链霉菌702所产抗细菌组分S2的分离纯化

用硅胶柱层析进行链霉菌702所产抗细菌物质的初步纯化,柱层析硅胶为160~200目,以乙酸乙酯作为洗脱剂,收集R f值为0.46的洗脱液,45℃减压浓缩后在-20℃下静置24 h得到黄色针状结晶(组分S2)。此结晶甲醇溶解液经紫外吸收光谱测定结果表明,该抑细菌活性物质在199 nm有强吸收峰,而在240.2 nm处有弱吸收峰。此结晶用HPLC分析得到分离抑细菌物质的最佳条件为流动相:乙腈溶液600 g/L,检测波长200nm,从HPLC图谱峰面积来看有效物质含量达到961.1 g/L。使用制备型液相色谱进行扩大制备,收集峰尖物质,冻干后可得红色絮状物,此物质经生物检测,其抑菌效果良好,再经分析型液相色谱分析,可得其有效物质达994.7 g/L。     

链霉菌702产红谷霉素分批发酵动力学研究

以链霉菌702 D34为供试菌株,对链霉菌702产红谷霉素分批发酵动力学模型进行研究。建立了该菌株分批发酵合成红谷霉素的菌体生长、产物合成和葡萄糖消耗的动力学模型,并对模型参数进行了非线性回归。结果表明,预测值与实验值有良好的拟和性,说明所建数学模型能较好地描述实际合成红谷霉素的分批发酵过程。     

链霉菌702菌株所产抗真菌单体组分DZP-8和DZP-9的分离纯化与制备

用乙醇浸提链霉菌702菌株发酵液,滤液真空浓缩成油状物,再用乙酸乙酯萃取,萃取液真空浓缩成浸膏,浸膏通过硅胶柱层析,以氯仿与甲醇不同配比进行梯度洗脱,收集含抗真菌活性物质馏分洗脱液,进行真空浓缩至干燥为抗真菌活性物质粗品.粗品通过制备型HPLC仪进一步分离纯化,用乙腈:水:TFA不同浓度进行梯度洗脱,按单组分保留时间收集不同馏分洗脱液,将洗脱液冻干成抗真菌活性单体组分样品.抗菌活性和单组分样品纯度检测分别用管碟法检测对黑曲霉的抑菌活性和分析型HPLC.结果表明,含抗真菌活性单位10 000 mg/L发酵液200 L经乙醇浸提液浓缩后得到含抗真菌活性单位22 500 mg/L的油状物80 L,浸提率为90％;80 L油状物经乙酸乙酯萃取浓缩得含抗真菌活性单位120 000 mg/L的12 L浸膏,萃提率为80％.500 g浸膏经硅胶柱层析,获得含抗真菌活性单位达750 mg/g的粗品48.0802 g.粗品经制备型HPLC仪获得纯度分别达到99.47％和90.28％的抗真菌单组分DZP-8和DZP-9.     

链霉菌702所产生物活性物质抑菌活性的初步研究

用无水乙醇分别从链霉菌 70 2摇瓶发酵液的上清液和菌丝体中提取生物活性物质 ,然后分别对不同细菌、酵母菌和霉菌进行抑菌活性的测定。上清液和菌丝体的乙醇提取液对蜡质芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、啤酒酵母、木霉、毛霉、黑曲霉均有较强的抑菌活性 ;上清液乙醇提取液仅对大肠杆菌、棉枯萎病菌有较强的抑菌活性 ,而菌丝体乙醇提取液对上述两菌无抑菌活性 ;上清液乙醇提取液对苏云金芽孢杆菌的最低抑菌作用浓度为将其提取液稀释至 6 2 5倍 ;上清液乙醇提取液在 10 0℃下加热处理6 0min对苏云金芽孢杆菌的抑菌活性不变 ,证明该菌所产生物活性物质对热稳定。     

链霉菌702菌落形态对其所产生物活性物质的影响

通过对链霉菌702自然选育,挑选出5种不同形态的单菌落,对其分别进行摇瓶发酵,测定发酵液中的生物活性物质。结果表明,在固体培养基中不产色素的菌落发酵后不产生具有抑菌作用的生物活性物质,为选育产生物活性物质的链霉菌702菌株提供一种简便方法。     

链霉菌702所产抑真菌物质理化性质的初步研究

用链霉菌702所产的抑真菌物质纯品进行了极性试验和官能团反应。极性试验表明该物质属于中性的非水溶性Ⅰ型抗生素;在官能团反应中,Molisch反应和Hopkins—Col反应呈阳性,表明该物质含有糖基和色氨酸,为进一步对该抑菌物质进行结构鉴定,提供了有益的实验依据。     

