SSR分子标记技术在杂交水稻种子纯度鉴定中的应用

SSR标记由于具有数量丰富、多态性高、遗传上呈共显性、实验操作简单、结果稳定可靠、引物序列易交流等优点，已成为杂交水稻种子纯度鉴定的一种理想分子标记。概述了SSR分子标记技术应用于杂交水稻种子纯度鉴定的原理、技术要点及其研究进展，并就该技术产业化应重点考虑的问题进行了讨论。     

鉴定玉米杂交种郑单958种子纯度的SSR标记筛选

利用SSR标记技术,选用50对SSR引物以玉米杂交种郑单958及其父母本DNA为材料,筛选出了4对在杂交种中呈现双亲互补带型的引物。研究表明：这4对引物均可用于玉米杂交种郑单958种子的纯度鉴定。     

利用SSR标记鉴定杂交水稻种子纯度

用SSR标记和田间观察鉴定了5份杂交稻材料的纯度,其中1份材料采用6个标记和田间观察鉴定同样的158个单株,4份材料分别选用3个标记鉴定200个单株、采用田间观察鉴定另外800个单株。标记检测和田间观察鉴定结果高度吻合,但不同标记上存在差异,选用3个标记可以较好地平衡效率和可靠性。     

我国主要杂交水稻组合及其亲本SSR标记和纯度鉴定

选用分布于水稻12条染色体上的26对SSR引物对我国9个主要的杂交水稻组合及其亲本进行了SSR标记分析,21对多态性引物共扩增出62条条带,平均2.95条,能够有效地区分所有恢复系和大部分不育系。杂交种条带均为父母本的互补型,很适合做杂交种纯度鉴定。用引物RM17对杂交稻组合汕优63和两优培九进行了100粒单种子SSR鉴定,所测纯度分别为96.0%和98.0%,与田间纯度96.2%和97.7%非常接近,显示出SSR技术在品种认证和纯度鉴定中有广阔的前景。     

利用微卫星DNA标记进行杂交水稻种子纯度鉴定的研究

利用微卫星分子标记，对湖南目前推广的6个杂交稻组合及其亲本之间的多态性进行了研究。在已筛选的178对引物中，有52对能在一个或多个组合中显示稳定的多态性，杂种表现为父母本互补带型。不同组合间多态性的比例具有差异。用表现多态性的两对引物分别对掺假的威优46和金优207进行纯度鉴定，都能有效地将掺入组合中的假种子区分开。该方法具有准确可靠、多态性高、稳定性好、易于操作的特点。     

利用SSR标记技术检测玉米杂交种纯度

对玉米子粒DNA提取、SSR扩增片段检测方法等进行了研究,并以4个利用常规种子贮藏蛋白质电泳技术难以鉴定纯度的玉米杂交种及相应自交系和9对玉米SSR位点引物为材料,分别筛选出适合这些不同杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,建立了一套利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程.该程序包括从粉碎干种子提取DNA和利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SSR扩增片段,对仪器设备要求较低、简单、快速,易于推广。     

2017―2018年棉花推广品种SSR标记纯度检测简报

2017年、2018年共接受16家棉种企业和科研单位的委托,承担了棉种纯度检测工作,共接受杂交棉样品252份。检测结果,简单重复序列（Simple sequence repeat,SSR）标记纯度在83.3%～100.0%,杂交种纯度较高。2013―2018年的检测结果对比表明,杂交种的纯度不断提高。同时接受了杂交制种亲本182份,纯度普遍较高,亲本的高纯度是保证杂交种质量的关键。利用SSR标记开展分子检测工作以来,生产上棉种质量有明显的提高。     

利用SSR标记检测棉铃种仁DNA鉴定杂交种纯度

利用棉铃种皮DNA和种仁DNA的差异,通过Simple sequence repeats (SSR)分子鉴定技术在棉花制种后期快速检测制种质量。筛选杂交种亲本间的多态性SSR引物,应用多态性引物鉴定棉铃种仁的指纹图谱,指纹图谱与种皮一致,表明该棉铃为自交铃;种仁图谱为共显性谱带,则该棉铃为杂交铃,计算杂交铃的比例得出杂交种的制种纯度。F₂的图谱分离验证了遗传的分离规律,F₂的个体间具有不同的指纹图谱,育种过程中的杂交后代的分子检测能加速育种进程。     

