一株源于红树林根际土壤的枯草芽孢杆菌产淀粉酶条件及酶学性质研究

从三亚红树林保护区中筛选出一株产淀粉酶枯草芽孢杆菌,通过改变培养温度、初始pH值和盐浓度等因素研究该菌株的最适产酶条件,同时也分析了该菌株所产粗酶的热稳定性及pH稳定性。结果表明：该菌株属于中温产酶菌,产淀粉酶的最适温度为40℃,最适pH值为8,盐耐受能力可达到4%。酶学性质分析发现,该菌株产生的淀粉酶在40℃保温150 min后仍有70%以上的相对酶活力,在pH为9的环境中孵育1 h,相对酶活力可达到90%以上。这些结果表明,该产淀粉酶菌株对热带地区海水环境具有较好的适应性,其作为消化酶类饲料添加剂具有广阔的应用前景。     

1株产细菌素海洋乳酸菌的分离筛选及鉴定

采用牛津杯打孔法,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血弧菌、米曲霉为指示菌,对从南海海域中捕捞的华贵栉孔扇贝肠道中分离到的9株乳酸菌进行抗菌活性测定,并对活性菌株的发酵液进行排酸、排过氧化氢,以及胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K酶解实验,筛选出1株具有较强抑菌作用产细菌素的乳酸菌ZH-54.结合形态鉴定、生理生化特性实验以及16S rRNA序列同源性分析,鉴定菌株ZH-54为坚强肠球菌(Enterococcus durans),其16S rRNA在GeneBank的登录号为JX258806.     

一株木薯生淀粉糖化酶菌株的分离及酶学性质研究

从腐烂的木薯中分离得到1株降解生淀粉能力较强的菌株ITBB FC2,经形态学鉴定和18S rDNA序列分析,初步鉴定属于黑曲霉（Aspergillus niger）。该菌株用2％生木薯粉培养基摇瓶,37 ℃,200 r/min培养3 d后,发酵液葡萄糖含量为970 mg/L,生淀粉酶活力为495.04 U/mL。采用固体产酶培养基（麸皮 ∶ 水=1 ∶ 1）培养,所得酶活力为6 330 U/g。酶反应最适pH为4.0~5.0。Ca2+对酶活力有一定的促进作用。     

豆渣固体发酵产纳豆激酶的工艺优化及其部分酶学性质研究

研究纳豆菌固体发酵产纳豆激酶的工艺及其部分酶学性质.采用单因素和正交试验,对以豆渣为原料纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行优化,并利用最佳发酵工艺制备纳豆激酶粗品,对纳豆激酶的部分性质进行研究.结果表明固体发酵培养基最佳配比:豆渣:麸皮=5:2,初始含水量65%,接种量为10%,初始pH为8.0,培养温度30℃.采用最适培养基和优化工艺,在250 m1三角瓶中进行验证实验,纳豆激酶的酶的产率可达到1577U·g-1.酶学性质研究表明,最适反应温度为60℃,37℃以下稳定,最适反应pH为8.0,在pH7-9溶液中基本稳定.体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原.     

豆豉中5株产纤溶酶菌的筛选与鉴定

采用酪蛋白平板初筛的方法,从全国14种纳豆和豆豉中分离到39株具有蛋白酶活力的菌株;又以猪血粉平板进行复筛,并采用纤维蛋白平板法测定纤溶酶活力,得到5株产纤溶酶能力较强菌株,分别命名为CQDC-03、CWND-03、NCDC-02、YJND-01和FJDC-02。对其进行16S r DNA序列分析,结果表明:CWND-03、CQDC-03和Bacillus subtilis相似性为99%,NCDC-02和Bacillus subtilis相似性为98%。因而CQDC-02、CWND-03和NCDC-02认定为Bacillus subtilis,YJND-01和FJDC-02是否为Bacillus subtilis的新种还有待进一步鉴定,但确定其为Bacillus属。     

木聚糖酶高产菌株的筛选及其产酶规律研究

本研究采用透明圈比较法，从质粒转化变异菌种资源中纯化出1个木聚糖酶高产菌株。同时，采用单因子和多因子相结合的方法及DNS法，对该菌株的适宜发酵条件和产酶规律及木聚糖酶活检测体系进行了初步研究。结果表明：该菌株在改良培养基中的对数生长期在1-7h之间，产酶高峰期在8h左右，发酵液酶活达到344U／ml；木聚糖酶活力检测采用0．1mol·L^-1柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH值5．2—5．8，木聚糖浓度0．8％，温度60℃，DNS用量为2．0—2．5ml。     

