代料栽培金耳出耳期易感染真菌病害多样性初探

出耳期金耳的杂菌感染是制约金耳代料栽培的主要因素。采用ITS2高通量测序和形态学鉴定,对出耳期金耳感染的真菌群落种类和比例进行鉴定分析。结果表明,袋料栽培金耳出耳期感染主要真菌群落有子囊菌门(Ascomycota)木霉属(Trichoderma)、镰刀霉属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus),担子菌门(Basidiomycota)的考克娃酵母属(Kockovaella),其中木霉属(Trichoderma)相对丰度最高,在三个样本中所占比例分别为63%、35%和19%。对分离得到100个菌株形态学鉴定,其中主要为木霉属(Trichoderma)、镰刀霉属(Fusarium)和青霉属(Penicillium),且木霉属分离菌株数最多,有75株。     

木霉P3.9菌株对枇杷根际细菌多样性及其群落组成的影响

前期研究表明,木霉P3.9菌株Trichoderma atroviride对土传真菌引起的枇杷根腐病有较好盆栽防治效果,为了明确木霉P3.9菌株对枇杷根际细菌多样性及群落组成的影响,采用其菌株孢子悬浮液1×10~6 cfu/mL灌根后,不同时间采集枇杷根际土壤,通过Illumina平台高通量测序,比较木霉P3.9菌株处理和对照(清水)对枇杷根际细菌群落组成及多样性差异的影响。结果表明,枇杷根际土壤细菌优势菌群为变形杆菌门Proteobacteria、放线菌纲Actinobacteria、丙酸杆菌目Propionibacteriales、类诺卡氏菌科Nocardioidaceae、气微菌属Aeromicrobium。木霉P3.9菌株处理没有改变枇杷根际细菌物种多样性及优势菌群种类,而改变了非优势菌群的丰度。木霉P3.9菌株处理30 d之内,不改变枇杷根际细菌多样性,30～40 d多样性略有下降,50～90 d枇杷根际细菌多样性又恢复正常水平。说明枇杷根际添加木霉P3.9菌株对其根际细菌多样性无不良影响,反而可以改善非优势菌群的丰度,对连作枇杷根际土壤肥力有提升作用。     

蓝莓根系内生真菌多样性的研究

山东是蓝莓种植大省,至2014年底,种植面积约3 000hm2,年产量约为5万t。为探讨山东栽培蓝莓根系内生真菌的菌群组成和分布特点,利用组织分离法从山东4个地区2个蓝莓栽培品种根系中分离内生真菌1 345株。利用形态特征和分子生物学方法鉴定为29属,其中卵菌1属,占0.45%;担子菌2属,占2.15%;子囊菌17属,占31.16%;无性型真菌9属,占60.82%;其余5.42%无法明确鉴定。结果表明:山东省栽培蓝莓根系内生真菌的菌群多样性丰富,其中以镰孢属Fusarium为优势菌群,分离频率为31.67%;木霉属Trichoderma、青霉属Penicillium、枝孢属Cladosporium、涛旋孢属Zalerion是亚优势种群。不同地区栽培蓝莓根系内生真菌的结构和组成存在一定差异。镰孢属Fusarium是2种栽培蓝莓根系内生真菌的优势菌群。多样性指数的分析反映出蓝莓根系内生真菌菌群的多样性水平存在差异,威海"杜克"的多样性指数(H′)和丰富度指数(R)最高,分别为2.835 9和4.264 3,泰安"杜克"的均匀度指数(E)最高,为0.939 1。由相似性原理得出,各地区之间的内生真菌相似性系数处于中等不相似与中等相似之间,威海和青岛之间的内生真菌菌群相似性最高,它们之间的Jaccard指数和Sorenson指数分别为0.57和0.73。     

