湿地松体细胞胚胎发生胚性愈伤组织诱导条件优化

[目的]提高湿地松(Pinus elliottii E.)体细胞胚胎发生过程中胚性愈伤组织的诱导能力,优化胚性愈伤组织的诱导培养条件,建立稳定高效的湿地松胚性愈伤组织诱导培养技术体系.[方法]以湿地松未成熟合子胚作为外植体,探究基因型、球果采集日期、植物生长调节剂和碳源等因子对湿地松胚性愈伤组织诱导的影响;观察和划分湿地松合子胚的发育阶段,并测定不同发育阶段的合子胚的生长素(IAA)、细胞分裂素(ZR)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)含量,探究合子胚发育过程中内源激素含量的动态变化.[结果]内因和外因等因素对胚性愈伤组织诱导均有显著或极显著影响,通常7月中上旬是采集湿地松球果的最佳时期,选取处于2～4阶段即多胚头、裂生多胚和球形胚发育阶段的合子胚作为诱导材料,胚性愈伤组织诱导率较高;以16号基因型的湿地松球果的未成熟合子胚为材料,能够稳定保持较高的胚性愈伤组织诱导率.在DCR基本培养基中添加2.2 mg/L激动素(KT)+2.2 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+2.2 mg/L 6-苯甲基腺嘌呤(6-BA)为湿地松胚性愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂浓度组合;如以1.5 g/L松三糖代替蔗糖作为碳源,16号基因型球果的胚性愈伤组织诱导率可达40％.此外,通过观察合子胚发育过程中内源激素含量的动态变化,推测合子胚内源脱落酸(ABA)对胚性愈伤组织的诱导有重要调控作用.[结论]本研究得到了较为稳定高效的湿地松胚性愈伤组织诱导培养技术体系,为进一步建立完整高效的湿地松体细胞胚胎发生和植株再生体系提供依据.     

陆地棉胚性愈伤组织诱导和植株再生

以陆地棉“泗棉３号”、“北元２０３１”、“鲁９５５４”为材料进行全固体体细胞培养，获得了胚性愈伤组织和再生植株。起始愈伤组织阶段，用含２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＺＴ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基效果较好；进入胚性愈伤组织诱导阶段，在含ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上胚性愈伤组织诱导频率较高。     

杉木体细胞胚胎发生胚性愈伤组织诱导条件的优化

目的优化杉木体细胞胚胎发生过程中胚性愈伤组织的诱导条件,探究基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂对杉木体胚诱导的影响。方法以3个供体母株基因型（Z1、Z2、Z3）的杉木雌配子体（其未成熟合子胚处于裂生多胚期）为外植体,采用6种基本培养基及不同浓度的外源添加剂塞苯隆（TDZ）和茉莉酸甲酯（MeJA）处理,并对诱导培养过程中的愈伤组织进行细胞学观察。结果以DCR为基本培养基,诱导培养效果最好,愈伤组织诱导率达70.74%,胚性愈伤组织的诱导率达17.36%;供体母株基因型对胚性愈伤组织诱导有较大影响,Z1基因型供体母株的雌配子体最适合用于诱导产生胚性愈伤组织,诱导率为14.73%;诱导培养时以DCR为基本培养基,添加蔗糖30 g/L、活性炭1 g/L、倍力凝5 g/L并附加植物生长调节剂2,4-D 1.5 mg/L、KT 0.4 mg/L、MeJA 1.2 μmol/L和TDZ 0.004 mg/L,杉木胚性愈伤组织的诱导率最高,达19.83%;仅需4 d就可诱导产生胚性愈伤组织,不同阶段原胚团的结构和极性特征有明显差异。结论基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂都会明显影响杉木体胚诱导培养,以Z1供体母株基因型的杉木雌配子体为外植体、DCR为培养基并组合添加MeJA和TDZ可明显提高杉木体胚诱导率。      

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

羊草胚性愈伤组织的形成及植株再生

以羊草幼嫩根茎和种子为外植体,在MS、B_5和8114三种培养基上,配合使用生长素2.4-D的浓度水平为1,2,4mg/L,诱导愈伤组织以B_5或MS+2.4-D 4mg/L效果最佳。在继代培养中降低2.4-D浓度,相应提高蔗糖和肌醇含量,能有效地促进愈伤组织质地转变,形成致密的胚性愈伤组织。通过研究证明,羊草种子是羊草组织培养的最佳外植体,其愈伤组织诱导率高,质地优良且幼苗分化率好,并具有易于操作的优点。     

玉米胚性愈伤组织诱导和植株再生研究

对 4 3个基因型的未熟幼胚进行离体培养 ,研究不同基因型对离体培养的反应 ,不同质量浓度 2 ,4 D对胚性愈伤组织百分率的影响以及不同基因型愈伤组织的再生苗率 .结果表明 ,自交系A188,87 1、郑 2 2、综 3、综 31和掖 4 78以及它们的杂交种产生了胚性愈伤组织 ;继代过程中 ,2 ,4 D质量浓度降至 1mg·L-1提高了胚性愈伤组织百分率 ;4 3个基因型中仅部分基因型再生了植株 ,基因型是能否再生植株的主要因素 ,培养基成分也影响再生苗率 ,改良MS成分和低浓度的激动素有利于植株再生     

四川竹根姜胚性愈伤组织诱导和植株再生

选用四川竹根姜的茎尖组织,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MSN+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;胚性愈伤组织分化培养基MS+0.2 mg/L 2,4-D+5.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;根状茎形成培养基MS+3.0 mg/LBA+0.1 mg/L NAA+6.0%蔗糖+0.7%琼脂。在3.0%~6.0%的范围内蔗糖浓度越高越促进根状茎形成。     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

甜玉米成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生特性的评价

以45种基因型甜玉米的成熟胚为外植体材料,分析出愈率、愈伤组织增殖量、芽点数与植株再生的关系.结果表明,出愈率与再生能力有较大的相关性,愈伤组织增殖量、芽点数次之.利用主成分坐标分析并在此基础上对不同基因型甜玉米的再生能力进行聚类,并按欧氏距离将45种不同基因型玉米划分为2个大组群.通过对不同基因型玉米成熟胚培养特性的分析,探讨了各指标对于植株再生的意义,从供试材料中筛选出了愈伤组织诱导率和绿苗分化率均较高的材料,如选系B12-2-2和A50.     