利用SSR标记鉴定两系杂交稻种子纯度

利用SSR标记RM21和田间种植调查鉴定了30份两优287杂交稻材料的纯度．并利用SSR标记1LM21对田间调查鉴定中的全部10种杂株类型的特异性进行了验证。标记检测和田间调查鉴定结果基本吻合．而且标记检测的样本数量越大,其与田间调查的结果吻合度越高．对企业两系种子的销售具有一定的指导意义。同时利用SSR标记RM21对所有杂株类型的进一步研究发现．所选择的SSR分子标记能有效地区分其中6种杂株类型．对由串粉和变异引起的4种杂株类型则不能有效地区分开。因此．利用SSR标记RM21检测两优287的纯度．必须结合杂交种子大田生产的实际情况具体分析。     

醇溶蛋白法和SSR标记法检测小麦种子纯度的比较

为了比较SSR标记法和醇溶蛋白法检测小麦种子纯度的准确度,以参加冬小麦区域试验的8个品系为试材,利用SSR标记法和醇溶蛋白法分别检测8个品系中的杂株,以田间表型鉴定结果为对照.结果表明,在800个单株(每个品系取100个单株)中,醇溶蛋白法和SSR标记法分别检出44和55个杂株,田间表型鉴定出49个杂株.这49个杂株中,有41株同时被SSR标记法和醇溶蛋白法鉴定出来,另有8株仅被SSR标记法鉴定出来.证明SSR标记法检测小麦种子纯度较醇溶蛋白法更加准确.     

两系杂交水稻SSR分子检测及田间鉴定植株定位试验

在两优培九及新两优6380水稻品种中定向掺入杂株。利用SSR标记可准确检测出掺入的杂株。将6个两系水稻品种的正季鉴定样品逐株编号．对同一样品同一植株分别用SSR．标记和植物学特征特性两种方法进行纯度鉴定。鉴定结果表明。两种方法的鉴定结果具有较高一致性,利用SSR标记技术检测种子纯度是切实可行的。在工作中。可根据实际情况综合运用传统纯度鉴定方法和SSR标记鉴定法。     

利用SSR标记鉴定西瓜杂交种纯度的研究

建立快速、准确、稳定的种子纯度检测技术是保证西瓜杂交种质量的有效措施。利用分子标记技术对小型西瓜‘美月’杂交种纯度进行鉴定。从均匀分布于不同西瓜染色体上的88对SSR引物中筛选出8对引物在‘美月’亲本间表现明显的多态性,分别位于第1、2、3、6、8、9、10染色体上,多态性比率为9.09%,多态性标记均为共显性标记。为了提高检测效率,结合多态性片段大小,同时对标记SSR48和SSR62进行扩增,可成功获得221 bp和131 bp的两组特异性条带,成功建立了双重PCR体系。为了提高鉴定结果的准确性,选用位于西瓜不同染色体上的4对共显性标记对‘美月’进行纯度检测,4对标记的检测结果高度一致,‘美月’杂交种纯度为99.44%。标记鉴定结果与田间表型鉴定结果比较分析表明,2种鉴定结果高度一致。研究结果可为西瓜杂交品种纯度快速检测和品种权保护提供理论依据与技术支撑。     

两系杂交稻亲本SSR指纹图谱的建立及其在种子纯度鉴定中的应用

利用筛选到的20对SSR引物建立了两系杂交稻32个亲本(24个光温敏不育系和8个恢复系)的DNA指纹图谱,针对所涉及的9个杂交稻组合,获得能在父、母本间表现出多态性的特异SSR标记48个.以杂交稻组合两优932为例,在实验室用一个特异SSR标记(RM302)对200粒种子样本进行了纯度鉴定,结果鉴定纯度为90.50%,与田间种植鉴定结果90.60%(海南鉴定)和91.57%(武汉鉴定)基本一致,表明SSR标记技术适用于构建DNA指纹图谱和种子纯度鉴定.     

