Isolation of nuclei from a marine dinoflagellate

By means of a medium containing dextran, nuclei were isolated in high yield from cells of Gymnodinium nelsoni, a marine dinoflagellate. Most of the DNA, but less than onetenth of the RNA, of the original cells was recovered in the purified nuclei. The nuclei appeared substantially intact as observed by light or electron microscopy. The isolated nuclei were capable of incorporating tritiated uridine triphosphate into material insoluble in cold acid. The general procedure was found to be applicable also to two species of diatoms.     

Isolation of an algal morphogenesis inducer from a marine bacterium

Ulva and Enteromorpha are cosmopolitan and familiar marine algal genera. It is well known that these green macroalgae lose their natural morphology during short-term cultivation under aseptic conditions and during long-term cultivation in nutrient-added seawater and adopt an unusual form instead. These phenomena led to the belief that undefined morphogenetic factors that were indispensable to the foliaceous morphology of macroalgae exist throughout the oceans. We characterize a causative factor, named thallusin, isolated from an epiphytic marine bacterium. Thallusin induces normal germination and morphogenesis of green macroalgae.     

海水养殖斜带石斑鱼致病性鳗弧菌的分离鉴定及药敏试验

[目的]了解海水养殖斜带石斑鱼弧菌病的病原,为生产中有效防治石斑鱼弧菌病提供科学依据.[方法]采用常规方法进行患病斜带石斑鱼病原菌分离,人工感染试验确定其致病性,以形态学观察、生理生化测试结合16SrRNA和gyrB基因序列分析等方法进行菌株鉴定,并以K-B纸片扩散法进行药敏试验.[结果]从广东省湛江市某养殖场患病斜带石斑鱼中分离获得l株优势菌株(M1),经人工感染试验证实其对斜带石斑鱼具有较强的致病性.M1菌株的16S rRNA序列和gyrB基因序列与GenBank数据库中的鳗弧菌具有较高相似性,其同源性均在95.7%以上.根据M1菌株的形态特征、生理生化特性及分子特征,可鉴定其属于弧菌属的鳗弧菌(Vibrio anguillarum).药敏试验结果显示,M1菌株对庆大霉素、新生霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、利福平、诺氟沙星和左氟沙星等7种药物高度敏感,对阿洛西林、强力霉素、链霉素、复方新诺明和甲氧苄啶等14种药物敏感.[结论]引起广东省湛江市某养殖场海水养殖患病斜带石斑鱼弧菌病的病原菌为弧菌属鳗弧菌,生产中可适度选用氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明和甲氧苄啶等抗菌药物进行防治.     

2,6-二氯苯甲醛一步法合成2,6-二氯苯甲腈

以2,6-二氯苯甲醛为原料,采用KF/Al2O3为催化剂,一步法反应合成2,6-二氯苯甲腈.反应的优化条件为:2,6-二氯苯甲醛与盐酸羟胺的摩尔比为1.0∶1.2,反应温度为110℃,反应时间为6.5 h,KF、Al2O3质量比为1.0∶1.5.用元素分析与红外光谱确定了目标化合物的结构.该合成路线是一种简单、经济的方法.     

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定

从福建海域的海水、海泥及海藻样品中分离到3株产碱性蛋白酶的海洋细菌菌株3B、6CW、15E,采用16S rDNA分子生物学鉴定结合细菌的常规鉴定方法,确认分离到的3株产蛋白酶的海洋细菌菌株分别是荧光假单胞菌(Pseudom onas fluo-rescens)、粘质沙雷菌(Serratia marcescens)和氧化短杆菌(Brevibacterium oxydans),并对其发酵液中的蛋白酶活力做了初步研究.     

海洋细菌的分离、鉴定及抗烟草花叶病毒活性分析

从福建霞浦海域分离、筛选到6株对烟草花叶病毒(TMV)具有体外钝化活性的菌株,其中,菌株9和10的抑制率较高,分别达95.26%和92.18%.进一步测定2株菌对TMV的抑制增殖活性,结果表明,菌株9和10可明显抑制TMV的增殖,其抑制率分别为36.29%和35.08%.通过对2株菌的形态特征、生理生化反应及16S rDNA序列的分析,将菌株9鉴定为蜡样芽孢杆菌,菌株10鉴定为水生海洋芽孢杆菌.     

