磷酸二酯酶亚型抑制剂与细胞周期蛋白抑制剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

选用磷酸二酯酶3（PDE3）特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk）抑制剂Roscovitine（ROSC）对绵羊卵丘卵母细胞复合物（COCs）的体外自发成熟进行研究，拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M-199为基础培养液，绵羊COGs在含有50μmol／L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养24h。COCs在含有50μmol／LROSC的培养液中培养24h，转移到含有20IU／L FSH的培养液继续培养24h检查核相。结果表明：COGs在M-199基础培养液和含有Rolipram的培养液中都可以自发恢复减数分裂，但是在含有Milrinone或ROSC的培养液中减数分裂受到阻滞；并且ROSC对绵羊COCs体外自发成熟的抑制作用要远高于Milrinone（P〈0．05）。当COGs从ROSC转移到含有20Iu／LFSH的培养液继续培养24h后．90．4％卵母细胞恢复到第2次减数分裂中期（MⅡ）。上述结果表明PDE3和cdk在绵羊减数分裂恢复中具有重要的作用。     

磷酸二酯酶抑制剂对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

哺乳动物有腔卵泡中的卵母细胞在体外会自发恢复减数分裂,适当延迟减数分裂的自发恢复,能促进核与胞质成熟的同步化,有利于后续胚胎的发育。本试验研究了磷酸二酯酶3(PDE 3)特异性抑制剂milrinone对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,milrinone抑制山羊卵母细胞体外成熟的时间为6 h,其最佳剂量为100μmol/L,经milrinone处理体外培养28 h成熟的山羊卵母细胞用于孤雌激活,能显著提高孤雌激活胚的卵裂率及囊胚率。说明成熟培养液中添加适当剂量的milrinone,能显著提高体外成熟的山羊卵母细胞的质量。     

PDE5抑制剂Sildenafil对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

采用体外培养方法和放射免疫分析法(RIA)研究磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂Sildenafil(西地那非)对小鼠卵母细胞体外自发成熟的作用。结果显示:该抑制剂显著抑制(P<0.05)小鼠卵母细胞的自发成熟,且其抑制作用是可逆的。放射免疫分析实验表明,Sildenafil对卵丘细胞(CCs)和裸卵母细胞(DOs)内环鸟苷一磷酸(cGMP)水平没有显著的升高作用,却能够显著提高CCs和DOs内环腺苷一磷酸(cAMP)的水平。以上结果提示,cGMP和cAMP信号通路之间的互作可能参与了PDE5调控的小鼠卵母细胞自发成熟过程。     

磷酸二酯酶抑制剂对水牛卵母细胞体外成熟的影响

[目的]探讨磷酸二酯酶抑制剂米力农(milrinone)对水牛卵母细胞成熟的影响。[方法]水牛卵母细胞分成3组,分别在含0、50、100μmol/L的milrinone的成熟液中培养16 h后,每组的一半卵母细胞用来染色,检验核成熟情况;另一半卵母细胞再在不含milrinone的成熟液中培养12 h,挑选形态正常的卵母细胞受精后培养。[结果]添加50和100μmol/L milrinone的成熟液成熟的卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)比率分别为25.9%和12.1%,显著低于对照组(76.9%);但另一半卵母细胞再培养、受精后试验组(50、100μmol/L mil-rinone)的分裂率(59.3%和61.2%)和囊胚率(35.9%和31.1%)与对照组(56.7%和28.8%)相比均无显著性差异(P0.05)。[结论]milrinone对水牛卵母细胞的成熟具有明显的抑制作用,成熟抑制解除后水牛卵母细胞仍可保持较高的发育潜能。     

体内制抑一氧化氮合成酶对小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响

实验研究了一氧化氮合成酶抑制剂L－NAME对昆明白小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响。初情期前的昆明小鼠注射PMSG促进发情，注射hCG促进排卵，并在注射hCG前后各3h注射L－NAME。注射hCG后18h颈椎脱臼处死小鼠，取输卵管冲卵。统计排卵数及卵母细胞的减数分裂情况发现，注射L－NAME后排卵数明显减少，卵母细胞减数分裂恢复异常，大部分排出的卵母细胞处于MI期；PB1的排出率降低，形态异常或退化死亡的卵母细胞数增加。结果直接证明：在体内，NO可促进小鼠卵母细胞的减数分裂的恢复；NO对于小鼠排卵具有重要的促进作用；NO对小鼠卵母细胞质的成熟有重要影响；抑制NO合成后，卵母细胞减数分裂发生异常。     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集和体外成熟

