伪狂犬病毒DNA限制性内切酶分析

应用５种限制性核酸内切酶（ＢａｍＨＩ、ＫｐｎＩ、ＳａｌⅠ、ＢｇｌⅡ和ＨｉｎｄⅢ）建立了伪狂犬病毒闽Ａ株ＤＮＡ的内切酶图谱，并与Ｂｕｋ株、Ｓｈｏｐｅ株、Ｎｏｒｄｅｎ株、Ｓ株，台湾ＮＴＵ株进行比较，认为闽Ａ株与美国或欧洲毒株无关，而与台湾株同源，表明核酸限制性内切酶分析在伪狂犬病病毒研究中是一种毒株鉴别、分子流行病学调查的有用工具。     

鸡贫血病毒山东分离株的限制性内切酶酶切图谱多态性分析

利用套式ＰＣＲ扩增在病毒（ＣＡＶ）６８７ｂｐ片段,分别以ＨａｅⅢ,ＨｉｎｆⅠ和ＨｐａⅡ酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其限制性片段长度多态性。用该技术对我国山东分离株的分析表明,ＳＪ１和ＳＪ２与日本的ＴＫ５８０３株和瑞典的１／８０和１／９１株相同,应属于Ｔｃｄｄ用限制性内切酶酶切图谱多态性（ＲＦＬＰ）分类方法中的第２组。     

鸽痘病毒DNA限制性内切酶分析

利用蔗糖密度梯度离心纯化鸽痘病毒 ,以蛋白酶 K法抽提病毒 DNA,提取到高分子量病毒 DN、病毒 DN　经 Eco R 、Sal ,Pst 酶切后各产生 17、8和 13个片段 ,病毒 DNA的大小约为 2 89.32 kb。     

福建黄兔线粒体DNA的限制性内切酶分析

本文用差速离心法分离福建黄兔线粒体，氯化铯超速离心法纯化线粒体ＤＮＡ。对纯化的ｍｔＤＮＡ用ＢａｇＩＩ，ＢａｍＨＩ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ，ＭｌｕＩ，ＰｓｔＩ，ＰｖｕＩ，ＳａｃＩ等９种限制性内切酶进行酶切分析。共识别了１７个酶切位点。经测算福建黄兔ｍｔＤＮＡ的分子量约为１８．４５Ｋｂ。     

鸽痘病毒DNA限制性内切酶分析

利用蔗糖密度梯度离心纯化鸽痘病毒，以蛋白酶K法抽提病毒DNA，提取到分子量病毒DN、病毒DN经EcoRI、SalI,PstI酶切后各产生17、8和13个片段，病毒DNA的大小约为289．32kb。     

鸡毒支原体DNA限制性内切酶分析

应用限制性内切酶ＢａｍＨＩ,ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ消化鸡毒支原体ＤＮＡ,其电泳图谱能区别鸡毒支原体各株,比十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）更敏感,表明限制性内切酶分析为鉴别鸡毒支原体毒株,进行分子流行病学调查及确定在商品代鸡中是否疫苗株代替了ＭＧ野毒株提供了非常有用的工具。     

应用PCR-限制性内切酶技术快速检测副结核分枝杆菌

根据副结核分枝杆菌的IS900序列,设计相应的引物,建立检测副结核分枝杆菌的PCR技术。利用该方法,可从副结核分枝杆菌中扩增出PCR产物,扩增产物具有高度特异性,长度为388bp,经限制性内切酶Saμ3AI酶切,证实该扩增产物为副结核分枝杆菌的片段。表明此项技术具有快速、敏感和特异性强等特点,通过PCR扩增IS900基因(副结核分枝杆菌独有的基因),可快速的应用于诊断反刍动物的副结核病和乳及乳制品中副结核分枝杆菌的鉴定。     

用限制性内切酶技术区别B病毒与单纯疱疹病毒1型和2型

进一步从基因组水平鉴定B病毒147株的实质。采用Hirt上清法从BV147、HSV－1、HSV－2感染细胞中提取病毒基因组并用BamHI进行酶切，电泳。结果所获得的BV147的BamHI图谱与国外报道的基本一致。进一步证实了新分离的病毒是B病毒，并为克隆B病毒的基因组、构建其物理图谱奠定了基础。     

限制性内切酶Bgl I、Bam HI、Pst I、Eco RI的分离纯化

自60年代末期,人们提出第一个限制性内切酶之后,越来越多的限制性内切酶被发现和纯化,其已成为基因重组、基因物理图谱绘制、DNA核苷酸序列分析、微生物的分离鉴定等不可缺少的工具.本实验参照并改进了国内外的一些方法,对Bgl I、Bam HI、Pst I、Eco RI等限制性内切酶进行了分离和纯化.     

