牛体外受精胚胎工厂化生产技术的探讨

牛体外受精胚胎工厂化生产的目的是获得大量优良遗传性状的胚胎,用于胚胎移植。作者就该技术的5个主要环节,即活体采卵、体外成熟、体外受精、体外培养、胚胎冷冻及发展前景等作一综述。     

猪卵子体外受精方法研究

本试验分析研究了：（1）猪卵子体外成熟所需要的培养时间；（2）促性腺激素和猪卵泡液对猪卵子体外成熟的作用；（3）不同体外受精次数对猪卵子体受精率的影响；（4）不同精子获能辅助剂对猪精子体外获能的作用；（5）不同种类猪精液的体外受精能力。研究结果表明，猪卵子体外成熟所需培养时间是32－36小时，在体外成熟培养液中加入0.25IU/ml PMSG（或FSH）和10％猪卵泡液可以促进猪卵子体外成熟，在精子体外获能培养液中加入0.05mg/ml肝素，在体外受精培养液中加入2mg/ml咖啡因可以促进猪精子体外获能并可提高体外受精率，体外成熟后的猪卵子进行2次受精可以获得较高的体外受精率，本试验用新鲜射出精子，冷冻射出精子，新附睾精子，冷冻附睾精子对体外成熟猪卵子进行体外受精，受精后卵裂率（2－4细胞期）分别是24.26％、23.40%,22.65%和24.24%。     

牛卵母细胞的玻璃化冷冻研究

本试验通过牛卵母细胞玻璃化冷冻过程中采用载体、冷冻时卵母细胞所带颗粒细胞层数和其成熟培养时间这3个方面对牛卵母细胞的玻璃化冷冻进行了探讨。(1)不同载体的对比:玻璃OPS管和塑料OPS管冷冻效果较好。玻璃OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为91.2%、41.3%和14.52%。塑料OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为89.09%、40.90%和14.54%。(2)保留2￣3层颗粒细胞的卵母细胞玻璃化冷冻的冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为90.79%、40.13%和15.13%。(3)体外成熟培养22h的卵母细胞冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为94.14%、41.80%和15.23%。     

高产奶牛连续活体采卵及卵母细胞体外受精

在超声波扫描仪的指导下,用双孔型采卵针以 １４．７ ｋ Ｐａ 抽吸压经阴道对 ５ 头高产奶牛分别连续实施 ７ 次活体采卵,每 ７ ｄ １ 次,共采集卵子 ２１４ 个,占可见卵泡数的 ５３．９％ ,每次头均采集卵子 ６．１ 个。卵子经过体外培养、体外受精、体外受精胚体外发育培养,于体外受精后 ４８ ｈ 、１６８ ｈ 统计的卵裂率、囊胚发育率分别为 ７５．２％ 和 ２９．７％ 。研究结果表明,在超声波扫描仪指导下对奶牛连续进行活体采卵是可行的,所得卵子应用体外成熟、体外受精、体外培养技术,可生产用于冷冻或移植的胚胎。     

胚胎工程技术在畜牧业上的应用

胚胎工程或叫胚胎技术 ,是以胚胎移植为基础 ,以转基因动物为中心 ,通过人工操作胚胎 ,定向改变动物性状使之为人类造福的一系列生物技术的总称。主要包括 :胚胎移植、体外胚胎生产 (体外成熟、体外受精和胚胎培养 )、胚胎冷冻、胚胎分割、动物克隆、胚胎性别鉴定、胚胎嵌合、显微受精和转基因动物技术等。1　目前可以在畜牧业上应用的技术胚胎移植、体外胚胎生产 (体外成熟、体外受精和胚胎培养、胚胎冷冻 )、胚胎分割等胚胎工程技术在国外已经商业化 ,牛和羊的胚胎移植技术在我省的畜牧业上的应用前景最大。要开展胚胎移植技术 ,还需要开…     

