苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

丝瓜原生质体培养再生愈伤组织

以丝瓜(Luf fa cylindrica)绿色子叶为材料,经酶解分离出大量生活的原生质体。用浅层液体静止培养方法,经1个月时间在修改的 MS 培养基上获得原生质体来源的愈伤组织。     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

人参原生质体培养再生愈伤组织

以人参(Panax ginseng C.A.Meyer)愈伤组织为材料,经酶解获得大量生活的原生质体,用浅层液体静止培养法获得细胞团,最后在琼脂培养基上获得原生质体来源的愈伤组织。分化工作尚无结果。试验强调了材料状况及培养条件的重要性,讨论了综合技术在原生质体培养中的意义。     

小麦愈伤组织状态调控与原生质体培养

 愈伤组织及其细胞的状态可通过调整培养基成分来调控。一般情况下，生长素、还原态氮、KCl促进愈伤组织生长，细胞分裂素、硝态氮抑制愈伤组织生长。绝大多数易培养基因型诱导的愈伤组织往往表现为质地紧硬或外软内硬，不适于进行悬浮培养和原生质体培养。利用不同水平的2，4-D、NH#++#-4、谷氨酰胺、水解酪蛋白、KCl、KT、6-BA、NO#+-#-3等进行处理，可使不适的愈伤组织变成适宜的类型，也可使那些生长过旺而不分化的愈伤组织分化出植株。用这些方法，从6个小麦基因型的原生质体中培养出了再生植株。     

罗布麻愈伤组织原生质体分离培养

[目的]探究罗布麻愈伤组织原生质体的分离培养及其影响因素,[方法]以罗布麻无菌苗子叶与下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究MS培养基附加不同激素组合对原生质体分离培养的影响以及愈伤组织继代培养、不同浓度纤维素酶与离析酶组合、DPD和MS等4种培养基对原生质体产量的影响。[结果]激素组合中以6-BA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L组合获得最高愈伤组织诱导率,达100％;用固体培养基进行继代培齐的愈伤组织的原生质体产量高于液体培养基,尤其以从继代1次愈伤组织收集的原生质体最为适宜;纤维素酶0．30％＋离析酶0．30％组合获得的原生质体产量最高,且细胞碎片较少;DPD培养基的原生质体较其他培养基的分裂得早,MS培养基的培幂效果最差,[结论]该研究为罗布麻遗传转化、突变体筛选及体细胞融合育种提供了技术途径：     

蒙古扁桃对根癌病的抗性评价

以实生苗新梢为试材,采用人工接种的方法研究了蒙古扁桃(Prunus mongolica)对发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的抗性.结果表明:接种后70 d,株平均瘤径范围在0～16.6 mm, 群体平均瘤径6.6 mm,蒙古扁桃对发根土壤杆菌中度感病,实生群体抗性分离宽泛,其中存在免疫、高抗、中抗、中度感病和高度感病5种类型,分别占8.60%、19.23%、14.42%、33.65%和24.04%.蒙古扁桃是发根土壤杆菌的优异抗原植物,是核果类果树抗根癌病砧木品种选育的珍贵种质资源,具有极为重要的开发价值.     

桃PpNCED家族成员鉴定与表达特性分析

为探明不同NCED基因家族成员在桃果实成熟软化期间的表达特性,在桃基因组中鉴定出7个NCED成员。利用qRT-PCR的方法,检测出NCED成员的表达存在组织特异性。在不同耐贮性桃品种中, PpNCED2、 PpNCED3、 PpNCED4、 PpNCED5均表现出随着果实的膨大和成熟呈上调表达趋势,且在果实成熟期达到表达高峰。此外,外源ABA处理后,在贮藏早期显著促进PpNCED家族成员的表达,而在贮藏中后期显著抑制其表达。以上试验结果表明, PpNCED2、 PpNCED3、 PpNCED4、 PpNCED5可能参与桃果实成熟软化的调控,但因不同桃品种存在差异。     

梅花染色体周年性制片技术

为实现梅花染色体制片的周年取材,并在此基础上探索适宜的制片方法,以梅花品种"粉瓣"为材料,系统研究未成熟种子、种子组培胚根、1a生实生苗顶端生长点、水培接穗茎尖和正常萌动枝芽等分生组织的制片情况,改良去壁低渗火焰干燥法。结果表明,各时期分生组织均适宜进行染色体制片,对材料进行低温固定过夜、酶解、染色体制片,能够有效拉伸染色体长度,获得具有良好分裂相的染色体图像。试验克服木本材料染色体制片的季节限制,简化操作步骤,提高制片效率及品质。     