地黄块根内生真菌的多样性研究

以产自河南温县的地黄块根为试材,采用平板分离法分离地黄内生真菌,通过形态学特征和核糖体转录间隔区(ITS)序列分析,对分离出的真菌进行分类鉴定;以内生真菌的分离率(IR)、定殖率(CR)、相对频率(RF)、多样性指数(H)及均匀度指数为指标研究地黄块根内生真菌的菌群组成及其多样性。结果表明:从地黄块茎中分离得到81株内生真菌纯化培养物,经鉴定28株为镰孢霉属Fusarium;19株为青霉属Penicillium;15株为茎点霉属Phoma;12株为链格孢属Alternaria;其它6株分别为赤霉属Gibberella、曲霉属Aspergillu,土赤壳属Ilyonectria、毛壳属Chaetomium。镰孢霉属、青霉属、茎点霉属、链格孢属为地黄块根内生真菌优势菌群,地黄内生真菌菌群组成具有一定程度的多样性。     

昆明香菇反季节栽培的主要病原真菌及其发生特点

通过对昆明地区几个香菇反季节栽培种植区采集病原真菌样本,分离、纯化鉴定出木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、拟青霉属(Paecilomyces)、镰孢属(Fusarium)、轮枝霉属(Verticillium)、毛霉属(Mucor)共6个属,其中木霉属分离频次最高(61.90%);香菇反季节栽培出菇期病原真菌的种类最多,而培菌后期最少。木霉属是主要病原真菌,培菌前期、培菌后期和出菇期发生率分别为0.33%、2.20%和14.36%,拟青霉属真菌污染仅在培菌前期发现,发生率为0.25%。     

猕猴桃根腐病根际土壤酶活性及真菌群落组成研究

分析猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌群落差异,可为研究猕猴桃根腐病发生机制及其调控技术提供依据。在浙江省天台县街头镇的“红阳”猕猴桃种植基地,以树龄9年的猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌为研究对象,对菌群ITS序列进行高通量测序注释后,对比分析了真菌群落结构与多样性指数的差异,并测定分析了根际土壤脲酶、蔗糖酶和酸性磷酸酶的活性。结果表明,猕猴桃根腐病的发生极显著地降低了根际土壤脲酶、蔗糖酶和磷酸酶的活性(p<0.01)。感病植株根际土壤真菌群落丰富度指数(Chao1)显著低于未感病植株根际土壤(p<0.05)。在门分类水平上,感病植株根际土壤真菌中相对丰度降低的有担子菌门、未分类真菌和接合菌门,其差异均为极显著(p<0.01);相对丰度升高的为子囊菌门,其差异达极显著水平(p<0.01)。在属分类水平上,感病植株根际土壤真菌相对丰度增加的有赤霉菌属、丛赤壳属、镰刀菌属、假裸囊菌属和肉座菌属,其差异均达极显著水平(p<0.01);相对丰度降低的有未分类伞菌纲、枝鼻菌属、粗糙孔菌属、线虫草属、支顶孢属、粪盘菌属、木霉属和被孢霉属,其差异...     

宁夏枸杞内生真菌的分离及多样性分析

以枸杞为试材,采用组织分离法从不同品种、不同部位的枸杞组织中进行内生真菌的分离,根据培养性状、菌落、孢子等的形态特征和rDNA-ITS序列分析对分离菌株进行鉴定;根据枸杞内生真菌的相对频率、物种多样性指数、丰富度指数和相似性系数分析其组成特点。结果表明:21份枸杞样品中共分离得到363株内生真菌,这些菌株分属于链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、双极霉属(Bipolaris)、毛壳菌属(Chaetomium)、枝孢属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、青霉菌属(Penicillium)、光黑壳属(Preussia)、裂壳菌属(Schizothecium)、粪壳菌属(Sordaria)、戴氏霉属(Taifanglania)、梭孢壳属(Thielavia)、火丝菌属(Tricharina)和炭角菌属(Xylaria)14个属,其中链格孢属(Alternaria)、梭孢壳属(Thielavia)和曲霉属(Aspeirgllus)为优势属,分别占分离菌数的46%、14%和13%。枸杞植株各器官都有内生真菌分布,其中,茎部内生真菌多样性指数最大,为0.86,且果与茎部的相似性系数最大。不同枸杞品种间内生真菌分布存在差异,"宁杞1号""宁杞2号"内生真菌多样性指数和丰富度指数远远高于黄果枸杞和黑果枸杞。内生真菌群落组成的相似性结果表明,部分内生真菌具有一定的宿主和组织偏好性。枸杞体内含有丰富的内生真菌资源,其内生真菌具有很高的宿主特异性,而且其分布受生境影响。     

