台湾桤木花粉生活力的测定方法初探

【研究目的】探讨台湾桤木花粉萌发的适宜培养基组成、培养温度及台湾桤木花粉生活力的快速测定方法。【方法】以台湾桤木新鲜花粉为试材,采用花粉离体培养萌芽法及TTC染色法、I2-KI染色法、过氧化物酶沉淀法等方法进行研究。【结果】台湾桤木花粉离体培养的适宜培养液为：10%蔗糖+100mg/L硼酸;最适培养温度为25℃。过氧化物酶沉淀法是快速测定台湾桤木花粉生活力的适宜方法。【结论】蔗糖和硼是台湾桤木花粉萌发的必要条件     

花粉的保存和生活力测定

花粉是种子植物所持有的生殖器官的一部分,是一种非常独特的细胞,是单倍体只具有简单的遗传物质,可以脱离母体独立生活,并具有象单细胞生物那样的特性。花粉的寿命很短,但在特殊的条件下保存,可在较长的时间内保持其生活力。如果将花粉存放在花粉库中,就能解决诸如制种中花时花期不遇的问题,并     

辣椒花粉生活力最佳测定方法的筛选

研究结果表明：I－KI染色法，醋酸洋红染色法，TTC染色法，过氧化物酶沉淀法和培养基离体萌发法等5种方法的适用测定现采花粉的生活力，而要测定贮藏花粉的生活力只能用TTC染色法和培养基离体萌发法。不论对何种来源的辣椒花粉进行生活力测定，以离体萌发法所得结果最为直观，稳定，是测定辣椒花粉生活力的最佳方法。     

番茄花粉生活力研究

本研究从制种实践出发,对番茄花粉生活力曲线及影响花粉生活力的诸多因素--不同采花时间、干燥时间、干燥方式、贮藏方式进行了研究.结果表明:冀东番茄杂交制种适宜的时期是5月26日以后.标准蕾、较大蕾的花粉生活力极低,为适宜的去雄时期;盛开的花花粉生活力最强,为适宜的采花时期;开花当天上午的花粉生活力极显著高于下午的新鲜花粉生活力,但干燥至第2天早晨,二者无显著差异,故开花当天上午、下午采花均可;室内自然阴干是花药的最佳干燥方式,干燥时间以8 h内为宜;花粉贮藏以低温干燥法最好.     

地中海仙客来花粉生活力研究

为进行种内繁殖及种间杂交,利用TTC染色法对4种不同类型的地中海仙客来花粉活力进行测定,同时利用I₂-KI染色法和花粉萌发法对H型花粉活力进行了测定。结果表明：TTC染色法是测定地中海仙客来花粉生活力的最佳方法。不同类型地中海仙客来在花粉活力及持续期上均存在明显差异;开花后第2~3天是采集花粉的最佳时期;H型及B型花粉开花后第5天,L型第7天,X型第12天花粉生活力仍在40%以上,可利用此花粉进行授粉。本研究为地中海仙客来杂交授粉提供了重要依据。     

玉米花粉和花丝生活力研究

将离体玉米花粉在不同温度条件下储存一定时间后,用于田间授粉,通过计算其结实率,研究离体玉米花粉在不同温度条件下生活力保持时间的长短.结果表明,低温可显著地延长离体玉米花粉的生活力,离体玉米花粉生活力保持在90%以上的储存期限是:24℃保存8h,4℃保存32h,-20℃保存56h.给吐丝后不同天数的果穗授粉,通过计算其结实率,研究玉米花丝生活力的保持时间和变化趋势.结果表明,吐丝后的1～6d,玉米花丝的生活力最旺盛,结实率可达95%以上.     

肉苁蓉种子生活力快速测定方法研究

采用单因素、多因素交互及正交试验设计等方法,对肉苁蓉种子生活力测定过程中的预处理方法四唑染色液浓度及pH值进行优化,初步建立了肉苁蓉种子生活力的快速测定技术,使测定程序简化、时间缩短,并确定38℃下去皮直接染色18 h的最适宜染色液pH值为6.4,TTC浓度为0.3%～1.0%.     