甜樱桃(Prunus avium L.)LEAFY基因的克隆及表达模式分析

为探索LEAFY基因在甜樱桃花芽分化过程中的表达及作用,以甜樱桃(Prunus avium)‘红蜜'(Hongmi)为试材,利用同源克隆和RACE方法克隆甜樱桃中LEAFY同源基因cDNA全序列,对其序列进行分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对该基因在花芽分化过程中的表达量进行鉴定。结果显示:在甜樱桃中具有3中不同长度类型,分别为1 532、1 498和1 410bp,主要由3′UTR区长度不同所导致,开放阅读框长1 233bp,编码410个氨基酸,推测蛋白分子量约为45.6ku,等电点约为6.88。结构预测NCBI序列比对发现其氨基酸序列与其他植物中同源基因相似性均在70%以上,故命名为PaLEAFY。qRT-PCR分析发现,在果实成熟至成熟后33d,PaLEAFY在花芽中的表达量由高变低,果实成熟后45d,PaLEAFY表达量开始急剧升高并维持至69d,69d之后表达量再次升高,并于果实成熟后99d达到最高。此外,PaLEAFY在甜樱桃花的柱头中的表达量最高,其次是花瓣、雄蕊和花萼,在甜樱桃的茎和叶中的表达量非常低。说明PaLEAFY参与甜樱桃花芽分化及花发育过程。     

陕西7个毛樱桃自然居群遗传多样性的SSR评价

【目的】研究陕西野生毛樱桃自然居群的遗传多样性,为科学保存和利用陕西野生毛樱桃资源提供理论依据。【方法】以陕西野生毛樱桃的7个自然居群140份样本为材料,用SSR分子标记技术研究其遗传多样性和遗传结构。【结果】用10对SSR引物从7个毛樱桃自然居群中共检测出92个等位基因,各引物扩增的条带在6~14个。居群多态位点比率(PPL)为100%,Shannon’s信息指数(I)平均值为1.280,Nei’s基因多样性指数(H)平均值为0.655,可观察杂合度(Ho)平均值为0.584,期望杂合度(He)平均值为0.672,表明陕西7个毛樱桃自然居群具有较高的遗传多样性水平。居群的基因分化系数Fst=0.181,表明陕西野生毛樱桃的遗传变异主要存在于居群(81.9%)内,遗传分化居群内高于居群间,基于Fst测得基因流Nm为1.128。利用UPGMA对7个毛樱桃自然野生居群进行聚类,可以分为3类:麟游(LY)、绣房(XF)、华阴(HY)、哭泉(KQ)归为第1类,小峪(XY)为第2类,鹦鸽(YG)和青化(QH)归为第3类。【结论】李属植物SSR引物在毛樱桃上能够有效的转移利用,陕西毛樱桃自然居群具有较高的遗传多样性水平,其中华阴居群遗传多样性水平最高,遗传分化居群内高于居群间,7个居群可聚为3大类。     

山桃组培苗无糖生根培养研究

针对桃组培苗生根率低，侧根少，质地脆，移栽成活率低的情况，研究采用无糖生根技术，以山桃(Prunus davidiana)组培苗为实验材料，探讨了生长素、蛭石含水量对山桃根系发育的影响，并观察了不同时期山桃根系和地上部的生长发育情况。结果表明：(1)生长素为1.0 mg/L IBA时，山桃生根情况最好。(2)适宜山桃无糖生根的蛭石含水量为65%～70%。(3)山桃组培苗培养到第10天可以观察到明显的根尖，第25天时生根率达到100%,第35天时最适合移栽。无糖生根能明显改善山桃组培苗的生根情况，生根率和平均生根数显著提高，苗子生长健壮，根系发达，操作简单，适宜在生产中推广使用。     

甜樱桃栽培种指纹图谱构建及遗传多样性分析

为了对甜樱桃品种进行分子鉴别及分析不同品种间的亲缘关系,以叶片直接进行PCR扩增,采用EST-SSR分子标记技术构建生产上常用的40个甜樱桃栽培品种的数字指纹图谱和模式指纹图谱数据库(Cluster Project)并进行遗传多样性分析。采用24对甜樱桃核心引物对所有品种基因组进行扩增,共检测到129个等位位点,包括118个多态性位点,多态性比率为91.2%。每对引物扩增出的等位位点数3~10个,每对引物平均扩增5.38个基因型,扩增条带大小介于100~500bp,多态信息含量(PIC)为0.654,基因流(Nm)为1.402,平均杂合率为0.495。8对引物,即PA17、PA32、PA51、PA54、PA73、PA99、PA101和PA202可作为指纹图谱构建的首选引物,利用其中的PA17、PA51、PA99、PA101和PA202以引物组合方式构建指纹图谱可区分40个品种;聚类分析表明在遗传距离0.71处40个品种被分为5类,聚类结果与品种的特性及成熟期具有较高的一致性。     

