影响

以铁皮石斛类原球茎为材料,研究了在培养过程中添加不同浓度的蔗糖对铁皮石斛原球茎多糖积累的影响,初步探讨中途补料对石斛原球茎多糖积累及培养液中蔗糖消耗的动态变化过程,结果表明:在培养第20d添加5g/L蔗糖对原球茎多糖积累最为有利,干重量及多糖含量、多糖产量最高,分别为16.02g/L、300mg/g、4805.85mg/L,且在整个培养过程,蔗糖的利用率最高,原球茎的活力最强。     

铁皮石斛原球茎悬浮培养及其多糖积累的研究

将利用铁皮石斛种子诱导的原球茎在液体条件下培养,研究植物激素和有机添加物对原球茎增殖以及多糖积累的影响。结果表明,在N6液体培养基中附加1.0mg/L NAA+1.0mg/LKT+5%香蕉汁提取物+5%土豆汁提取物,最有利于铁皮石斛原球茎增殖和多糖积累,培养30d时,原球茎鲜质量达到122.9g/L,多糖含量在25d时达到24.2%。结果提示,利用液体培养规模化生产铁皮石斛原球茎是可行的,是铁皮石斛大田传统栽培方式的重要替代途径。     

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80℃热水中浸提2 h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1∶0.4,样品/氯仿 正丁醇(v/v)为1∶0.35,萃取时间采用5 min最佳。     

热水浸提法提取铁皮石斛原球茎多糖的工艺

利用正交试验对铁皮石斛原球茎多糖提取的工艺条件进行优化,考察料水质量比、浸提温度、浸提时间和浸提次数4个因素对铁皮石斛原球茎多糖得率的影响。结果表明,铁皮石斛原球茎多糖的最佳提取工艺为浸提次数4次,浸提时间3 h,料水质量比1∶60,浸提温度80℃,多糖得率为9.17%。在4个提取因素中,对铁皮石斛原球茎多糖提取影响最大的因素是浸提次数,其次是浸提时间,料水质量比和浸提温度影响都比较小,其中浸提次数不同水平间呈极显著差异,浸提时间、料水质量比和浸提温度对铁皮石斛原球茎多糖提取率影响不显著。     

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养研究进展

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,具有很高的药用价值。为了解决铁皮石斛组织培养中存在的组培苗生产成本高、移栽苗成活率低等问题,铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究日益增多。从影响原球茎增殖和石斛多糖积累的因素及石斛多糖药理研究等方面阐述了关于铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究概况。     

不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响

[目的]为了找到适合原球茎增殖的培养条件,为工厂化育苗提供技术支撑。[方法]以铁皮石斛茎段诱导出的原球茎为实验材料,研究了不同基本培养基、不同碳源、不同浓度的脱落酸(ABA)和培养方式对其增殖的影响。[结果]在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基;在低浓度的条件下,随ABA浓度的增加,原球茎的增殖速度加快,当浓度为0.5 mg/L时,增殖最大;蔗糖为碳源时原球茎增殖的效果比葡萄糖、果糖好;固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数最高。[结论]在改良MS中加入30 mg/L蔗糖和0.5 mg/L ABA,进行固体培养或液体振荡培养,铁皮石斛原球茎增殖的效果好。     

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。     

铁皮石斛高效再生体系研究与应用

以原球茎为实验材料,对影响铁皮石斛再生体系的主要影响因素进行试验,建立铁皮石斛在生产中的高效再生体系。试验结果表明,在基本培养基MS、Fonnesbech和N6中,最适合的基本培养基为MS;原球茎最佳增殖培养基为MS＋6-BA0．75mg／L＋NAA0．2mg／L＋4．0％白糖,接种35d后原球茎增殖倍数为4．19;最佳分化培养基为Ms＋6-BA0．3mg／L＋3．0％白糖,分化率为74％。分化出的丛芽在生根培养基MS＋AC0．05％＋白糖3．0％中,28d生根率达到87％。     

铁皮石斛组织培养研究进展

铁皮石斛(Dendrobium officinale)是中国的珍贵中药材,目前,铁皮石斛野生资源稀缺,组织培养是铁皮石斛快速繁殖的有效途径。近年来,铁皮石斛组织培养上的研究主要有种子无菌萌发,外植体诱导原球茎发生、增殖与分化,在培养基上生根与壮苗等,大量研究表明,以铁皮石斛茎段为外植体进行组培更易获得试管生根苗。原球茎增殖与分化最适基础培养基是MS,NAA浓度为0.5 mg/L时,铁皮石斛生根率为100%,且长势良好,生长健壮。配以一定的添加物能使之更快形成幼苗。同时,幼苗壮苗以MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基为最佳,茎粗、苗高、叶长,效果最好。但是铁皮石斛组织培养周期长是其快速繁殖中存在的主要问题,对此,建议可以通过遗传变异、单倍体诱导、离体开花授粉等非常规育种方式,快速培育优良品种,或者在进行组织培养研究时,直接以组织培养物替代原药材使用或者生产活性成分等方面进行研究。     