酶消化配合机械分离，采集１０日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞－颗粒细胞复合体（ＯＧＣｓ），以自制的胶原膜为底物，在ＭＥＭ培养液中培养１０ｄ，卵母细胞－颗粒细胞复合体由１１０．５±１８．６μｍ增长到１８４．４±６０．６μｍ，卵母细胞由５６．２５±２．０μｍ增长到８２．０±１０．５μｍ．３６．７％的ＯＧＣｓ具有５层以上颗粒细胞，其中９．１％放出第一极体。     

小鼠卵母细胞体外自发成熟与成熟抑制的研究

本实验建立了昆明白小鼠卵丘-卵母细胞复合体（CEO）、自然课卵（NO）和探卵（DO）3种细胞模型,并观察其在体外培养时卵母细胞的成熟情况。3种细胞模型在M199培养液中自发成熟时,其卵母细胞生发泡破裂（GVBD）主要发生在培养后1～5h。培养至24h,CEO、DO和NO的GVBD发生率分别为97．3％,87．3％和81．2％,CEO和NO间GVBD％差异显著（P＜0．05）。CEO中卵母细胞的第一极体（PB1）主要集中在8～14h排出（24h时,PBI％为86．6％）,DO主要在10～16h排出PBI（24h时,71．7％）,而NO在培养24h内很少有PB1排出（17．4％）。4mmol·L－1次黄嘌吟（HX）能显著抑制体外培养的CEO,NO和DO的GVBD发生和PBI的排出。当卵母细胞从有腔卵泡释放入不含HX的环境,然后再放入含HX的环境时,不可逆地启动了一部分卵母细胞减数分裂的恢复。说明：①印丘细胞对印母细胞GVBD的发生和PBI的排出有促进作用;②HX可以抑制卵母细胞体外成熟。     

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。     

褪黑素在高龄小鼠卵母细胞体外成熟中的促进作用

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以10～12月龄的ICR雌鼠为试验材料,分别将不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol·L-1)添加至体外成熟培养液中,通过判断卵母细胞的成熟率、受精率及囊胚率筛选出褪黑素最适宜的添加浓度,并通过线粒体分布检测、活性氧水平检测和细胞早期凋亡水平检测,分析褪...     

Forskolin和促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

利用已建立的猪卵母细胞体外无血清培养模型,研究了猪卵丘-卵母细胞复合体(CEO)在模拟生理环境的培养条件下Forskolin和促性腺激素对猪卵母细胞成熟的作用.在观察卵母细胞减数分裂恢复(GVBD)后的实验结果表明(1)cAMP产生的激动剂凡Forkolin(3μmol@L-1)处理CEO 20h可以显著协同HX抑制卵母细胞成熟;处理40h后,Forskolin(3μmol@L-1)的抑制作用被卵丘细胞分泌的某种物质克服;(2)Forskolin(3μmol L.)短期(30,60,120,240min)处理后可以诱导卵丘细胞分泌某种促进卵母细胞成熟的物质.(3)FSH(50～200U/L)能够诱导卵丘细胞分泌某种物质促进卵母细胞成熟;(4)50U/L的FSH预处理CEO结果与Forskolin结果相同,提示FSH诱导的卵母细胞成熟是通过cAMP依赖性的通路进行的.     

4种多糖对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为优化卵母细胞体外成熟培养液,研究白术多糖、黄芪多糖、灵芝多糖及香菇多糖对卵母细胞体外成熟的作用。利用废弃卵巢收集未成熟卵母细胞,在成熟培养液中添加低（0.01、0.05 mg/mL）、中（0.10 mg/mL）、高（0.15、0.20 mg/mL）5个浓度梯度的4种多糖溶液培养卵母细胞。结果显示,4种多糖成熟培养液均在低浓度添加时对卵母细胞成熟率有明显的促进作用,以白术多糖效果最好,卵母细胞成熟率与对照组相比提高了27.28%,高浓度的多糖培养液对卵母细胞均有不同程度的抑制作用,导致细胞皱缩甚至死亡。低浓度的多糖培养液能够促进卵母细胞的成熟,并能提高卵母细胞进一步发育的能力。     

