猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白P30作为ELISA诊断抗原,进行了ELISA诊断试剂盒的建立,并对互助县猪弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的139份猪血清抗体进行检测,共检出阳性血清8份,阳性率为5.76%。结果说明互助县猪群中存在弓形虫病的感染。     

检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法的建立

以在E．coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CPl5／60为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E．coli表达的CPl5／60抗原包被酶标板，用10％的兔血清进行封闭，以正常E．coli裂解上清液稀释待检血清。结果表明应用CPl5／60重组蛋白作为诊断C．parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

新孢子虫dNcSRS2重组蛋白间接ELISA的建立及其应用

利用新孢子虫体外重组表面蛋白dNcSRS2蛋白作为包被抗原，对各项条件进行优化，确定判定标准，建立了检测新孢子虫血清抗体的间接ELISA方法。经对多例血清检测表明，所建立的诊断试剂盒重复性好、特异性强、灵敏度高，与进口的IFAT及两种商品化ELISA试剂盒的检测结果相比较，符合率均达到92％以上。应用建立的ELISA方法对236份奶牛血清的新孢子虫抗体进行检测，阳性率为22％。这是国内首次利用重组蛋白建立的诊断试剂盒，该方法的建立将为牛新孢子虫病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。     

青海省牛弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白SAG1作为ELISA诊断抗原,建立了ELISA诊断试剂盒,并对青海省牛群进行弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的1856份牛血清进行弓形虫抗体检测,共检出阳性血清71份,阳性率约为3.83%。结果表明青海省牛群中存在弓形虫病的感染。     

猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立猪链球菌快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌谷氨酸脱氢酶蛋白(GDH)为抗原,建立了检测猪链球菌抗体的间接ELISA诊断方法.实验确定了最佳抗原包被浓度为6 μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其作用时间为60 min,兔抗猪酶标抗体的最佳稀释倍数为1:2 000,其作用时间为60 min;判定标准为S/P值≥0.210时判为阳性,S/P值≤0.166时判为阴性,介于两者之间的判为可疑.实验结果表明该方法特异性、敏感性和重复性均较好,适用于猪链球菌所有亚型的抗体检测,为猪链球菌的流行病学调查提供了一种简便快速的血清学检测方法.     

应用间接ELISA检测微小隐孢子虫抗体的研究

以在大肠埃希氏菌中表达的微小隐孢子虫(Cryptosporidum parvum)子孢子表面抗原CPl5为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA。试验筛选出的最佳反应条件为：大肠埃希氏菌CPl5抗原包被量为1μg/孔，用100mL／L的兔血清进行封闭，以正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。试验结果表明，应用CPl5重组蛋白作为诊断微小隐孢子虫抗体的抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

猪抵抗素（resistin）ELISA检测方法的建立

用纯化的可溶性重组resistin蛋白免疫健康家兔，制备抗血清，优化ELISA各反应条件（如工作浓度、温育时间、特异性试验），初步建立了检测猪resistin蛋白的间接ELISA方法。结果表明抗原、抗体最佳工作浓度为1∶200和1∶400，resistin最低检出限量为193.75 ng/ml；抗原和一抗、一抗和二抗的最适温育时间均为60 min。本试验建立的ELISA方法，具有灵敏度较高，特异性较好的特点，可作为猪组织和血清中resistin蛋白的检测方法。     

牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白.western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性.以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗最佳稀释倍数为1:8 000,建立了检测BCV抗体的间接ELISA方法.用该法对黑龙江一些地区采集到的256份牛血清样品进行检测,结果阳性率为65.23%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达95.31%.本研究建立的间接ELISA方法为BCV的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法.     

牛抵抗素多克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

用纯化的可溶性重组牛抵抗素蛋白免疫健康家兔,制备了多克隆抗体,并对多克隆抗体进行了纯化、效价测定、特异性检测,初步建立了检测牛抵抗素的间接ELISA方法。     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.     

Seroprevalences of antibodies to Neospora caninum and Toxoplasma gondii in zoo animals

Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular disease in dogs and abortions in cattle. Little is known about the prevalence of antibodies to this parasite in zoo animals. Sera from 556 animals, from 13 Czech and Slovak zoos were tested for antibodies to N. caninum and Toxoplasma gondii by indirect fluorescent antibody test. Antibodies to N. caninum were found in 31 of 556 zoo animals (5.6%), representing 18 of 114 species tested: Eurasian wolf (Canis lupus lupus), Maned wolf (Chrysocyon brachyurus), fennec (Vulpes zerda), cheetah (Acinonyx jubatus), jaguarundi (Herpailurus yaguarondi), Eurasian lynx (Lynx lynx), Indian lion (Panthera leo goojratensis), fisher (Martes pennanti), blackbuck (Antilope cervicapra), European bison (Bison bonasus), lechwe (Kobus leche), African buffalo (Syncerus caffer caffer), eland (Taurotragus oryx), sitatunga (Tragelaphus spekei gratus), Thorold's deer (Cervus albirostris), Eastern elk (C. elaphus canadensis), Vietnam sika deer (C. nippon pseudaxis) and Père David's deer (Elaphurus davidianus). Titres ranged from 1:40 to 1:2560. The highest prevalence 50% was found in family mustelidae of the order carnivora. Antibodies to T. gondii were detected in 193 of 556 zoo animals (34.7%) representing 72 of 114 species tested, with titres ranging from 1:40 to 1:40960. The highest prevalence 100% was found in families: hyaenidae, mustelidae, ursidae and viveridae of the order carnivora. The results of this study indicate that zoo animals have more exposure to T. gondii than to N. caninum. It is the first report of seroprevalence of antibodies to N. caninum in European zoo animals.     