独一味种子生活力最优测定方法研究

为测定独一味种子生活力及最佳染色条件,建立独一味种子活力测定的快速方法,以野生独一味种子为材料,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法,通过单因素试验、正交试验研究不同浸种温度、浸种时间、染色温度、染色时间和TTC浓度对独一味种子生活力测定的影响。结果表明,5个因素对独一味种子生活力的影响依次为：染色时间>染色温度>TTC浓度>浸种时间>浸种温度;正交试验染色最佳条件为25℃水浸泡9 h、0.1%TTC、40℃恒温箱染色9 h。     

芒花粉的生活力及测定方法比较

本研究先后采用了花粉离体萌发法、FDA染色法和I2-KI染色法测定了芒离体花粉的生活力。结果表明：在离体萌发法中,离体花粉在培养5 min后即开始萌发,培养30 min后花粉管平均长度达到了145.77 μm。芒离体花粉的平均初始萌发率为82.6 %,但花粉生活力下降很快,室温保存90 min的花粉其萌发率已下降至3.0 %。因此利用离体萌发法能够准确有效地测定芒花粉生活力的变化规律。而利用FDA染色法和I2-KI染色法测定的芒花粉初始生活力与离体萌发法的结果基本一致,分别为84.6 %和86.6 %,但这两种染色法不适合用于跟踪测定花粉生活力的变化。     

陆地棉花粉及柱头生活力的研究

许多学者对棉花的开花授精过程做了大量研究，并研究比较了多种测定棉花生活力的试验方法。研究结果表明，花粉及柱头生活力受外界条件影响较大；自然条件下，花粉生活力为1d，柱头生活力仅限于开花后2d内。但以往研究大都局限于室内试验，其考察指标为一定试验条件下的花粉萌发率或花粉管穿过花柱基部的孔洞数。如何在棉花开花季节采用适当授粉技术来最大限度地获得杂交种子，是棉花杂优利用高效制种的关键问题之一。     

20个芍药切花品种遗传多样性的AFLP分析

为了探索不同芍药切花品种之间的亲缘关系特征,利用荧光标记AFLP分子标记技术,采用9 对PstI /MseI 引物组合对20 个芍药切花品种进行了DNA遗传多样性分析。结果表明：9 对引物均显示多态性,共产生谱带733 条,其中多态性条带699 条,多态性位点平均为95.36%,Nei 基因多样性指数为1.4163~1.5552,平均1.4740;Shannon 信息指数为0.4197~0.4929,平均0.4490。经UPGMA聚类分析后,20 份芍药品种的Dice 相似系数0.458~0.741,在相似系数0.52 处,可将供试的20 个切花芍药品种分为5类。研究认为,药芍品种间的遗传差异较大,具有丰富的遗传多样性,为芍药品种分类及亲缘关系分析提供参考依据。     

杭白芍结实性状及籽油品质分析

分析杭白芍结实性状及其籽油品质,为芍药籽油专用品种培育及籽油开发利用提供理论参考。对杭白芍的结实性状相关性和籽油理化性质进行测试和分析,结果表明：（1）单心皮种子数和心皮长均与单株产量呈极显著正相关,蓇葖果数与单株产量呈显著正相关,分株数与单株产量呈显著负相关;主成分分析表明,前4个主成分累计贡献率达88.8768%。（2）籽油测试结果表明,种子含油率21.31%,油酸40.56%,亚油酸29.16%,亚麻酸22.11%,籽油不饱和脂肪酸91.83%,维生素E含量79.64 mg/100 g。因此,在选育高产品系时要重点关注单心皮种子数、心皮长和蓇葖果数等性状指标。杭白芍籽油具有较高的食用价值,可以作为一种新型的油料作物,具备深入研究推广的价值。     