3株抗植物病原真菌的海洋细菌的分离筛选

从连云港附近海域及市场采集的褐藻、绿藻、虾、三疣梭子蟹、日本鲟、文蛤以及海水和海泥等150个样品,分离到海洋细菌385株。采用平板对峙法测定了分离到的海洋细菌对辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)、玉米斑枯病菌(Septario zeicola)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、小麦赤腐霉病菌(Fusarium graminearum)、镰刀菌(Fusariumspp.)、雪腐镰刀菌(Fusarium nivale)、枯萎病原菌(Fusarium oxysporum)、链格孢菌(Alternariasp.)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)10种植物病原真菌的抑制作用,从中获得具抑菌作用的细菌3株,分别是分离自连岛死鱼样品的L1-9菌株、黄窝漂浮枯草样品的HW1-2菌株和分离自西墅虹益蛏样品的XS1-4菌株。菌株L1-9对10种植物病原真菌都有明显的抑制作用,对小麦赤腐霉病菌(Fusarium graminearum)的抑制作用最为明显。采用滤纸片培养法测定的结果表明:3个菌株发酵液对供试的植物病原真菌也有一定的抑菌作用,但抑菌作用低于菌株的直接作用。     

鸡胚破骨细胞的分离培养与鉴定

从18日龄鸡胚长骨（股骨和胫骨）中机械分离破骨细胞于盖玻片和骨片上培养,以建立鸡胚破骨细胞体外培养方法。结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜（TEM）和扫描电镜（SEM）对其形态和功能进行观察鉴定。结果表明,直接分离的细胞具有典型的破骨细胞的形态特点：属多核大细胞,TRAP染色阳性,能在骨片表面形成吸收陷窝。结论：鸡胚长骨机械分离法可获得一定数量并具有骨吸收活性的破骨细胞。     

土壤拮抗放线菌的分离、筛选及鉴定

从辽宁及新疆土壤中分离到293株放线菌,筛选出对瓜类枯萎病菌有拮抗作用的放线菌菌株69株,其中高拮抗活性菌株13株。通过对13株拮抗放线菌的培养特征、形态特征、细胞壁组分分析表明,属于链霉菌属的8株,属于链轮丝菌属的4株,属于放线多孢菌属的1株。链霉菌属与链轮丝菌属的细胞壁类型均为Ⅰ型,放线多孢菌属的细胞壁类型为Ⅳ型。     

新型产琼胶酶海洋细菌 Arthrobacter sp. ZXY772的分离鉴定及其应用

从广东省南澳岛采集龙须菜(Gracilaria lemaneiformis),分离出一株酶活性较高的琼胶酶产生菌,探究其应用价值,通过筛选培养基分离产琼胶酶的菌株,采用形态学和16S rRNA基因序列分析对菌株进行初步鉴定,构建系统发育树;采用DNS比色法对琼胶酶活性进行测定;初步探究菌株所产琼胶酶类型和酶解产物的抑菌效果。结果表明,经分离纯化得到一株产琼胶酶海洋细菌ZXY772,该菌株为革兰氏阳性球杆菌,属于节杆菌属(Arthrobacter sp.);胞外酶只产β-琼胶酶;该菌株于28℃、转速为180 r/min液体发酵培养基中振荡培养时,其生长对数期为3～14 h,当菌株摇床发酵至27 h,其琼胶酶活力到达最高96.0 U/mL;菌株粗酶液的酶解产物对枯草芽孢杆菌的抑制效果最强,其抑菌圈直径大小到达14.45 mm。     

宣木瓜中水溶性维生素的提取分离及含量测定

[目的]研究宣木瓜中水溶性维生素的提取分离方法。[方法]采用冷浸法、热提法和超声波提取法分别对宣木瓜中的水溶性维生素进行提取,并采用高效液相色谱法(HPLC)测定其含量。[结果]超声波提取法的提取效率最高;HPLC法能快速测定宣木瓜中的水溶性维生素的含量。[结论]HPLC法操作简单、快速,结果准确、可靠,可用于实践。     

2,6-dichlorophenol, sex pheromone of the lone star tick

The compound 2,6-dichlorophenol was identified from female lone star ticks, Amblyomma americanum, and is believed to be a sex pheromone of this arthropod. The natural occurrence of a chlorinated organic compound in a land animal is new. The presence of similar compounds of exogenous origin is common in animals, but efforts to implicate an outside source for the halogenated phenol have failed.     

抗真菌海洋放线菌的分离筛选与抗菌机制研究

从江苏连云港海域采集海水、海泥、漂浮物、海洋动物样品,分离得到15株海洋放线菌.采用平板对峙培养法和打孔法测定放线菌不同菌株对玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum)、雪腐镰刀病菌(Fusarium nivale)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、细链格孢病菌(Alternaria tenuis)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等植物病原真菌的抑制作用.结果表明:放线菌菌株BM-2、T-6、T-1-1、D-3、XS-X5-3、M-7、X-7对供试的植物病原真菌具有一定的抑制作用.其中BM-2菌株的抑菌作用最强,其发酵液能明显抑制多种植物病原真菌菌丝的生长,同时对细链格孢菌的分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用.     