大兴安岭火烧迹地土壤真菌群落结构及多样性研究

以大兴安岭火烧迹地在不同火烧年和不同火烧程度的土样为研究对象,揭示大兴安岭火烧迹地恢复过程中土壤真菌的多样性与群落变化特征,为火烧后森林生态系统的科学管理和森林更新提供理论依据。用PCR-DGGE法对土壤真菌进行了分析,采用Quantity one软件分析其多样性,通过序列的同源性比较构建系统发育树,真菌结构主成分分析采用Canoco等软件。结果表明:每个样品真菌种类丰富,不同样品有相同的真菌菌属也有不同的真菌菌属,17个优势条带测序所得菌属与黏滑菇属(Hebeloma)、蜡伞属(Hygrophorus)、蜡壳菌属(Sebacima)、管柄囊霉属(Funneliformis)亲缘关系最近,其中还有一些不可培养的真菌。不同火烧年和火烧程度之间土样真菌香农指数、丰富度、均匀度均达到显著差异(P0.05)。不同火烧程度、不同火烧年均能影响土壤真菌的群落结构。     

避雨栽培对‘赤霞珠’葡萄果表微生物多样性的影响

以避雨栽培和露天栽培（对照）酿酒葡萄‘赤霞珠’为材料，利用高通量测序技术，研究果实转色期和成熟期果表微生物的多样性以及群落结构。两种模式下果表的主要真菌和细菌分别是子囊菌门（Ascomycota，占比>90%以上）和变形菌门（Proteobacteria）。避雨栽培减少了炭疽病菌（Colletotrichum）的定殖，降低了诱导果实腐烂且产生毒素的链格孢属（Alternaria）的丰度；且避雨条件更适合于固氮细菌假单胞菌属（Pseudomonas）和泛菌属（Pantoea）的生长。此外，避雨处理中曲霉属（Aspergillus）和单端孢霉属（Trichothecium）的丰度普遍高于露天对照。NMDS分析与Welch’s t检测表明，避雨栽培引起了转色期的真菌和细菌群落结构的显著差异（胁强系数stress <0.1且P <0.05）。避雨栽培一定程度上减少了引起果实腐烂的微生物群的生长，有助于对葡萄健康生长和葡萄酒品质有益的微生物在果实表面定殖。     

黑木耳栽培中常发竞争性杂菌和病虫害规范化防治技术

1竞争性杂菌——木霉危害与防治木霉又称绿霉,是黑木耳栽培中的第一大病原菌,属真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、木霉属。常见种类有绿色木霉和康氏木霉。1.1危害症状：培养基感染木霉后,菌落初为白色絮状,后为暗绿色,孢子迅速萌发繁殖将接种面或袋面覆盖,使黑木耳菌丝失去培养基而停止生长;出耳期划口部位被木霉侵染,木霉菌丝向袋内生长蔓延,并产生毒素,抑制黑木耳菌丝及子实体生长,     

西北黄土高原地区苹果连作障碍与土壤真菌群落结构的相关性分析

采用构建真菌克隆文库和T-RFLP相结合的方法,研究了甘肃、陕西和山西省20个地区再植苹果园土壤中的真菌群落结构特征,同时还研究了平邑甜茶幼苗的生长与再植苹果园土壤中优势真菌属的相关性。结果表明,在真菌分类门的水平上,子囊菌门真菌是西北黄土高原地区苹果连作土壤中主要的真菌类型;在属的水平上,镰孢菌属、被孢霉属、毛壳菌属、隐球酵母菌属等是主要优势菌群。从果园地区分布来看,甘肃省的5个地区土壤真菌具有相对较高的多样性指数、均匀度指数、丰富度指数和相对较低的优势度指数。陕西富平,山西平陆,山西盐湖区的苹果连作障碍较严重,镰孢菌的丰度较高。从平邑甜茶幼苗生长受抑制量与土壤中优势真菌属的相关性来看,镰孢菌的丰度与苹果连作障碍的严重程度呈极显著性正相关（r = 0.585,P < 0.01）,而被孢霉属的丰度与其呈显著性负相关（r =–0.473,P < 0.05）。引起西北黄土高原地区苹果连作障碍的主要有害真菌类型是镰孢菌属。     