蒙古扁桃菌根苗对干旱胁迫的分子响应机制

【目的】探明菌根对蒙古扁桃(Prunus mongolica)抗旱能力影响的分子机制。【方法】对生长45 d的菌根化蒙古扁桃与非菌根化蒙古扁桃进行非干旱胁迫和干旱胁迫处理,非干旱胁迫蒙古扁桃在处理期间每天补充水分;干旱胁迫处理蒙古扁桃从培育45 d开始停止浇水,模拟自然干旱胁迫,持续时间15 d。试验结束后,每个处理选12株进行叶长、叶宽、叶片脱落数及生物量的测定和统计;另选12株采用高通量测序方法进行转录组测序,并对其差异表达转录本进行GO和KEGG富集分析。【结果】干旱胁迫条件下,菌根化苗木底部的一些叶片会脱落,而非菌根化苗木叶片几乎不脱落;同时,菌根化苗木的地下生物量显著高于非菌根化苗木。通过高通量测序发现,4个处理文库共获得43 641个转录本;在P0.001时,菌根化蒙古扁桃干旱胁迫(MD)与非干旱胁迫(MCK)处理相比,存在820个差异表达转录本;干旱胁迫条件下,菌根化苗木(MD)与非菌根化苗木(ND)相比,存在3 751个差异表达转录本;非干旱胁迫条件下,菌根化苗木(MCK)与非菌根化苗木(NCK)相比,存在2 315个差异表达转录本。GO富集分析发现,MD与ND处理文库间的细胞组分、分子功能和生化过程3类主要功能分类的差异表达转录本,较MD与MCK处理文库间均增加;MCK与NCK处理文库间差异转录本的分类结果同MD与ND处理文库间基本相同,只是在分子功能分类中多出通道调节活性这一功能。经KEGG富集分析发现,天线蛋白、类胡萝卜素生物合成途径、激素信号传导途径、N代谢途径、过氧化物酶体、植物昼夜节律和MAPK信号途径等与干旱胁迫存在密切联系。实时荧光定量PCR表明转录组测序数据可靠。【结论】菌根化处理可以提高蒙古扁桃的抗旱能力。     

植物生长调节剂对榆叶梅生长及叶绿素荧光参数的调控效应

【目的】筛选对榆叶梅(Prunus triloba)幼苗生长发育起促进作用的植物生长调节剂种类及质量浓度,为榆叶梅的壮苗提供依据。【方法】以1年生榆叶梅幼苗为试验材料,采用盆栽试验,蘸根施用多效唑(PP333)、生根粉(GGR6)2种药剂,质量浓度均设50,100,150,200mg/L 4个梯度,分别记为P50、P100、P150、P200和G50、G100、G150、G200处理,以清水处理为对照(CK),测定不同处理榆叶梅生长指标(株高、冠幅、基径)和生理生化指标(叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)、叶绿素总含量(Chl(a+b))、电子传递效率(ETR)、实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)、光化学猝灭(qP)、非光化学猝灭(qN)、最大光化学效率(Fv/Fm)),研究2种药剂对盆栽榆叶梅生长发育的影响,对所测的指标进行相关性分析,并利用隶属函数对不同处理榆叶梅测定指标进行综合评价。【结果】PP333抑制了榆叶梅幼苗株高的生长,当其质量浓度为150mg/L时,对榆叶梅幼苗株高的抑制程度最大;GGR6促进了榆叶梅幼苗株高的生长,当其质量浓度为100mg/L时,对榆叶梅幼苗株高的促进程度较大。PP333和GGR6均能明显促进榆叶梅幼苗基径增粗及冠幅的增加。随着PP333和GGR6质量浓度的增加,榆叶梅幼苗的叶绿素含量及叶绿素荧光参数ETR、ΦPSⅡ、qP、Fv/Fm均呈现先增大后减小的趋势,且PP333和GGR6质量浓度分别为150和100mg/L时达到峰值,均与对照(CK)有显著差异(P0.05);qN呈现先减小后增大的趋势。相关分析表明,Chl a、Chl b、Chl(a+b)与叶绿素荧光参数ETR、ΦPSⅡ、qP、Fv/Fm呈现极显著正相关关系(P0.01),与qN呈现极显著负相关关系(P0.01)。各处理隶属函数平均值大小顺序为G100 P150 P200 P100G50G200G150P50CK。【结论】榆叶梅最佳促进剂为GGR6,且当其质量浓度为100mg/L时,对榆叶梅幼苗生长发育的综合促进作用最佳。     

新疆野生樱桃李PsoRPM2与PsoLFY互作调控植株开花的分子机制

为明确新疆野生樱桃李PsoRPM2基因引起植株的早开花现象，本研究通过形态学、转基因以及酵母双杂等试验对PsoRPM2基因进行了分析。结果显示:新疆野生樱桃李极早花、早花、中花、晚花和极晚花的比率分别为11%、24%、44%、18%和3%。早花类型的花芽分化明显快于晚花类型，早花花芽中的PsoLFY和PsoFT基因表达高于晚花，而PsoFLC基因则在晚花中表达较高。转PsoRPM2基因烟草表现为早花，并且NtLFY基因表达明显升高。在新疆野生樱桃李早花花芽中，PsoRPM2基因表达高于晚花，同一时期的PsoLFY基因表达也较高。酵母双杂试验显示，PsoRPM2与PsoLFY可以互作。综上，新疆野生樱桃李之所以早花是通过PsoRPM2与PsoLFY互作，提高花芽中PsoLFY和PsoFT基因表达，从而加快花芽分化进程，导致植株提前开花。