EFS20/40和GP25玻璃化法冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚的效果

为了筛选适合用于冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚胎的方法,本研究采用EFS20/40法和GP25法对体外受精小鼠2细胞胚进行冷冻保存,并经解冻后进行体外培养,观察其胚胎发育至扩张囊胚的能力。其结果,虽然两种方法冷冻解冻后的正常胚胎回收率相近,但采用EFS20/40法冷冻解冻的胚胎在体外发育至扩张囊胚比率(84.9%)显著高于GP25法的54.8%(P0.05)。表明EFS20/40法适合用于小鼠体外受精2细胞期胚胎的冷冻保存。     

绵羊胚胎移植研究进展

概述了绵羊胚胎移植技术的研究进展，包括同期发情，超数排卵，胚胎的收集与移植，胚胎冷冻，卵母细胞的体外成熟，体外受精，胚胎的体外培养，核移植等技术的最新研究进展与存在的问题。     

猪胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术,可以有效地利用屠宰的青年母猪卵巢巾的未成熟卵,大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速我国良种猪群的繁殖是一项行之有效的胚胎工程技术。借鉴国内外实验室生产猪胚胎的经验及根据我们实验室的实践,本文比较详细地叙述了体外受精猪胚胎的生产过程,包括卵母细胞的获得、培养、精子获能、体外受精以及受精后的体外培养、冷冻保仃与移植等。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟、以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞全外成熟与标志的某些理论上的突破性；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择冷冻解冻精液的体外获能、精了的体外受精力，以及体外的异常受精，还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种     

狐狸胚胎生物工程研究进展

胚胎移植及其它生物技术研究已广泛涉及到各种哺乳动物,该技术应用于狐狸等毛皮动物上,利用胚胎生物技术可获得较高经济价值,另一方面,可将种间胚胎移植等生物技术应用到濒危动物上,为拯球和保护濒危动物提供可借鉴的模式。本文主要综述了狐狸胚胎生产过程中的超数排卵、胚胎收集和涉及体外受精技术的卵母细胞体外成熟培养、体外受精、胚胎体外发育培养以及胚胎移植和胚胎冷冻技术等,探讨狐狸胚胎生物工程的研究现状和应用前景     

试管水牛技术研究

水牛卵巢卵母细胞经体外成熟培养、体外受精和受精卵在体外培育的胚胎移植给受体母水牛,结果表明：①卵母细胞体外培养成熟率71．6％、受精分裂率52．8％、囊胚率(占授精卵母细胞)27．2％。②双鲜胚移植受胎率36．2％(30．0％～44．8％),双胎率24％;双冻胚移植受胎率20．0％;生产试管水牛24头,全部成活,其中冻胚试管水牛3头;双胞胎3对。③胚胎冷冻方面：采用玻璃化胚胎冷冻技术,冷冻胚胎解冻后存活率64．4%。     

奶牛体外受精胚胎的不同培养方法对比试验

以屠宰场奶牛卵巢为试验材料,研究体外、体内培养法对体外受精胚胎发育的影响。(1)体外受精胚胎在体外培养体系是否加输卵管上皮细胞单层(颗粒细胞单层)(2×106个/mL)的培养液中培养与临时受体绵羊体内培养对比试验。结果显示:在培养的第8天囊胚发育率无显著差异,体外培养体系囊胚形成主要集中在第8天(受精日为第0天)。体内培养体系囊胚的形成多数在第7天。加体细胞的体外培养体系与体内培养法囊胚生成率无显著差异,但却显著好于不加体细胞的简单体外培养法。(2)进行两种方法生产胚胎的程序冷冻、解冻敏感性试验。结果显示:体内培养法和普通体外法生产的胚胎解冻后存活率(90%、60%)和囊胚孵化率(85.7%、44.4%)存在极显著差异(P<0.01)。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘卵母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟，以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞体外成熟状态与标志的某些理论上的突破；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择、冷冻解冻精液的体外获能、精子的体外受精力，以及体外的异常受精；还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种和胚胎克隆等方面的应用前景     