不同时期油菜根际土壤微生物群落结构多样性及其差异

以陕西汉中油菜种植基地种植最广的油菜品种“邡油777”的油菜花期和果期的根际土壤样品为试材，采用高通量扩增子的试验方法，对样品根际微生物群落结构进行分析和比较，以期为后续油菜根际促生菌的筛选及油菜-根际土壤-微生物的相互作用关系研究提供参考依据。结果表明：不同时期油菜根际土壤微生物群落结构存在显著性差异，油菜花期土壤样品微生物多样性和丰富度较果期高。群落结构组成中占比大于1%的细菌门10种，占比大于1%的细菌属6种，变形菌门和酸杆菌门是其共有优势菌群；占比大于1%的真菌门7种，占比大于1%的真菌属7种。被孢霉门是油菜根际真菌群落的绝对优势菌群。油菜的不同生长时期是影响油菜根际微生物群落结构和多样性的重要原因。     

白及根际土壤真菌群落结构与土壤因子相关性

以种植白及2年的砂质壤土和砂质粘土为试材,采用高通量测序技术和生物信息学分析方法,研究根际真菌群落结构特征,测定土壤理化因子,分析土壤理化因子与真菌群落的相关性,以期为白及根际土壤微生物改良及优质高产栽培提供参考依据。结果表明：共得到43 651条真菌基因优化序列,2种根际土壤真菌存在差异,砂质壤土和砂质粘土特有真菌OTU数分别占总数的33.50%、33.60%;α多样性分析表明,砂质壤土中真菌属丰富度高于砂质粘土;群落结构分析表明,除未分类的真菌属之外,镰刀菌属(Fusarium)和被孢霉属(Mortierella)在2种白及根际土壤中均为优势真菌属,砂质壤土中显著富集附球霉属(Epicoccum)、土赤壳属(Ilyonectria)、Knufia,而砂质粘土中显著富集外瓶柄霉属(Exophiala)、原隐球菌属(Saitozyma);土壤有效磷对白及根际土壤真菌群落的α多样性有显著影响,有机质、pH、有效磷、有效镁、有效钙对土壤真菌群落具有显著影响。种植白及的砂质壤土和砂质粘土真菌群落结构存在差异,土壤理化因子对根际真菌具有一定影响,其中有效磷最为显著。     

翻地对羊肚菌栽培土壤真菌群落的影响

以羊肚菌栽培地内土壤为试材,采用Illumina HiSeq高通量测序技术分析土壤真菌群落结构的方法,研究了羊肚菌在进行栽培时翻地处理前后的土壤真菌群落结构的变化,以期为羊肚菌栽培时土壤真菌群落结构的变化提供参考依据。结果表明:4组土壤样品的真菌群落在门分类水平结构分析中共有优势菌门3种,分别为子囊菌门(Ascomycota)、鞭毛菌门(Mortierellomycota)、担子菌门(Basidiomycota);在属分类水平结构分析中仅有优势菌属2种,分别为Mortierella属和Tetracladium属。通过差异分析,发现翻地处理前后,不同土壤深度下真菌微生物群落组成发生较大变化。     

