对牛冷冻精液微生物检测培养基种类培养时间的探讨及控制细菌数的措施

牛冷冻精液在采集、稀释、分装及冷冻等生产过程中都有可能被污染，并且有大量资料表明许多细菌性及病毒性传染病都可能通过精液而传播，因此，对牛冷冻精液的微生物检查是冻精质量检测的重要指标之一。我国《牛冷冻精液国家标准》中明确规定：牛冷冻精液解冻后的精液，无...     

控制牛冷冻精液细菌数的几项措施

牛冷冻精液在采集、稀释等生产过程中都有可能被污染,并且有大量资料表明,许多细菌性及病毒性传染病都可能通过精液而传播。被微生物污染的冷冻精液,精子活力降低,生存时间缩短,输精后容易造成早期胚胎死亡而降低受胎率。《牛冷冻精液国家标准》(GB4143-84)规定:牛冷冻精液解冻     

降低牛细管冻精细菌数的技术措施

牛冻精中细菌数超标,不仅使冻精质量下降,影响母牛受胎效果,而且容易引发母牛生殖疾病,造成屡配不孕,影响母牛繁殖生产和身体健康.在牛冻精生产过程中,由于精液被灌装到无菌的塑料细管内并且被密封,避免了精液的污染机会.精液巾细菌数偏高,往往是精液在灌装到细管前受到污染的.因此,加强精液的采集和精液在灌装前的处理这两个环节的工作尤为重要.笔者从事牛冷冻精液生产十余年,通过对冻精生产这两个环节的不断改进,取得了理想的效果,细菌数明显降低,80%的冻精细菌数控制在每剂量在50个以下.现将采取的措施加以总结,供同行参考.     

牛精液中的病毒

牛精液中的病毒,现已发现的主要为牛疮疹病毒1型、牛白血病病毒、蓝舌病病毒、牛病毒性下痢病毒与口蹄疫病毒等。精液中病毒来源:1) 外源的,如肠病毒在采集时粪便的污染。2) 内源的,由于全身或局部感染的病毒,病毒从睾丸、副睾或包皮排泄。现介绍其传播方式、致病机理、实验室诊断、以及人工授精工作中防止传播的方法等。     

牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立

为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法.该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍～2000倍,比常规RT-PCR方法高10倍.对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品.对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据.     

保存条件和培养技术对牛精液中传染性鼻气管炎病毒分离效果的影响

传染性鼻气管炎病毒(牛疱疹病素1型—BHVI)可引起牛的呼吸系统和生殖系统疾病。其传染途径之一是通过自正处于初次或重复感染的公牛采集的含病毒精液传,染人工授精(AI)更增加了传播的危险,现已证明,精溶的冷冻保存还有利于病毒的存活。本研究的目的是估阶一些实验室检查方法,比较了孔一次性培养板培养方法与传统的单个雷通(Leighton)试管培养法的检出率,并对不同保存条件下精液中BHVI的存活情况进行了研究。用伪阴道从同一公牛采精,用乳糖蛋     

家畜精液中病毒的传播和检疫——(一)口蹄疫病毒和兰舌病毒

好些病畜可将病毒随精液排出体外。污染精液的各种病毒可以随人工受精将临床疫病传给受体母畜,致使精液品质降低,影响公畜及母畜的繁殖力,影响胚胎的发育,最重要的是经由精液传播病毒及其感染。国外已报告在家畜精液中发现的病毒有口蹄疫、兰舌病、牛白血病、传染性牛鼻气管炎、牛病毒性腹泻一粘膜病、暂时热(牛流行热)、结节性皮炎、猪水泡病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、日本乙型脑炎、慢性猪瘟、非洲猪瘟,还报告从精液中分离出牛及猪肠病毒、副痘病毒和一些尚待标记的病毒。它们的存在是经由动物感染实验、细胞培养技术以及不同的血清学检测而得到证实。     

储存条件及细胞培养技术对牛精液中传染性牛鼻气管炎病毒分离的影响

传染性牛鼻气管炎病毒(牛疱疹病毒Ⅰ型—简称BHV1)在牛可引起呼吸道和生殖道疾病。通过污染精液传播病毒是本病的传染方式之一。感染的公牛能随时通过精液排泄病毒并可能终生潜伏感染。人工授精技术的运用,增加了本病传播的危险。现已证实精液的冷冻保存有利于病毒的存活。     