芍药分生组织决定基因APETALA2(AP2)的克隆及生物信息学分析

花分生组织决定基因APETALA2(AP2)属于植物ABCDE模型基因,在花器官发育过程中起着重要的调控作用。为进一步了解芍药AP2基因的生物学功能,利用RACE扩增和测序技术克隆plAP2基因序列,利用生物信息学在线程序对其序列特征、蛋白结构及功能、亚细胞定位进行预测,并利用MEGA 5.0构建不同植物AP2分子进化树,最后利用qPCR检测其在内外花瓣中的差异表达情况。结果显示,克隆获得芍药AP2基因(plAP2)cDNA序列全长1 935 bp,其ORF全长为1 578 bp,编码525个氨基酸。蛋白结构与功能分析表明,plAP2蛋白为亲水性不稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,表明为非分泌蛋白;核定位信号位于氨基酸序列139-147(KKSRRGPRS);二级结构包括α-螺旋(24%)、β-折叠(19%)、β-转角(28%)和无规则卷曲(28%);plAP2蛋白存在8个糖基化位点和64个磷酸化位点,plAP2蛋白包含2个相同的保守结构域:AP2/(Ethylene-Responsive factors,ERF)(151-213aa和243-306aa)。亚细胞定位主要在细胞质(45.0%)中,少量分布于微体、线粒体基质间隙和溶酶体;进化树分析表明,芍药AP2基因与牡丹高度同源且亲缘关系最近;qPCR检测显示外瓣AP2表达量均极显著高于内瓣(P0.01)。克隆出芍药AP2全长cDNA序列,系统地揭示了plAP2蛋白基本结构、功能位点区域、细胞定位以及组织表达情况,为今后深入研究plAP2基因功能提供基础素材和理论参考。     

羧甲基壳聚糖和纳米银对芍药切花观赏品质及生理特性的影响

以芍药切花为试材,以蒸馏水为对照(CK1),3％蔗糖+200 mg/L柠檬酸+25 mg/L水杨酸为基本瓶插液(CK2),探索在基本瓶插液中添加200 mg/L羧甲基壳聚糖(CMCS)和20 mg/L纳米银(NS)对芍药切花瓶插品质及采后生理的影响.结果表明:两种药剂均可改善切花水分平衡状态,提升观赏品质.与对照(CK1)相比,CMCS和NS处理芍药切花最大花径分别增加2.17 cm、3.19 cm,瓶插寿命分别延长3.01 d、4.26 d,最佳观赏期分别延长1.87 d、2.75 d.两种杀菌剂对芍药切花生理特性的调控作用相似,均提高了芍药切花花瓣的可溶性蛋白质含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等保护酶活性,降低了相对电导率、丙二醛(MDA)及游离脯氨酸(Pro)含量,其中20 mg/L NS处理的保鲜效果最好.     

芍药查尔酮异构酶基因(CHI)克隆、密码子偏好性分析以及蛋白结构功能预测

为了丰富芍药CHI基因研究的基础数据,首先利用RACE技术对芍药CHI基因的CDS区进行克隆,并通过EMBOSS软件分析序列的密码子偏好性,其次利用生物信息学软件和在线数据库对芍药CHI进行蛋白结构与功能预测。结果表明,克隆获得芍药CHI基因c DNA序列长度为898 bp(Gen Bank序列号:JN119872),芍药CHI基因偏好使用以A/U结尾的密码子,28种偏好密码子(RSCU1),其中偏好性较强的有UUG、UGU、CAU、AGA、AGG、CGG(RSCU≥2),在密码子的使用频率上,芍药CHI基因与酵母、大肠杆菌等模式生物基因组的差异均大于拟南芥基因组。芍药CHI为非跨膜亲水的稳定蛋白,无信号肽,属于非分泌蛋白;主要分布在细胞质(45.0%)和微体(42.5%)中;无糖基化位点,14个磷酸化位点,其中第20位氨基酸处存在一个典型的磷酸激酶PKC,含有1个异构酶Chalcone保守结构域;二级结构包括α螺旋(39%)、延伸链(20%)、β-转角结构(13%)和无规则卷曲(27%);三级结构呈β-三明治折叠形成的倒置花束。发现了一个异构酶催化活性区域和一个重要的特异性蛋白质激酶PKC位点,为今后深入研究CHI基因功能提供有利的基础资料,此外,拟南芥真核表达更适合作为芍药CHI基因的外源表达系统。     

Comparison of different pollen viability assays to evaluate pollen fertility of potato dihaploids