伴生分蘖洋葱对番茄根际微生物群落结构的影响

以分蘖洋葱和番茄为材料,采用高通量测序研究伴生分蘖洋葱对番茄根际土壤细菌和真菌群落的组成和结构的影响。结果表明:与番茄单作相比,分蘖洋葱伴生处理改变了番茄根际土壤细菌和真菌群落的组成,变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、浮霉菌门(Planctomycetes)和绿弯菌门(Chloroflexi)为优势细菌门,子囊菌门(Ascomycota)、接合菌门(Zygomycota)和担子菌门(Basidiomycota)为优势真菌门;在纲水平上,分蘖洋葱伴生处理显著提高了具有有益潜力的α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)的相对丰度,显著或极显著降低了粪壳菌纲(Sordariomycetes)和散囊菌纲(Eurotiomycetes)的相对丰度;在目水平上,分蘖洋葱伴生处理显著提高了鞘脂单胞菌目(Sphingomonadales)和丙酸杆菌目(Propionibacteriales)的相对丰度,显著或极显著降低了小囊菌目(Microascales)、散囊菌目(Onygenales)和炭角菌目(Xylariales)的相对丰度;在科水平上,分蘖洋葱伴生处理显著或极显著提高了类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)、微杆菌科(Microbacteriaceae)、鞘脂单胞菌科(Sphingomonadaceae)、Blrii41和毛球壳科(Lasiosphaeriaceae)的相对丰度,显著或极显著降低了小囊菌科(Microascaceae)和爪甲团囊菌科(Onygenaceae)的相对丰度;在属水平上,分蘖洋葱伴生处理显著降低了具有致病潜力的假霉样真菌属(Pseudallescheria)、Kernia和Wardomyces的相对丰度;但是对根际土壤细菌和真菌群落结构和微生物多样性无显著影响。     

液态有机肥部分替代化肥对设施番茄根区真菌菌群的影响

以'烟粉209'番茄为试材,采用高通量测序技术,分析了液态有机肥部分替代化学冲施肥对设施番茄根区土壤样本中真菌群落多样性、结构组成和差异的影响,以期为设施番茄生产合理施肥提供参考依据.结果 表明:在97％的相似水平下,共发现301个OTU,8个门,20个纲,41个目,78个科,118个属,159个种.3个处理和对照样本中共有OTU值为27,独有的OTU值分别为106、34、16.在土壤处理样本中以T_R30处理的真菌多样性最高,丰富度较高.其优势菌门为担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascmycota)和被孢霉门(Mortierellomycota),优势菌属为unclassifiled_f_Ceratobasidiaceae、被孢霉属(Mortierella)和嗜热链球菌属(Mycothermus).对样本进行聚类分析,主成分分析和非度量多维尺度分析,发现T R30处理样本和对照样本的真菌菌落组成相似度最高,共性大.综合分析表明液态有机肥替代不同比例化学冲施肥能增加根区土壤中外源真菌种类,改变丰富度、多样性和菌落组成,且以T R30处理的优势明显.     

不同发育阶段桑天牛细菌群落多样性分析

为明确桑天牛各发育时期的菌群结构及多样性,利用16S rRNA测序技术对桑天牛卵、初孵幼虫、老熟幼虫、雌雄成虫4个发育阶段的细菌群落进行研究。结果表明,桑天牛不同发育阶段的细菌群落多样性存在差异。初孵幼虫的Alpha多样性显著高于其他阶段。Beta多样性分析表明,雌雄成虫细菌群落高度相似。在门分类水平,卵期的优势菌门为放线菌门(64.78%),初孵幼虫期为变形菌门和厚壁菌门(38.40%、25.31%),老熟幼虫为变形菌门(93.47%),雌雄成虫为厚壁菌门(86.46%、86.35%)。在属分类水平,卵期的优势菌属为红球菌属,初孵幼虫为Muribaculaceae科未知属,老熟幼虫为Gibbsiella属,雌雄成虫为乳球菌属。在功能方面,发酵、化学异养、好氧性化学异养在桑天牛各个发育阶段的占比都较高,并且与该阶段存在的菌落有关。本研究揭示了桑天牛不同发育阶段细菌群落差异,明确了各阶段优势肠菌,可为桑天牛的生物防治奠定基础。     

