单克隆抗体在球虫研究中的应用

单克隆抗体在球虫研究中是一种十分重要的工具,已广泛应用于球虫新基因与新抗原的筛选、球虫发育过程及致病机理的探索、球虫病的诊断和防治等方面的研究.本文将就单克隆抗体在球虫研究中的应用作一综述.     

母源免疫对艾美尔球虫交叉保护性的研究

母源免疫对艾美尔球虫交叉保护性的研究顾有方摘译卞正勤校１前言鸡艾美尔球虫感染诱发的免疫力特异性较高，因为对一种艾美尔球虫有完全免疫力的鸡对另一种则十分易感，但是，经母体产生的交叉保护性还未见有研究，这种研究似乎是有价值的，其原因有二：第一，现已证实抗...     

广东省江门地区肉鸡柔嫩艾美尔球虫的抗药性测定

从广东省江门地区肉鸡场分离到的2个柔嫩艾美尔球虫（Eimeria tenella)野外强毒株JM1，JM2，经艾维因鸡分别进行了10种抗球虫药的敏感性试验，根据血粪出现情况和抗球虫指数指标综合判定，结果表明，JM1和JM2对马杜霉素，盐霉素，地克侏利，拉沙洛菌素，痢特灵，氯吡醇，氯苯胍强抗药，对球净，五球宁均表现敏感或中度敏感，说明在广东江门一些养鸡较多地区，柔嫩艾美尔球虫对现有多数抗球虫药产生强抗药性，要防治好球虫病，必须进行田间球虫抗药性的检测，根据不同季节球虫病发生情况，采用慎重，细致的轮换或穿梭用药方案。     

柔嫩艾美尔球虫早熟减毒株饮水免疫方法的研究

柔嫩蒋美尔球虫早熟减毒株（ＪＮ９２０７Ｐ株）,通过用吸管经口接种（经口组）和悬浮于０．２５％的羧甲基纤维素水溶液中饮水接种（饮水组）两种免疫方法的免疫效果对比,证明该悬浮剂不影响球虫在鸡体内繁殖,也证明经口组和饮水组的免疫效果相当,并与５ｍｇ／ｋｇ饲料中马杜拉霉素的治疗效果基本相同。     

斯氏艾美尔球虫肌动蛋白解聚因子在HeLa细胞中的表达

为真核表达斯氏艾美尔球虫(Eimeria stiedae)肌动蛋白解聚因子(ADF)基因,本研究采用RT-PCR技术扩增ADF基因,构建pVAX- 1-ADF真核重组质粒,并转染HeLa细胞.采用RT-PCR方法检测ADF mRNA转录水平、western blot检测ADF蛋白表达水平.琼脂糖凝胶电泳结果表明PCR扩增出一条大小为350 bp的特异性片段,与预期值相符.Western blot检测显示,转染pVAX- 1-ADF的HeLa细胞在大约13ku处出现特异性表达条带,与预期值相符.本研究构建了E.stiedae ADF基因真核表达质粒pVAX- 1-ADF,并且在体外真核细胞中表达,为进一步寻找防治E.stiedae的疫苗候选基因奠定了基础.     

巨型艾美球虫在免疫鸡体内发育的组织学观察

巨型艾美球虫在非免疫鸡体内有３代裂殖生殖、在其第１代和第２代裂殖生殖阶段,虫体寄主的空肠组织发生粘液变性,在裂殖生殖后期和配子生殖阶段,空肠绒毛组织变化明显,包括粘膜上皮细胞大量脱落,固有层淋巴细胞浸润等,有时出现大量上皮间淋巴细胞。试验鸡经巨型艾美球虫攻击后,在其子孢子侵入,移行阶段就受到抑制。随着时间推移,第１代,第２代和第３代殖生殖受到日益加重的抑制,最终使虫体没有进入到有性生殖阶段。     

球虫疫苗应用在蛋鸡中的免疫效果观察

鸡球虫病是由艾美耳属的单细胞寄生原虫引起的严重危害养鸡业发展的重要疾病之一,每年因为鸡球虫病造成的直接或间接经济损失非常巨大。长期以来,控制鸡球虫病的主要方法仍然是依靠在饲料中添加各种抗球虫药。然而,基于目前药物防制中存在成本高、耐药性及危害身体健康等问题,疫苗防制鸡球虫病日益引起人们的关注。     

肠艾美尔球虫纯种分离及18S rDNA部分序列测定

采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的肠艾美尔球虫18SrDNA序列,设计一对引物,建立PCR方法对其基因片段扩增并测序、比对。结果成功分离肠艾美尔球虫,PCR扩增出清晰条带,大小为528bp,最低能检出27个孢子化卵囊。该序列测定结果与Genebank发表的肠艾美尔球虫18SrDNA比对,相似性达98.5%。     