鹧鸪单核细胞增多性李氏杆菌的分离鉴定

2000年冬，从河北省某鹧鸪养殖场送检的病死鹧鸪中分离到3株革兰氏阳性球杆菌。应用细菌学检验方法，对此分离菌进行了培养特性观察和生化特性分析等。并结合流行病学调查，临床症状和病理剖检变化。将其鉴定为单核细胞增多性李氏杆菌，致病性试验表明，分离菌具有较强的致病性，选用敏感药物治疗后，病情得到了有效地控制。     

小球藻蛋白质的分离、纯化及抗氧化特性

从小球藻中提取蛋白质,并研究了小球藻蛋白质抗氧化特性。通过反复冻融、细胞破碎、离心、盐析和凝胶层析,从小球藻中得到两种蛋白质（ProⅠ和ProⅡ／）,获得率分别为0．280％和0．664％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单条带,分子量分别为20．2ku和20．4ku。紫外可见光谱显示,ProⅠ在280nm有一特征吸收峰,ProⅠ／在280nm和675nm处各有一特征吸收峰。体外设计清除超氧阴离子自由基（O2^-·）和羟自由基（·OH）实验,结果显示两种蛋白质能清除超氧阴离子自由基,黑暗条件下能清除羟自由基,但光照条件下生成羟自由基。     

鸡源乳杆菌的分离鉴定与培养条件优化

从健康鸡的肠道中分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳杆菌,命名为乳杆菌L3株。采用单因素法和正交试验设计法对乳杆菌L3株的培养条件进行了优化,结果表明,乳杆菌L3株的最佳液体发酵培养基组成是4%的蔗糖、0.4%的胰蛋白胨、10%的番茄汁、0.5%β-磷酸甘油二钠、0.2%的柠檬酸铵、0.5%的乙酸钠、0.1%的吐温-80、0.1%的L-Cys盐酸盐、0.05%的MgSO4、0.02%的MnSO4,最适接种时间是16~18h,最适培养条件是温度40℃、培养时间28 h、初始pH 5.0,在此培养条件下,乳杆菌L3株的菌落总数可达8.14×108cfu/mL。     

小球藻蛋白质的分离、纯化及抗氧化特性

从小球藻中提取蛋白质，并研究了小球藻蛋白质抗氧化特性。通过反复冻融、细胞破碎、离心、盐析和凝胶层析，从小球藻中得到两种蛋白质（ProⅠ和ProⅡ／），获得率分别为0．280％和0．664％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单条带，分子量分别为20．2ku和20．4ku。紫外可见光谱显示，ProⅠ在280nm有一特征吸收峰，ProⅠ／在280nm和675nm处各有一特征吸收峰。体外设计清除超氧阴离子自由基（O2^-·）和羟自由基（·OH）实验，结果显示两种蛋白质能清除超氧阴离子自由基，黑暗条件下能清除羟自由基，但光照条件下生成羟自由基。     

白灵菇胞外多糖的分离纯化及其抗氧化活性的研究

从白灵菇菌株JZ-FH16发酵液中提取胞外多糖,并对该多糖的分离纯化技术、结构和抗氧化活性进行了研究。结果表明,白灵菇胞外粗多糖经DEAE-Cellulose52和Sephadex G-200柱层析后得到主要组成成分PNEP I-a;采用HPLC、Sephadex G-200柱层析、琼脂糖凝胶电泳、红外光谱以及化学反应等方法证明PNEP I-a是一种含有α-D葡萄糖、甘露糖等特征基团的中性纯多糖,其对.OH和O.2-清除率分别为49.50%和47.24%,具有显著的抗氧化活性。     

灰树花多糖的分离、纯化与理化性质

灰树花子实体用热水提取，乙醇沉淀，透析冻干得灰树花多糖粗品，再经Sevag法脱蛋白，DEAE－Sephadex A-25柱层析纯化得到4种多糖分别为PGF－1，PGF－2，PGF－3和PGF－4。4种多糖经纸层析，Sephadex G-200柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明都为单一均匀组分：PGF－1经纸层及气相色谱分析证实它是一种葡萄糖；凝胶渗透色谱测定其分子量为11万。红外光谱揭示PGF－1含β－型糖苷键。     

肉鸡成肌细胞的分离培养与鉴定

为建立肉鸡成肌细胞的体外分离、培养及鉴定体系,选取11 d鸡胚为材料,利用Ⅰ型胶原酶消化鸡胚胸肌,差速贴壁法分离纯化成肌细胞,优化成肌细胞培养条件;通过细胞形态学观察和成肌分化标志基因表达情况进行细胞鉴定,并利用含2%马血清的培养基诱导其成肌分化。结果表明:分离获得的细胞贴壁后呈纺锤形,39.5 ℃培养条件下细胞增殖速度显著高于37.0 ℃(P<0.05);经实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测分析,增殖期与分化期均有成肌细胞的特异性标志基因成肌因子5(Myogenic factor 5,Myf5)与成肌分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)的表达,且与增殖期相比,成肌细胞分化期肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)与肌肉调节因子4(Muscle regulatory factor,MRF4)基因表达量显著升高(P<0.05);此外,细胞增殖期结蛋白(Desmin)和分化期肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MyHC)呈阳性表达。综上,成功分离获得了肉鸡成肌细胞,并在39.5 ℃培养条件下具有更好的增殖能力,为研究肌肉发育及其营养调控机制奠定了基础。