多重引物SSR技术鉴定玉米杂交种子纯度的研究

采用热碱法提取玉米种子DNA,并且运用多重引物(3对SSR引物)PCR对其进行SSR扩增,进行种子纯度鉴定。结果表明:①利用热碱法可以实现玉米种子的DNA快速提取,同时降低了检测成本;②利用三重引物PCR技术降低了检测结果的误差,提高了检测结果的准确性。因此,将这两种技术结合起来,将极大地推动SSR技术在玉米种子纯度鉴定中的推广和应用。     

不同引物鉴定同一杂交水稻种子样品纯度结果的差异及其原因分析

在对冈优158、Ⅱ优808、五优308及天丰优316的杂交种子样品进行室内纯度鉴定时,发现不同SSR引物鉴定的纯度结果存在明显差异。为了探讨其原因,将这4个组合的种子样品在海南进行田间种植鉴定,并按单株进行了分子与田间表型的对比分析。结果表明,冈优158、Ⅱ优808、五优308和天丰优316分别用引物RM208、RM264、RM242和RM164鉴定种子纯度时,只能鉴定出不育系(母本)杂株,室内分子鉴定纯度均高于相应的田间纯度;而分别用引物RM341、RM297、RM21、RM110鉴定时,不仅能鉴定出不育系(母本)杂株,还能鉴定出串粉株,室内分子鉴定纯度与田间鉴定纯度相当。因此,室内纯度鉴定应采用多对引物进行检测,以增加识别串粉株的几率。     

杂交玉米种子纯度的SSR技术分析和控制对策

采用SSR分子标记分析法对玉米种子纯度进行分析,探讨影响杂交玉米种子纯度的因素并提出相应对策。     

利用微卫星标记鉴定北方杂交粳稻种子纯度的研究

利用48对SSR引物对7个北方杂交粳稻组合的杂种F1与其父母本间的多态性进行了筛选，每个组合获得4-11对多态性好的特异引物，利用特异性引物可将杂交种与其相应的不育系、保持系和恢复系分开，说明SSR标记可应用于北方杂交梗稻种子纯度鉴定，具有较高的实用价值。     

适于玉米杂交种复杂样品纯度鉴定的SSR复合检测方案的建立

为了解决玉米复杂样品纯度中存在遗传不稳定及回交株等难以鉴定的问题,通过分析3 998份国家和省级审定玉米品种,结合快速提取、多重扩增体系等技术,构建一套适用于复杂样品纯度检测的复合检测方案。分析53份不同来源的郑单958纯度测试样品,结果表明,对于复杂样品使用单个位点进行纯度判定时,不同位点间结果会有较大差别,使用3个或3个以上位点综合判定时能够有效获得准确稳定的纯度检测结果。复合检测方案能够在时间和成本未大幅增加、仅增加少数引物的条件下获得多个SSR标记指纹,使复杂样品得到更加全面、精准解析,从而为种子生产中复杂样品的质量问题提供解决方案。     

分子标记在杂交水稻种子纯度鉴定中的应用

对杂交水稻种子纯度鉴定的蛋白质指纹鉴定法和DNA分子标记法的研究与应用作了介绍,讨论了各种方法的优缺点,并指出SSR技术将是最有潜力的杂交水稻种子纯度鉴定方法.     

利用SSR分子标记快速鉴定杂交水稻种子纯度技术体系的优化

针对目前SSR分子标记技术快速鉴定杂交水稻种子纯度方法商业化应用的限制因素,从DNA提取、PCR反应体系和程序及凝胶电泳等方面进行了技术体系的优化。原方法经优化后,DNA提取时间从每次5h以上减少到2.5min,PCR反应过程从200min缩短至65min,改聚丙烯酰胺凝胶电泳为琼脂糖凝胶电泳,电泳时间由3.0-3.5h缩短为1h,且通过减少dNTP、Taq酶的用量,对琼脂糖凝胶反复利用,大大降低了成本,减少了废弃物的污染,从而建立了准确、简单、快速、成本低廉的快速鉴定杂交稻种子纯度的技术体系。