Summary The main obstacle in breeding potato (Solanum tuberosum L.) dihaploids is the severe limitation of male fertility. To determine pollen viability assays that correlate well to fertility in crosses, results of five different pollen viability assays were compared by correlation analysis with fruit and seed set characters in test crosses, and to pollen tube growth in situ (PL-test). The methods used were: staining the pollen cells with carmino acetic acid (CAA-test); in vitro pollen germination (PG-test); and detection of pollen staining rates after incubation with fluoresceine diacetate (FDA-test), 2-3-5-triphenyle tetrazolium chloride (TTC-test), and 5-bromo-4-chloro-3-indolyle--galactoside (X-Gal-test).The results of test crosses and pollen tube growth in situ correlated with the results of all other assays with the following ranking, from highest to lowest: enzyme activity assays (X-Gal-test, FDA-test, TTC-test), in vitro pollen germination (PG-test), and pollen staining by CAA. The newly developed X-Gal-test for monitoring -galactosidase activity showed the least variation of all assays investigated. Thus, this highly reproducible simple procedure is recommended for male fertility screening.Abbreviations B/F Berries obtained per 100 flowers - CAA Carmino acetic acid - FDA Fluoresceine diacetate - PG Pollen germination rate in vitro - PL Pollen tube growth in situ - S/B Seeds per berry - S/F Seeds per pollinated flower - TTC 2-3-5-triphenyle tetrazolium chloride - X-Gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyle--galactoside     

紫斑牡丹种子生活力测定

以紫斑牡丹(Paeonia rockii)种子为研究对象,通过浸种、剥除种皮、纵切、横切、剥出种胚等预处理,进行四唑溶液染色,探究四唑染色法测定牡丹种子生活力的最佳方案.结果表明:用始温50℃水浸种24 h,剥除种皮,放入15℃恒温培养箱培养24h,然后剥出种胚用0.5％的TTC染液染色6h为最佳方案.     

In vitro germination and viability of buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) pollen

An in vitro method for the germination of common buckwheat pollen was developed. Pollen grains were successfully germinated in an artificial medium consisting of 0.2 g each of MnSO₄, Ca(NO₃)2.4H₂O and KNO₃, 0.04 g H₃BO₃, 15 g sucrose and 30 g polyethylene glycol (molecular weight approximately 20,000) dissolved in 100 ml of double distilled water. The viability of pollen was assessed by in vivo and in vitro germination tests at 20 °C and 25 °C over a 38 h time period. Pollen grains were collected and germinated at 4 h intervals from freshly harvested flowers grown under 16 h day length and a constant temperature. Maximum pollen viability was found 2 h and 6 h after first light when plants were maintained at 25 °C and 20 °C, respectively. Viability, as measured by germination percentage, was similar at both temperature regimes. Some pollen remained viable for approximately 34 to 38 h in intact flowers, but all pollen lost viability in less than an hour when stored at room temperature without humidity control. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

Hybrid Tea-rose pollen. II. Inheritance of pollen viability

Summary Pollen viability was evaluated in about 500 seedlings originating from 31 crosses between nine commercial Hybrid Tea-rose varieties. The data indicated that pollen viability was inherited additively.     

Cytochemical investigation of long-term stored maize pollen

Summary Maize pollen quality was investigated after long-term storage both in a refrigerator and in liquid nitrogen by a combination of viability tests and cytochemical methods. Determination of the activities of a number of enzymes involved in important metabolic pathways was carried out. Quinone formation was also studied, as some products of secondary metabolism affect pollen grain viability. One year of pollen storage in liquid nitrogen had little effect on the activities of oxidoreductases and hydrolases and had no significant effect on pollen grain viability evaluated by acetocarmine, neutral red and acridine organe. Only the FCR test showed slightly decreased viability. After one and two years of storage in a refrigerator, pollen grain viability, tested using acetocarmine, neutral red and acridine orange, did not change substantially. Simultaneously the FCR test showed a considerable decrease in pollen grain viability. Long-term storage in a refrigerator resulted in the loss of cytochrome oxidase activity and rise of alcohol dehydrogenase, lactate dehydrogenase, peroxidase and polyphenoloxidase activities as well as of quinone formation.Abbreviations ADH Alcohol dehydrogenase - DOPA L-3,4-Dihydroxyphenylalanine - FCR Fluorochromatic reaction - FDA Fluorescein diacetate - GDH Glutamate dehydrogenase - IDH Isocitrate dehydrogenase - LDH Lactate dehydrogenase - NADI reaction with -NAphthol and DImethyl-p-phenylenediamine hydrochloride - 6-PGDH 6-phosphogluconate dehydrogenase