奶牛体外受精胚胎的不同培养方法对比试验

以屠宰场奶牛卵巢为试验材料，研究体外、体内培养法对体外受精胚胎发育的影响。①体外受精胚胎分别在加输卵管上皮细胞单层和颗粒细胞单层（2×106个/ml）的体外培养体系的培养液中培养与临时受体绵羊体内培养对比试验。结果显示：在培养的第8 d囊胚发育率无显著差异，体外培养体系囊胚形成主要集中在第8 d（受精日为第0 d）。体内培养体系囊胚的形成多数在第7 d。加体细胞的体外培养体系与体内培养法囊胚生成率无显著差异，但却显著好于不加体细胞的简单体外培养法。②进行2种方法生产的胚胎的程序冷冻、解冻敏感性试验。结果显示：体内培养法和普通体外法生产的胚胎解冻后存活率（90%；60%）和囊胚孵化率(85.7%；44.4%)存在极显著差异（P<0.01）。     

己酮可可碱和血小板激活因子对冷冻保存的大熊猫精子受精能力的影响

在Ham’s F-10培养液中,添加了不同剂量的己酮可可碱(PF)或血小板激活因子(PAF),与大熊猫冷冻保存后解冻的精子在37℃水浴中孵育,通过测量孵育不同时间精子的活力、存活时间、顶体反应率、质膜完整率和异种穿卵率,来探讨PF、PAF对大熊猫冷冻精子体外受精能力的影响,结果显示:己酮可可碱、血小板激活因子均能影响大熊猫冷冻精子体外受精能力。其中:己酮可可碱以1 mg/mL处理剂量对提高大熊猫冷冻精子体外受精能力效果较好,总存活时间达(15.33±4.73)h,培养4h时体外异种穿卵率达51.44%,培养6 h时体外异种穿卵率为7.49%,与对照组差异极显著(P<0.01),并优于其它处理组;PAF 50 ng/mL处理剂量下的各质量评估指标优于100 ng/mL处理,但用PAF处理精液的时间超过2 h后即引起精子质量的显著下降。     

犬科动物繁殖生物技术研究进展

犬科动物繁殖生物技术的研究远远落后于其他哺乳动物,因为犬科动物为季节性单次发情,其生殖生理有独特性,这使得犬科动物繁殖生物技术面临着一些困难,尤其是卵子和胚胎在体外培养及发育的效率很低。本文综述了犬科动物卵母细胞的成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)和体外胚胎生产(IVP)、精液冷冻和人工授精、胚胎移植及克隆等的研究进展。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术

本文综述了十几年来牛的卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞采集及成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等环节,并且对影响该技术的主要原因进行了分析,对体外受精在家畜育种中的应用提出了展望。     

大鼠体外受精技术

体外受精技术在多种哺乳动物已取得成功并获得广泛应用。大鼠由于其本身的特殊性,体外受精及随后的胚胎培养一直比较困难,国内关于大鼠体外受精方面的研究更是少有报道。文章主要从卵母细胞体外成熟培养、精子获能、受精、受精卵体外培养及胚胎移植等方面着手,对国外大鼠体外受精的研究现状做一概述。     

牛卵母细胞体外受精和培养技术

本文综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等,并且对影响该技术的主要原因进行了分析。     

大熊猫卵泡卵母细胞体外受精的初步研究

用抽吸法和切割法采集非发情季节病亡大熊猫的卵泡卵母细胞,经体外成熟培养后,用大熊猫冷冻精液进行体外受精。结果表明∶（１）在非繁殖季节,大熊猫卵巢中小腔及大腔卵泡卵母细胞仍较丰富,其大腔卵泡卵母细胞可在体外培养成熟;（２） 大熊猫的卵母细胞平均直径为（１４１±６．７）μｍ ,其胞质富含卵黄颗粒;（３）自配 Ｐａｎｄａ Ｉ Ｉ号获能液（含丙酮酸钠、肾上腺素等）可使大熊猫精子有效获能;（４） 大熊猫卵母细胞体外受精后,经培养可观察到第 ２ 极体,有的受精卵开始发生卵裂。