链霉菌702所产生物活性物质对熟肉制品的保藏研究初探

研究了冷藏条件下经链霉菌702所产生物活性物质处理的熟肉制品的保藏效果。结果表明：其可有效抑制熟肉制品菌数的增长,明显延长货架期,且与Nisin、Natamycin有同样的抑制细菌的效果。     

链霉菌702所产抗真菌物质对水稻纹枯病菌的抑菌机制研究

研究了链霉菌702所产抗真菌活性物质对水稻纹枯病菌的抑菌机制,结果表明:702对纹枯病菌菌丝生长有强烈的抑制作用,EC50为1.128 05 mg/L;能显著的引起菌丝细胞内原生质凝集;对菌核及孢子的萌发有较强的抑制作用,15.11 mg/L和10.64 mg/L完全抑制菌核和孢子的萌发;对孢子形成也有一定的阻碍作用,22.66 mg/L完全抑制孢子形成.     

NTG-LiCl复合诱变选育链霉菌702菌株

为筛选出产新农抗702的高产链霉菌702突变株.分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素,NTG-LiCl复合诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株.NTG处理90 min对菌株的致死率可达71.56%,抗药性突变率高达19.46%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株13-18-52菌株,产抗新农抗702的摇瓶发酵单位达到1 946 μg/mL,比出发菌株发酵单位1 416 μg/mL提高了37.43%.采用抗药性致死突变标志的NTG-LiCl复合诱变筛选模型可以获得产新农抗702的链霉菌702高产菌株.     

链霉菌702生物活性物质抑菌的致死浓度和致死时间的测定

通过对链霉菌702所产生物活性物质和纳他霉素及Nisin分别对黑曲霉、青霉、绿色木霉、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、产朊假丝酵母、啤酒酵母的抑制作用研究,试验结果得出链霉菌702所产生物活性物质对各种指示菌的半致死浓度和半致死时间,证明链霉菌702所产生物活性物质抑制效果比纳他霉素及Nisin强。试验结果为链霉菌702所产活性物质应用提供了有益的试验数据。     

促进链霉菌702产生农抗702的诱导子筛选研究

通过分别添加非生物诱导子、生物诱导子对链霉菌702菌株进行诱导,考查诱导子对菌株合成农抗702的促进作用。结果表明,在培养32和64 h时,往链霉菌702培养物中分别加入苏氨酸和山梨醇的促进作用较明显,其中,添加苏氨酸的发酵液农抗702的抑菌圈直径比对照提高了30.25%。黑曲霉、桔青霉制备的诱导子作用不明显,而金黄色葡萄球菌制备的诱导子在培养64和96 h时添加都有促进作用,在64 h时添加效果最佳。枯草芽孢杆菌制备的诱导物只在64 h时添加抑菌效果较明显。大肠埃希菌制备的诱导子分别在培养0、32、64及96 h时添加至培养物中均能促进农抗702的产生,且在32 h时添加达到最佳状态,抑菌圈直径比对照提高了39.67%。苏氨酸和大肠埃希菌的最适添加浓度分别为50和3 μg·mL-1,其发酵产物抑菌圈直径分别比对照增加了25.78%和51.17%。     

链霉菌702发酵液对草莓保鲜作用的研究

采用链霉菌702发酵液对草莓的防腐保鲜效果进行了研究。通过测定不同处理草莓的含糖量、Vc变化和腐烂指数及重要的贮藏外观表明,链霉菌702发酵酒精浸提稀释50倍液和250mg／L纳他霉素处理的草莓的糖降解进度减缓,Vc含量维持较高含量,腐烂指数明显低于对照．且链霉菌702发酵液处理优于250mg／L纳他霉素处理。试验结果表明,链霉菌702发酵液对草莓有较好的保鲜效果,可有效的降低微生物的生长。     

链霉菌702所产生物活性物质稳定性测定研究

通过对链霉菌702所产生物活性物质的稳定性测定研究，试验结果表明，链霉菌702发酵液分别在100℃和121℃处理10h和1h，紫外线照射3min和在pH3-pH12缓冲液中处理60min后，分别对枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和青霉的抑菌活性不减。说明该抑菌物质对热和紫外线稳定，在pH3-pH12条件稳定。本研究为进一步对该抑菌活性物质分离提取工艺和其在实践上的应用，提供了有益的试验数据。     

链霉菌702发酵液对水果的防腐保鲜作用初探

对链霉菌702发酵液对苹果、梨、猕猴桃、甜瓜的防腐保鲜作用进行了研究。通过测定不同处理的失重率及观察水果的贮藏外观表明,链霉菌702发酵液的酒精浸提稀释100倍液与10mg／L纳他霉素能减慢水果的水分蒸发,抑制有害菌生长,对水果有较好的防腐保鲜效果。