磁处理对大蒜胚性愈伤组织生长和体胚发生的影响

以大蒜为试材，研究了磁处理对其胚性愈伤组织生长和发生的效应。结果表明：在0．23T磁感应强度下，0－20min之间的磁处理对大蒜胚性愈伤组织的生长和增殖影响不明显，磁处理时间超过20min后，明显对愈伤组织的生长和增殖产生抑制或破坏作用。5min磁处理能显著地促进大蒜体胚的发生和发育，在10－80min内，随磁处理时间延长，平均每克鲜物质体胚数呈缓慢递增趋势，5－10min磁处理的体胚发育状态更趋成熟。     

甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生

[目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

甘草花丝的胚性愈伤组织诱导及其体细胞胚的发生

甘草花丝通过离体培养,在MS培养基上形成无结构的愈伤组织。通过调整生长素和细胞分裂素的配比,使其由无结构的愈伤组织转化为胚性愈伤组织,进而发育成完整的体细胞胚。胚胎学观察表明,由体细胞胚发育成的小植株,其最初的来源是单个细胞。     

木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生

【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系,为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。【方法】酶解木薯品种TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系,分离原生质体的产量最高达3.5×106个/g,FDA检测其活性约90%。用TM2G培养基以液体浅层法分别在5×105个/mL和2×105个/mL密度下培养,培养过程中前30 d用0.3 mol•L-1 TM2G新鲜培养基每10 d更换1次,此后每10 d用0.25 mol•L-1 TM2G新鲜培养基更换。原生质体培养45 d后即可挑出1-2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×105个/mL的原生质体培养密度下,长出的都是致密型愈伤组织（能分化胚状体）,而在2×105个/mL的密度下培养长出的有致密型愈伤组织,也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。本试验共挑出1 479个致密细胞团,分化获得757个子叶胚,已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生质体产量和活性有较大提高,对前人所指出的瓶颈问题有所改进,原生质体再生植株效率有较大提高。     

荔枝叶片胚性愈伤组织诱导及其继代增殖研究

[目的]开展荔枝(Litchi chinensis)叶片胚性愈伤组织诱导和增殖研究,为荔枝再生体系技术的建立及应用打下基础.[方法]以荔枝叶片为试验材料对胚性愈伤组织诱导的影响要素(基因型、材料来源、培养基成分等)进行研究,并开展胚性愈伤组织继代增值试验.[结果]将萌发后2～4周的无菌叶片切成1 cm2大小并沿垂直于主...     

超甜玉米胚性愈伤组织诱导体系的建立

以超甜玉米自交系S1和品种粤甜3号为材料研究了影响愈伤组织诱导和胚性形成的几个关键因素。结果表明,2种基因型都是高诱导力的材料,自交系S1能够诱导出高质量的Ⅱ型胚性愈伤,是理想的基因转化材料。2,4-D浓度为2 m g/L时,2种基因型出愈率和胚性愈伤率达到最高,胚性愈伤率分别达到45.88%和35.00%;在培养基中添加9 m g/L的A gNO3极显著地提高了胚性愈伤率,比对照提高了31.25%;添加700 m g/L的脯氨酸,胚性愈伤率显著地提高了12.41%。据此建立了高效稳定的超甜玉米转基因胚性愈伤组织诱导体系。     

宽皮橘蕉柑的胚性愈伤组织诱导、悬浮细胞系建立及植株再生

取蕉柑花后 5周幼果的幼胚接种于含不同浓度BA、KT与IAA组合的MT培养基上 ,结果表明 ,暗培养条件是蕉柑胚性愈伤组织诱导成功的关键 .胚状体在后期发育中畸形胚的比例很高 ,经切割后 ,在MT +BA2 .0mg·L-1+IAA0 5mg·L-1+蔗糖 0 0 3kg·L-1培养基上可诱导产生丛芽 ,诱导率为 2 6 7% .幼芽在 1/ 2MT +NAA 1 0mg·L-1培养基上生根率达到了 87 0 % .蕉柑胚性愈伤组织在MT液体培养基中不断地继代培养 ,可形成生长稳定的胚性悬浮细胞系 ,体胚诱导实验证明悬浮细胞系具有很强的体细胞胚胎发生能力 .     

甘薯及其近缘野生种的花药愈伤组织诱导与器官分化

以甘薯7个品种及野生种 Ipomoea leucantha(2x)的花药为外植体,在含有2,4-D2mg/L+KT2mg/L+IAA2mg/L 的 MS 培养基上,有6个品种及 I.leucantha 诱导出愈伤组织,而且频率较高。甘薯花药愈伤组织诱导率在基因型之间有差异,向阳黄品种出愈率在7个甘薯品种中最高达9.7%,而甘薯近缘二倍体野生种 I.leucantha 愈伤组织诱导频率高于六倍体甘薯,达11.9%。形成的花药愈伤组织需立即转移到愈伤组织增殖培养基中。在分化培养基上,甘薯两个品种和野生种的花药愈伤组织分化出根。I.leucantha 愈伤组织根的分化率高于甘薯品种,达18.8%。