枯草芽孢杆菌酸性内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质

将来源于藏猪粪便的枯草芽孢杆菌BY-4菌株接种于含4%麸皮的产酶培养基中,37℃、220r/min培养48h,发酵上清液经HiTrap Phenyl HP疏水作用层析、HiPrep 16/60Sephacryl S-100凝胶过滤层析分离纯化得到一个内切葡聚糖酶组分,纯化倍数为15.5,回收率为25.0%。经SDS-PAGE、酶谱分析鉴定,两步分离纯化后为电泳纯的纤维素酶,相对分子量约为55 000。酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH为4.5,最适反应温度为60℃。Mg2+、Zn2+对该酶有一定的激活作用,而Mn2+、Co2+、Ag+对该酶产生了抑制作用。     

鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析

用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。     

四种禽源支原体核酸限制性酶切图谱分析

以ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ酶解四种食源支原体基因组ＤＮＡ所获得的片段用琼脂糖凝胶进行电泳。结果表明,四种禽源支原体基因组ＤＮＡ经上述酶切后所获得的片段图谱有很大的差异性,表明它们之间的相关性很小;８个鸡毒支原体菌株ＤＮＡ经酶切,电泳后所获得的片段亦具有相对的差异性,说明酶切图谱分析不适用于禽类支原体各的鉴定。由于该技术有很高的分辨率,可以区分同种不同株之间的基因差异,因此,这种技术对禽类支原体病     

产蛋下降综合征病毒DNA限制性酶切分析的研究

摘要：选用BamH Ⅰ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ、Xba Ⅰ、HindⅢ等6种限制性内切酶对EDS两病毒内蒙古地区分离株(N3、B4)和参考株(AV-127)病毒基因组DNA进行酶切分析，均产生4，5，9，4，2和10条DNA片段，而且N3、B4株与参考株病毒基因组DNA之间的酶切图形、片段大小也十分相似，从分子水平上证实N3、B4株是EDS两病毒，同时也说明限制性内切酶分析法是检测EDS76病毒的一种简便快速的方法。     

云南保种山羊线粒体DNA限制性酶切研究

采用碱变性法,提取来自云南省不同地区４个保种山羊的１３个个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）,并用ＡｐａⅠ,ＡｖａⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＢｃｌⅠ,ＢｃＩⅠ,ＢｇｌⅡ,ＣｌａⅠ,ＤｒａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＥｃｏＲⅤ,ＨａｅⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＫｐｎⅠ,ＰｓｔⅠ,ＰｖｕⅡ,ＳａｃⅠ,ＳａｌⅠ,ＳｍａⅠ,ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析。结果发现它们的线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５．８Ｋｂ;不同限制性内切酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点,ＡｖａⅢ有６个酶切位点,ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点,ＨｉｎｄⅡ和ＨａｅⅡ有４个酶切位点,ＢａｍＨⅠ,ＢｇｌⅡ,ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点,ＡｐａⅠ,ＣｌａⅠ有两个酶切位点,其余有１个酶切位点。各保种山羊间未发现变异,说明云南的４个保种山羊极可能来自于共同的母性祖先。     

四种禽源支原体核酸限制性酶切图谱分析

以ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩ酶解四种禽源支原体基因组ＤＮＡ所获得的片段用琼脂糖凝胶进行电泳。结果表明,四种禽源支原体基因组ＤＮＡ经上述酶切后所获得的片段图谱有很大的差异性,表明它们之间的相关性很小;８个鸡毒支原体菌株ＤＮＡ经酶切、电泳后所获得的片段亦具有相对的差异性,说明酶切图谱分析不适用于禽类支原体种的鉴定。由于该技术有很高的分辨率,可以区分同种不同株之间的基因差异,因此,这种技术对禽类支原体病流行病学研究很有意义,并为今后禽源支原体分子生物学研究打下了基础。