次黄嘌呤对小鼠卵母细胞成熟的抑制作用

试验以小鼠为试验动物,研究了次黄嘌呤(HX)对小鼠卵母细胞减数分裂恢复抑制作用,以期更好地掌握小鼠卵母细胞的成熟机制,提高卵母细胞成熟效率。研究表明,①HX能有效地抑制卵母细胞发生生发泡成熟;②HX作为抑制剂对裸卵成熟的抑制作用是可逆的;③在生发泡抑制期间,卵母细胞胞质并没有成熟。结果显示,次黄嘌呤是一种有效的生发泡破裂抑制剂。     

Effects of DNA damage on oocyte meiotic maturation and early embryonic development

DNA damage is one of the most common threats to meiotic cells. It has the potential to induce infertility and genetic abnormalities that may be passed to the embryo. Here, we reviewed exogenous factors which could induce DNA damage. Specially, we addressed the different effects of DNA damage on mouse oocytes and embryonic development. Complex DNA damage, double-strand breaks, represents a more difficult repair process and involves various repair pathways. Understanding the mechanisms involved in DNA damage responses may improve therapeutic strategies for ovarian cancer and fertility preservation.     

不同月份猪卵母细胞体外成熟效果比较

【目的】分析卵母细胞发育与不同季节（月份）的相关性,为提高猪卵母细胞的体外成熟效率奠定基础。【方法】2012年2～6月从南宁市某屠宰场收集猪卵巢采集卵母细胞,经体外成熟（IVM）40-44h,然后随机挑出成熟后的卯母细胞进行地衣红染色,相差显微镜下观察、记录卵母细胞发育成熟的各个时期,并分析卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性。【结果】随着月份的增加,GV期和GVBD期卵母细胞所占比例整体上呈下降趋势,AT期所占比例呈上升趋势,除5月外,MII期所占比例整体上也呈上升趋势,6月MII期所占比例最高,为42．31％。2、3、4月的GVBD期所占比例显著高于6月所占比例（4．40％）（P〈0．05）。从卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性分析结果可知,GV期、GVBD期、MI期3个时期与温度变化呈负相关,与湿度变化呈正相关;而AT期、MII期与温度变化呈正相关,与湿度变化呈负相关。【结论】不同月份猪卵母细胞的ⅣM效果存在一定差异。在高湿低温月份,GV期和GVBD期的卵母细胞所占比例较大,MII期所占比例较小;而在低湿高温月份,Gv期和GVBD所占比例较小,MII期所占比例较大。     

N-乙酰半胱氨酸对玻璃化冻存小鼠GV期卵母细胞成熟和后续胚胎发育能力影响

冷冻保存后的GV期卵母细胞内大量积累ROS,影响胚胎发育。NAC作为一种抗氧化剂,可缓解氧应激造成的损伤。但NAC对冷冻GV期卵母细胞是否存在维持作用尚待研究。为探究NAC在冷冻、解冻后小鼠GV期卵母细胞发育中作用,检测冷冻保存后小鼠GV期卵母细胞在添加不同浓度NAC成熟培养液后成熟情况,观察其卵裂率与囊胚率、线粒体分布、ROS水平和受精后胚胎发育等。结果表明,添加1.5 mmol·L~(-1)NAC,冷冻保存后,小鼠GV期卵母细胞,线粒体排布均匀,卵母细胞比例显著提高,ROS水平降低。NAC可改善小鼠GV期卵母细胞经冷冻保存后复苏和体外成熟水平,提高其发育能力。     

乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响

探讨乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响.利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在不添加或添加不同浓度EDTA-Na的成熟培养液中体外成熟44～48 h,挑选核成熟卵母细胞进行孤雌激活,然后移到不添加或添加不同浓度EDTA-Na的胚胎培养液中进行体外培养168 h.结果表明:(1)胚胎培养液中添加适当浓度(25～100 μmol·L-1)EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用,在EDTA-Na浓度为100 μmol·L-1时,效果最佳;(2)成熟液和胚胎培养液中同时添加100 μmol·L-1EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用;(3)成熟液或/和胚胎培养液中添加不同浓度EDTANa对体外成熟培养后的猪核成熟卵母细胞及孤雌激活后的4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱都无显著影响.     

Roles of trifluoperazine and verapamil in the oocyte maturation and cumulus expansion of bovine cumulus－oocyte complexes

Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ　ａｎｄ　ｖｅｒａｐａｍｉｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｏｃｙｔｅ　ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｕｍｕｌｕｓ　ｅｘｐａｎｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ　ｃｏｍｐｌｅｘｅｓＲｏｌｅｓ...