猪乳汁中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪乳汁中抗猪染性胃肠炎病毒(TGEV)Ig A抗体的间接ELISA方法,本研究以TGEV重组N蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记羊抗猪Ig A为检测抗体,并采用方阵法确定包被抗原和待检乳汁的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了猪乳汁中TGEV Ig A抗体的间接ELISA检测方法。该方法检测稀释160倍的阳性乳清仍呈阳性;与猪流行腹泻和猪轮状病毒感染阳性乳清无交叉反应;批内和批间变异系数均小于10%。利用建立的ELISA方法与间接免疫荧光方法分别对134份临床样品进行检测,阳性检出率分别为58.2%(78/134)和59.7%(80/134),总符合率为85.6%。本研究建立的检测方法能够有效评估乳汁中TGEV Ig A抗体的水平。     

P49重组抗原检测旋毛虫抗体的问接ELISA方法建立

以纯化的本地毛形线虫P49排泄分泌(ES)重组蛋白包被微量反应板,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并确定了最适反应参数:抗原包被浓度4μg/mL;血清稀释度1:100,作用时间90 min;酶标二抗稀释度1:10 000,作用时间60min;最适封闭液为5 g/L聚乙烯醇(PVA);最适稀释液为含20 g/L PEG6000的PBS;底物最佳显色时间15 min.ELISA体系评价结果表明,该方法重复性好,灵敏度高,且可用于不同种株旋毛虫感染的P49血清抗体检测.     

用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体的建立与应用

近年来鸡痘发病率和死亡率有增高趋势，并且免疫失败的病例时有发生。为了探明接种疫苗和感染鸡痘病毒后抗体产生规律，我们建立了用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体，并经正交试验，确定了抗原、抗体的最佳反应条件，还用该法对2组人工感染、1组自然感染、1组疫苗接种和1组空白对照组鸡群的鸡痘病毒抗体进行了跟踪研究。     

检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立

为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法.经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1:400,酶标二抗的稀释度为1:1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2 348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXXA marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%.本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究.     

副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。     

牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查

为了调查我国牛新孢子虫和弓形虫的感染情况，应用新孢子虫酶联免疫吸附试验（ELISA）和弓形虫间接血凝试验（IAT）分别检测了来自国内10个省（市、自治区）的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清。结果显示，乳牛新孢子虫的抗体阳性率为17．2％，弓形虫的抗体阳性率为2．3％，没有检测到既有新抱子虫抗体又有弓形虫抗体的乳牛血清。各牛场所检乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率在0～34．4％之间。在水牛和肉牛血清中未检测到新孢子虫抗体和弓形虫抗体。流产乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率为20．2％，未流产乳牛为16．1％，其中血清抗体阳性乳牛主要在妊娠中晚期流产。各个年龄段乳牛血清的抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。不同妊娠胎次的乳牛血清抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。确认新孢子虫病在国内大部分牛场存在。     

Occurrence of antibodies to Neospora caninum and Toxoplasma gondii in dogs from Pernambuco, Northeast Brazil

A serological survey was carried out to assess the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in dogs from the State of Pernambuco. A total of 625 serum samples of dogs (289 from Paulista, 168 from Amaraji and 168 from Garanhuns) were tested by an immunofluorescence antibody assay for the detection of anti-N. caninum antibodies. A total of 177 (28.3%; IC 95%, 24.9-32.1) samples were positive. The seropositivity rates found in Paulista, Amaraji and Garanhuns were 26% (IC 95%, 21-31.4), 26.2% (IC 95%, 19.7-33.5) and 34.5% (IC 95%, 27.4-42.2), respectively. Of the 177 serum samples positive to anti-N. caninum antibodies, 170 were additionally tested for the presence of anti-Toxoplasma gondii antibodies and out of these 57.6% (IC 95%, 49.8-65.2) were positive. The results indicate that dogs from Amaraji, Paulista and Garanhuns are exposed to both N. caninum and T. gondii infections. The presence of dogs infected by N. caninum in Pernambuco represents a potential risk factor for the occurrence of outbreaks of abortion in cattle and small ruminants in this state. This study is the largest serological survey on the presence of anti-N. caninum antibodies in dogs carried out in Brazil and reports for the first time the exposure to N. caninum and T. gondii in dogs from Pernambuco.     

Prevalence of Antibodies to Neospora caninum and Toxoplasma gondii in Swedish Dogs

Neospora caninum is a newly described coccidian parasite which has been found in various species such as the dog, cattle, horse, sheep and goat. Morphologically it resembles Toxoplasma gondii with which it is related (Holmdahl et al. 1994), and with which it has earlier been confused. The life cycle of N caninum is only partially known. Tachyzoites and tissue cysts are the only known stages of the parasite, and transplacental transmission is the only known route of infection. Subclini-cally infected dams can transmit the parasite to their fetuses and successive offspring from the same mother might be born infected (Dubey et al. 1990b). Clinical neosporosis is mostly seen in pups or young dogs, and the majority or all pups in a litter are often affected. The disease is characterized by ascending paralysis of the legs, with the hind legs more severely affected than the front legs, paralysis of the jaw, difficulty in swallowing and muscle flaccidity and atrophy (Dubey 1992, Dubey & Lindsay 1993). Fatal infections with N caninum in dogs have been reported from many countries, e.g. Norway (Bjerkäs & Presthus 1988), USA (Dubey et al. 1988), Sweden (Uggla et al. 1989a,b) and the United Kingdom (Dubey et al. 1990a). Serological surveys for antibodies to N. caninum in dogs from Kansas, USA and England have shown a prevalence of 2 and 13%, respectively (Lindsay et al. 1990, Trees et al. 1993).