奶牛胚胎工厂化生产的应用研究

本实验对20头荷斯坦青年奶牛进行活体采卵,共获卵母细胞131枚,回收率65.17%。以牛雄性特异序列BOV97M和牛属1.715卫星DNA序列设计引物进行PCR扩增,将发育至囊胚阶段的胚胎性别鉴定,共检测25枚胚胎,12枚为雌性,13枚为雄性,把雌性胚胎进行移植,怀孕3头,受胎率25%,产出母犊3头,准确率100%。     

应用LAMP法鉴定牛早期胚胎性别试验

使用LAMP法对12枚牛体外受精胚胎的基因扩增,通过使用不同的引物,对牛胚胎中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有的核酸序列进行扩增,鉴定胚胎的性别,结果7枚为雌性,5枚雄性。     

应用奶牛性控精液生产体内性控胚胎及其移植试验初报

试验超排处理了3头供体牛,回收卵数19枚.可用胚胎11枚、退化胚6杖、未受精卵2枚.胚胎可用率为57.9%(11/19),头均可用胚3.7枚(11/3);同期发情处理了3头受体牛,妊娠率为66.6%(2/3),生下2头母犊,雌性胚胎率为100%.     

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定,将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植,妊娠率达45.5%,性别鉴定的准确率为100%。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。     

牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究

根据牙釉质基因在牛X染色体和Y染色体上存在的差异设计巢式引物,对牛静脉血基因组DNA样本以及10枚牛早期胚胎DNA样本进行巢式扩增和电泳分析,以鉴定性别。结果表明:利用此方法能够对牛10 pg量血液基因组DNA进行扩增鉴定性别,雌性产生1条片段长度为311 bp的源于X染色体的条带,雄性产生1条源于X染色体的条带(311 bp)和1条片段长度为251 bp的源于Y染色体的条带,对10枚胚胎进行鉴定,6枚为雄性,4枚为雌性。说明牙釉质基因巢式PCR扩增鉴定牛早期胚胎性别方法可靠,准确性和敏感性较高。     

水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2 005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鍪定,同时根据水牛G3PDH基因设计,2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率.结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24).该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用.     

奶牛超数排卵及胚胎移植的试验研究

本试验采用FSH＋PG的方法对22头供体荷斯坦牛分两批进行了超数排卵处理,140头受体南阳黄牛和供体牛采用2次PG法分批进行了同期发情处理。结果如下：（1）共有20头供体牛、104头受体牛在第二次注射PG后96h内发情,同期发情率分别为90.90%和74.29%;（2）20头供体牛回收胚胎176枚,可用胚胎140枚/头,平均回收胚胎8.8枚/头,平均可用胚胎7.0枚/头,可用胚胎比率79.55%;（3）104头南阳黄牛受体均移植单胚,51头妊娠,妊娠率为49.04%。     

奶牛胚胎性别控制技术的试验研究进展

应用LAMP法进行了613枚胚胎的性别鉴定结果，雌性胚胎302枚(49．3％)，雄性胚胎311枚(50．7％)，移植成功率平均为40．9％(122／298)，出生后代中与性别鉴定结果一致的121头，性别鉴定准确率为96．0％(121／126)。应用奶牛性腔胶囊后输精的14头供体母牛，共采集69枚可用胚胎，对其中64枚胚胎进行性别鉴定，确定雌性胚胎的比例为71．9％(46／64)，头均获4．9枚可用胚胎。应用奶牛性控液对3头供体母牛宫注后输精，共采集26枚可用胚胎，经性别鉴定后确定雌性胚胎比例为73．1％(19／26)，头均获可用胚胎8．7枚。应用分离X精子冷冻精液对12头供体母牛进行输精，对采集到的61枚胚胎进行性别鉴定后，确定雌性胚胎比例为100％(61／61)，头均获得可用胚胎5．5枚。11枚性控冷冻胚胎移植后，40d以上未返情率为63．6％(7／11)。用分离的X精子冷冻精液对供体母牛输精后，可获得与未分离冷冻精液输精后相接近的超排供体母牛采集胚胎的数量和质量。     

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定，将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植，妊娠率达45．5％，性别鉴定的准确率为100％。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。     

常规冻精与性控冻精的授精效果分析

试验对常规冻精和性控冻精在荷斯坦牛超排后的授精效果作了分析.对29头做性控(X-精子)冻精的授精,获得111枚可用胚胎,头均可用胚为3.83枚;受精率:青年牛卵子受精率为90.60%,经产牛卵子受精率为86.15%.对34头做常规冻精的授精,获得212枚可用胚胎,头均可用胚为6.24枚;受精率:青年牛卵子受精率为92.17%,经产牛卵子受精率为88.50%.