土壤消毒结合微生物菌剂防控茄子黄萎病及对根际真菌群落结构的影响

通过田间微区试验,采用高通量测序技术,探究不同土壤消毒结合微生物菌剂方法对连作茄子黄萎病防控和根际土壤真菌群落结构影响。结果表明:土壤消毒结合枯草芽孢杆菌处理(BB)显著降低了根际真菌Ace、Chao和Shannon指数,分别比连作茄子处理(CK)降低了23.29%、19.78%和42.71%,黄萎病病原菌数量与病情指数分别比CK处理降低97.2%和51.6%。茄子根际土壤真菌多样性和黄萎病病原菌数量呈显著正相关性。根际土壤主要优势菌门为子囊菌门(Ascomycota),相对百分比在各处理中均大于50%。BB处理显著增加了接合菌门(Zygomycota)的相对丰度,比CK处理增加了73.3%,但子囊菌门和担子菌门(Basidiomycota)的相对丰度分别降低33.6%和61.1%;与对照处理(CK)和化学农药消毒(CF)相比,BB处理和土壤消毒处理(BF)毛壳菌(unclassified_f_Chaetomiaceae)和被孢酶属(Mortierella)等有益菌相对丰度增加,镰刀菌属(Fusarium)和马杜拉分枝菌属(Madurella)等病土传病原菌的相对丰度降低。土壤消毒并配施枯草芽孢杆菌改变土壤真菌群落结构使茄子黄萎病得到有效防控。     

赣州橘园根系内生丛枝菌根真菌群落多样性鉴定及其受黄龙病菌侵染的影响

【目的】鉴定赣州橘园黄龙病菌侵染和健康柑橘根系内生丛枝菌根真菌(AMF)的多样性,并明确黄龙病菌的侵染对于AMF群落的影响。【方法】使用AMF 18S小亚基核糖体特异引物AMV4.5NF/AMDGR对黄龙病菌侵染和健康柑橘根系DNA扩增建库,通过454高通量测序和生物信息学分析挖掘赣州橘园根系AMF多样性及其受黄龙病菌侵染的影响。【结果】从赣州橘园的柑橘根系中鉴定到80个AMF种,其中包括44个已知的AMF种和36个新种。进化分析发现,球囊霉属AMF占总AMF数的78.75%,是赣州柑橘根系内生AMF群落的优势菌属。鉴定到类球囊霉属的12个AMF,其中Paraglomus.N2和Paraglomus.N7的丰度位于总AMF的第二和第三,说明类球囊霉属AMF在赣州柑橘AMF群落中占有重要地位。PCoA分析表明黄龙病菌侵染显著改变了柑橘根系AMF的群落结构,而AMF群落的α多样性指数无显著性变化。通过丰度差异分析鉴定到6个在黄龙病菌侵染后丰度差异显著的AMF种,表明黄龙病菌侵染可能通过改变AMF菌种组成和相对丰度来影响其群落结构。【结论】全面揭示了赣州橘园根系内生AMF多样性,并且黄龙病菌侵染可通过改变菌种组成和相对丰度来影响AMF群落结构。     

连作对百香果根际土壤微生物群落的影响

以1年种植(新植园)和3年连作百香果园根际土壤作为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析根际土壤中的微生物群落结构组成和多样性变化,以期为克服百香果连作障碍提供指导。结果表明,相比新植园,3年连作园根际土壤细菌群落多样性显著降低,细菌群落丰富度,真菌群落丰富度、多样性增加。根际土壤微生物群落组成发生了较大变化,在门分类水平上,3年连作园根际土壤中变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度分别增加了5.86个百分点和2.21个百分点;放线菌门(Actinobacteria)减少了3.40个百分点,子囊菌门(Ascomycota)减少了28.41个百分点,而毛霉门(Mucoromycota)增加了14.73个百分点。在属分类水平上,3年连作园根际土壤中γ-变形菌纲中未分类属unclassified_Gammaproteobacteria、黄单胞杆菌科未分类属unclassified_Xanthomonadaceae相对丰度显著增加,酸杆菌门中Gp2相对丰度显著降低;子囊菌属(Archaeo...