不同有机附加物对铁皮石斛原球茎增殖和组培苗生根壮苗的影响

有机附加物在铁皮石斛组培过程中起着重要作用,扩大天然有机物种类的研究范围将有可能挖掘到更多促进生长的附加物.本研究在铁皮石斛原球茎增殖和组培苗生根壮苗过程中,将多种天然有机物进行组合添加,探索具促进作用的有机附加物新种类和新组合.在原球茎增殖培养基中添加100 g/L土豆汁与100 g/L其他有机物(香蕉汁、玉米汁、西瓜汁、荔枝汁及小麦面粉),以土豆汁与玉米汁对增殖的促进效果最佳(平均增殖5.66倍,鲜重提高4.12倍),而分化程度较低(分化率67.9%,排第3),适合作为原球茎继代培养前期的添加成分.添加土豆汁与小麦面粉,原球茎分化率(平均95.1%)和鲜重增加(平均5.35倍)最高,分化苗健壮度最高,适合作为原球茎继代培养后期的添加成分.在组培苗生根壮苗期间,添加100 g/L香蕉汁与100 g/L其他有机物(土豆汁、玉米汁、西瓜汁、荔枝汁及小麦面粉),以香蕉汁与小麦面粉为最佳有机附加物,平均生根率96.6%,平均根长4.82 cm,与其他组合差异极显著;组培苗健壮度、整齐度也最高.玉米汁和小麦面粉都是取材于种子,富含多种营养物质,其在石斛组培过程的促进作用尚未有人报道过.本研究结果将对提高铁皮石斛瓶苗质量,缩短培养周期具有一定现实意义.     

铁皮石斛离体根尖经体细胞胚再生植株研究

以铁皮石斛离体根尖为外植体,研究了在不同培养条件下离体根尖经愈伤组织形成体细胞胚及直接产生体细胞胚再生植株的细胞学过程,认为铁皮石斛类原球茎是单细胞起源的真正体细胞胚.     

铁皮石斛查尔酮合酶基因克隆与表达分析

[目的]克隆铁皮石斛中查尔酮合酶(CHS)基因,分析其基本生物学信息及组织表达特异性,为进一步研究CHS基因在铁皮石斛中的表达调控机理及其在铁皮石斛中的功能打下理论基础.[方法]采用铁皮石斛转录组序列与NCBI同源序列进行比对,根据保守区段设计引物克隆铁皮石斛CHS基因的cDNA全长,采用实时荧光定量PCR定量表达分析不同生长年限、不同组织部位中CHS基因的表达水平.[结果]铁皮石斛CHS基因cDNA编码区1188 bp,编码395个氨基酸,GenBank登录号KT783451,分子量为43.2 kD,理论等电点6.05.铁皮石斛GHS氨基酸序列与同属植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的CHS氨基酸序列同源性最高,达99%,与非同科植物欧洲大叶杨(Populus trichocarpa)、巨桉(Eucalyptus grandis和紫玉兰(Magnolia liliiflora)等植物的同源性在83%左右.该基因编码的蛋白质属非分泌蛋白,定位于细胞质基质中,为非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白.CHS基因在1年生铁皮石斛叶片中的表达量最高,随着植株年龄的增长,叶片中CH基因的表达量降低,茎中的表达量升高.[结论]铁皮石斛CHS基因早期主要参与激素运输和器官形态建成,后期主要参与类黄酮物质合成.     

两种铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

 铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法：往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚;用56℃热水水浴5min加速组织细胞裂解;抽提时间由原来15 min缩短为5min;根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液。CTAB法：根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液;用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀;灵活处理,适当增大LiCl浓度。结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验。     

霍山石斛原球茎的诱导及培养方式对原球茎增殖的影响

以霍山石斛试管苗带节的茎段为材料,研究不同激素组合对霍山石斛原球茎诱导的影响,并比较4种不同培养方式对霍山石斛原球茎增殖的影响。结果表明,生长物质2,4-D是霍山石斛原球茎诱导的关键因子,霍山石斛原球茎诱导的适宜培养基为Knudson 2,4-D 0.1 mg.L-1 KT 0.05 mg.L-1;霍山石斛原球茎增殖培养阶段,主要采用液体振荡培养方式,适时转接于固体培养基上交替培养,调节原球茎生长状态,采用这种改进的培养方式生产的原球茎可用于生物反应器的大规模培养。     

基本培养基和激素组合对金钗石斛原球茎增殖的影响

以野生金钗石斛茎段诱导长出的原球茎为材料,比较了M S、1/2 M S、B 5、M iller四种不同基本培养基在四个不同培养周期中金钗石斛原球茎生长增殖的情况,筛选出最佳增殖培养基为B 5培养基,原球茎的最适培养周期为30d;在不同生长素比较试验中,NAA对原球茎的增殖效果明显好于IBA;在不同激素6 BA和NAA配比组合正交试验中,采用Ducan多重比较法进行差异显著性分析表明,处理6 BA 0.5m g/L NAA 0.2m g/L的配比为最佳激素组合,原球茎净增殖倍数达到5.146倍。     

不同添加物及浓度对铁皮石斛组织培养的影响 x

以无菌播种取得的铁皮石斛无菌苗作为试验材料,研究1/2 MS 培养基中添加不同浓度的添加物对铁皮 石斛的增殖、生根的影响。结果表明;马铃薯汁和木瓜乳有利于诱导芽的增殖,其中又以1/2 MS+NAA 0.2 mg/L +蔗糖 30 g/L+马铃薯200 g/L 培养基最有利于诱导芽的增殖;香蕉乳有利于诱导生根,其中又以1/2 MS +NAA 0.5 mg/L+蔗 糖30 g/L +香蕉100 g/L 培养基最有利于诱导芽生根。