奶牛牛病毒性腹泻病毒与冠状病毒混合感染的PCR诊断

为了对河北省石家庄市某奶牛场发病及死亡奶牛进行确诊,试验对腹泻奶牛的粪样进行了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)PCR检测,同时对病死奶牛脏器样品进行BVDV、BCoV、传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)及牛细小病毒(BPV)的PCR检测。试验结果显示,6份粪样BVDV阳性率为50%,BCoV阳性率为33.3%,同一份粪样中可同时检测出BVDV和BCoV两种病毒。小肠、肺脏和肝脏中均检出BVDV和BCoV,未检测出IBRV、BRV和BPV。结果表明,BVDV和BCoV为阳性,IBRV、BRV和BPV结果为阴性。最后确诊为BVDV和BCoV的单一感染和混合感染。     

西门塔尔牛细管、颗粒冷冻精液输精效果试验

前言为进一步提高受配母牛受胎率,克服种牛颗粒冷冻精液(简称颗粒冻精)活力差,解冻后不便运输,易污染等缺点,在农业部“丰收计划”——“良种肉牛及饲养配套技术”项目实施中,我们进行了西门塔尔牛细管精液(简称细管冻精)对母牛配种准胎效果试验。     

从冷冻精液中分离牛鼻气管炎病毒(IBRV)

美国顾问阳早夫妇赠送我国的1265支冷冻精液,其中,78H5459号牛640支,70H0162号牛500支,71H00626号牛100支,2H28号牛10支,498号牛10支,P-186号牛5支。置-196℃液氮罐中存放于上海动植物检疫所。这批冷冻精液的样品于1981年11月14日运到我所,做病毒分离工作。从70H0162号牛精液样品5支的一支中分离出一株病毒,经血清学鉴定,确定为IBRV。一、材料、方法及结果样品的采集,以随机抽样法从78H5459抽冷冻精液管6支,70H0162抽样5支,71H00626抽样2支(其中一支封口脱落,作废)。置于液氮罐中从上海运送我所。     

牛精液中污染的病毒

<正> 前言 人工授精技术自30年代以来被广泛利用于养牛业。人工授精除提高受精率外,还使我们能够跨地区、跨国界地进行优良品种的选育。但是,人工授精可能由于精液污染病原因子而传播牛的疾病。包括细菌、真菌、原虫、病毒病。精液中病毒的来源有外源性,如肠道病毒,为采集精液时粪便污染造成的。有内源性的,是由于全身性或局部的病毒感染或通过睾丸、附睾或包皮分泌物排泄病毒造成的。精液中污染细菌引起的性病传播可通过对精液用抗菌素处理来控制,但病毒病不行。多年来,人工授精站通过建立无特殊病毒病原的种牛来控制精液传播病毒病。本文将介绍几种常见的污染精液的病毒的实验室诊断方法及控制手段。     

影响公牛精子形态异常的原因分析

本研究对2009-2013年的7964头牛冷冻精液样品进行了精子形态异常(畸形)检测,样品来自国内各牛冷冻精液生产企业,涉及品种有奶、肉牛类(包括乳肉兼用、黄牛、牦牛等)和水牛。7964头/份样品的精子畸形率平均为15.3±2.9%。年度间比较,畸形率有波动,总体呈上升趋势。影响精子畸形率的因素包括公牛的生理、营养、气候、采精频率、采精技术、精液处理和某些应激因素等。     

季节对种公牛精液品质影响

十多年来,许多研究工作者在提高冻精产品质量上进行研究,特别在冻精稀释保护剂、防冻剂、pH、渗透压、冷冻温度、平衡时间、解冻温度及时间等工艺方面的研究上,做了大量的工作,报道的资料很多;但季节环境对种公牛精液品质影响方面的研究工作较少,报道的也少。我们在长期的牛冷冻精液生产及产品检测中发现,季节对种公牛精液品质的影响很大,特别是对商品化生产牛冻精站(场)来说,直接影响冻精产品质量及经济     