基因免疫制备牛分枝杆菌MPB64抗原单克隆抗体

为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选出针对牛分枝杆菌分泌蛋白MPB64的单克隆抗体一株,并制备了腹水,经鉴定腹水效价达到1∶10240,采用硫酸铵沉淀法纯化腹水,纯化抗体效价为1∶8000,为今后研制分枝杆菌鉴定技术奠定基础。     

脆弱艾美尔球虫在鸡胚培养中内生性发育史的研究

脆弱艾美尔球虫在鸡胚培养中,可以像在鸡的肠道内一样地完成全部内生性发育史。用体外脱囊的球虫子孢子接种于9～11仅龄鸡胚的尿囊胜中。在40℃～41℃下培养,可在绒毛尿囊膜细胞内观察到无性世代和有性世代两个发育阶段。出现第一、二、三代裂殖体,以及大配子体、小配子体和卵囊。成熟的第一代裂殖体在绒毛尿囊膜细胞内最早出现于感染后48小时,第二代为94小时,第三代为132小时。大配子体和小配子体、卵囊分别于感染后132和144小时形成,均寄生在绒毛尿囊膜表层。各期虫体的发生时间与鸡体内基本相似,从子孢子开始到产生次代卵囊,完成全部内生性发育需要144小时。     

柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用

为了制备柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella lactate dehydrogenase,Et LDH)单克隆抗体,用大肠杆菌表达的重组Et LDH可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,经5次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,经3次亚克隆后获得2株能稳定分泌Et LDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7和2H4,抗体亚类鉴定均为Ig G1,腹水效价分别为1:8000和1:64 000。Western blot结果显示2F7抗体能识别柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中大小约为35 k Da的天然蛋白。利用该单抗对Et LDH在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的分布进行了定位,结果显示该蛋白主要分布于裂殖子的细胞质,表明成功地制备了Et LDH单克隆抗体,为深入研究Et LDH的功能和特性奠定了基础。     

葡萄原花青素对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加葡萄原花青素(GPC)对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响。选用350只1日龄科宝-500(Cobb-500)健康肉仔鸡(公雏),随机分为5个组,每组7个重复,每个重复10只鸡。空白对照组和负对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮基础上添加7.5、15.0和30.0 mg/kg GPC的试验饲粮。14日龄时,负对照组和3个试验组每只肉仔鸡经口腔攻毒5×104个柔嫩艾美尔球虫卵囊,空白对照组每只肉仔鸡灌服同体积的生理盐水。试验期42 d,分为前期(1~21日龄)和后期(22~42日龄)2个阶段。结果表明:1)与空白对照组相比,负对照组肉仔鸡试验各阶段的平均日增重(ADG)均显著降低(P0.05),22~42日龄和1~42日龄时的料重比(F/G)显著增加(P0.05);饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC显著改善了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的22~42日龄和1~42日龄时ADG的降低和F/G的增加(P0.05);而饲粮中添加30.0 mg/kg GPC显著降低了22~42日龄时的ADG、平均日采食量(ADFI)和1~42日龄时的ADG(P0.05)。2)与负对照组相比,饲粮中添加GPC显著降低了肉仔鸡的盲肠病变评分、血便堆数和球虫卵囊排出数(P0.05)。3)饲粮中添加GPC显著抑制了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的肉仔鸡脾脏指数增加(P0.05);柔嫩艾美尔球虫攻毒引起T淋巴细胞转化率显著增加(P0.05),饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使T淋巴细胞转化率进一步增加(P0.05);饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC可使B淋巴细胞转化率增加(P0.05);柔嫩艾美尔球虫攻毒引起外周血γδT细胞比例显著增加(P0.05),饲粮中添加15.0 mg/kg GPC使外周血γδT细胞比例进一步增加(P0.05)。4)与空白对照组相比,柔嫩艾美尔球虫攻毒显著增加了回肠上皮内淋巴细胞(IEL)数量和盲肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)水平(P0.05),饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使IEL数量和s Ig A水平进一步增加(P0.05)。综上所述,饲粮中添加GPC可提高感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡的免疫功能,缓解柔嫩艾美尔球虫感染造成的生长抑制,其中7.5和15.0 mg/kg GPC的抗球虫效果较好。     

巨型艾美球虫柔嫩艾美球虫二价虫苗的免疫保护力测定

鸡球虫病是一种世界性、广泛分布、严重危害养鸡生产的主要鸡病之一，各种龄期的鸡均易感，发病后可引起鸡只大批死亡，更重要的是影响增重和饲料转化率，造成巨大经济损失。控制该病的主要措施是采用药物防治和疫苗接种，但因为抗球虫药对球虫容易产生抗药性和在肉品中残留而对人体健康造成危害等问题，用疫苗防治鸡球虫病越来越受到人们的重视。寄生在鸡的艾美属球虫有７个种，其中以巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫最为常见，致病力也较强。因此，华南农业大学兽医学院寄生虫教研室林辉环教授、翁亚彪副教授等成功地研制了这两种球虫的早熟弱…