影响大额牛精液质量主要因素的研究

[目的]大额牛为我国地方畜禽遗传资源濒危品种,为了加强大额牛的保种力度,提高保种效率;本研究对影响大额牛精液质量的主要因素如采精方法、季节、个体遗传等进行了比较研究。[方法]大额牛用电刺激法和假阴道法采精,按照牛冷冻精液国家标准GB4143-2008的方法测定大额牛的采精量,精子密度,原精活力和冷冻精液解冻活力,用程控冷冻仪冷冻大额牛精液。[结果]大额牛冷冻精液解冻效果较好,采精量为5.009±2.239m}(n=226),原精活力为54.184±15.760%(n=223),精子密度为7.207±6.387亿/mL(n=225),解冻活力为36.007±2.092%(n=136)。精子冷冻解冻复苏率达50%以上。大额牛电刺激采精成功率高。[结论]迁地保护条件下大额牛电刺激法采精获得很好效果,也能用假阴道法采精,精液冷冻解冻效果较好,有利于大额牛遗传物质的保存。     

冷冻精液贮存容器中液氮的污染

<正> 目前冷冻精液的制做和保存主要使用的是液氮(-196℃),但是在精液长期冷冻贮存过程中,其液氮可能要受到不同程度的污染,为了使冷冻精液尽量减少在贮存期污染,首先需要了解目前生产上使用液氮客器罐中液氮受到污染的程度,因此进行了抽样检查。材料与方法液氮鲜样:为本站液氮机生产,取样时现产现采。液氮罐中样品:南京部分生产场及外地来站购买冻精所带液氮罐、车站部分精液贮存罐,随机取样.液氮是以空气为原料经液氮机制冷成液空再经分离成液氮(此时温度已达-196℃)当与空温接触,因温差关系,又可开始气化,其理     

鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立

为建立鸡马立克病(MD)活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的间接免疫荧光检测方法,本研究通过向MD活疫苗中添加不同剂量的REV,用拟定的方法对样品检测REV。结果表明,Ⅰ型MD活疫苗、火鸡疱疹病毒活疫苗(Fc-126株)和MD二价活疫苗(HVT+CVI988株)中污染REV的最低检出量分别为每500羽份疫苗中污染5TCID50、10TCID50和15TCID50的REV。应用建立的方法对国内10家企业生产的43批MD活疫苗进行了检验,结果显示,2个企业生产的4批疫苗REV检测阳性。随机选取了5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染检验结果的符合率为100%。因此,本研究建立的IFA法可替代鸡检查法,用于疫苗中REV污染的检验。     

山东种公猪精液携带主要病原的检测

采用PCR技术,对2007年-2009年山东部分地区的38个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品727份进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细小病毒(PPV)5种主要病原的检测。结果检出CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2和PPV的阳性数和阳性率分别为18份(2.48%)、27份(3.71%)、7份(0.96%)、33份(4.54%)、9份(1.24%),有7份样品为2种以上病原混合感染,其中以PRRSV+PCV-2混合感染最多。结果表明精液传播病毒仍是当前母猪繁殖障碍的重要原因之一,应重点加强对种公猪的疫病净化和公猪精液管理,从源头控制传染源。     

改进种公牛采精操作的几项措施

日前牛的人工授精所用的都是冷冻精液。在这项精液低温加工生产中,牛的精液采集操作是此项生产的第一环节。要提高冷冻精液产品的质量必须重视采精工作中每一细节的操作。在这方面,就我们的具体做法,谈以下几点措施,供大家参考。一、减少细菌污染,保持精液洁净由于公牛阴筒、阴毛中沾有粪便及污垢,在公牛性兴奋时,阴茎内排出的副性腺液与阴筒、阴毛上的粪便、污垢混合后     

牛人工授精的优势与缺点分析

正动物人工授精是利用人工的方法对公牛的精液进行采集,检查并且稀释精液,将精液通过输精器输入到发情母牛的生殖道中使卵子受精,以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。牛的人工授精开始于20世纪初,1930年代国际上开始使用牛(鲜精)人工授精技术。1950年代初,英国人Smith和Polge成功研制出牛冷冻精液,1960年代后被广泛采用。我国北京双桥农场1952年奶牛采用鲜精人工授精,1965年