木聚糖酶高产菌株的筛选及其产酶规律研究

本研究采用透明圈比较法,从质粒转化变异菌种资源中纯化出1个木聚糖酶高产菌株。同时,采用单因子和多因子相结合的方法及DNS法,对该菌株的适宜发酵条件和产酶规律及木聚糖酶活检测体系进行了初步研究。结果表明:该菌株在改良培养基中的对数生长期在1～7h之间,产酶高峰期在8h左右,发酵液酶活达到344U/ml;木聚糖酶活力检测采用0.1mol.L-1柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,pH值5.2～5.8,木聚糖浓度0.8%,温度60℃,DNS用量为2.0～2.5m l。     

1株产纤维素细菌的初步鉴定

从果胶中分离得到1株产纤维素膜的菌株AXI,对其16SrRNA序列进行克隆和分析.结果表明,菌株AXI的16SrRNA序列与醋杆菌属菌种的同源性达99%,结合其形态和生理生化特征研究结果,将其归为醋杆菌属.     

一株产铁载体香蕉拮抗内生细菌的分离及鉴定

研究了羽叶决明(Chamaecrasta nictitans)替代麸皮栽培鸡腿菇(Coprinus comatus)对其产量、绝对生物学效率、基物失重、呼吸消耗及木质纤维素转化的影响。结果表明,羽叶决明牧草替代20 %麸皮(B2)栽培鸡腿菇的产量和绝对生物学效率最高,分别为235.2 g/袋和8.86 %。覆土前和采收后的基物失重、呼吸消耗都以B6为最高,分别为13.50 %、13.50 %和35.03 %、30.71 %,其纤维素转化率也最高,为33.61 %;木质素转化率以B1为最高,达78.25 %;半纤维素转化率以B2为最高,为44.10 %。回归分析表明,羽叶决明替代麸皮栽培鸡腿菇的产量、绝对生物学效率和半纤维素转化率与替代比例呈抛物线相关,而基物失重、呼吸消耗及木质素、纤维素转化率与替代比例呈线性相关。     

一株茶树冰核细菌拮抗菌的筛选及鉴定

从茶园土壤中分离出菌株TS1,通过含菌平板测定,确定其对茶树冰核细菌具有拮抗作用。通过菌株的形态特征观察、生理生化指标测定、16 S rDNA序列测定及序列同源性分析,将TS1菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。明确了拮抗菌的种属,为茶树霜冻害的生物防治奠定了基础。     

一株产铁载体橡胶树拮抗细菌的分离鉴定及耐药性分析

从橡胶树根部分离到一株拮抗细菌Czk1,该菌株在铬天青(CAS)检测平板上产生较大的桔黄色显色圈,具较强的铁载体产生能力.对其进行生理生化鉴定、16S rDNA序列分析,测定7种常见抗生素的抗性.结合该菌菌落、菌体特征,生理生化指标及16S rDNA序列分析,鉴定该内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌对四环素、红霉素、氨苄青霉素、利福平、链霉素和卡那霉素高度敏感,对氯霉素表现抗性.     

青砖茶渥堆发酵中嗜热细菌筛选、鉴定及产酶特性研究

渥堆发酵是青砖茶独特品质形成的关键技术环节。对来自青砖茶渥堆发酵样品中的细菌进行高温筛选和鉴定。结果表明,通过筛选得到20株能在高温条件下良好生长的细菌,其中15株菌株能够在含茶汤的培养基中生长。3株菌株的最适生长温度为55℃,为嗜热细菌。结合嗜热菌株的形态特征和16 S rDNA基因序列分析,确定1株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,2株为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。经嗜热细菌发酵晒青毛茶的产酶试验可知,嗜热菌株在发酵茶叶时能够产生纤维素酶、淀粉酶和单宁酶,其酶活力分别可达215.69、259.28、4.85 U。     

香蕉纤维脱胶菌的筛选及其产酶条件的初步研究

香蕉纤维是纺织行业的一种新型纤维原料,其脱胶方法和工艺研究的缺乏制约着相关的开发与利用。本文就香蕉纤维的微生物脱胶进行了初步研究,采用透明圈法从土壤中筛选到一株具有降解香蕉半纤维素能力的放线菌菌株51181,利用它脱胶可去除香蕉纤维38%的胶质;对菌株51181产半纤维素酶的条件优化后,该菌株所产的半纤维素酶活达48.63U/mL,表明该菌株在香蕉纤维微生物脱胶及酶法脱胶方面具有一定的应用前景。     

木聚糖酶高产菌株的筛选及产酶条件

从本实验室保存的46株纤维素分解菌中筛选出1株可高效降解半纤维素的木聚糖酶高产菌株APS35,其酶活力高达31.801IU.g-1,比APS02（对照）高4.91倍。产酶条件优化结果表明,以水稻秸秆为底物,APS35产木聚糖酶的最适条件：培养温度28℃,培养时间3-4d,稻草粉与麸皮比4∶1,接种量10%,氮源为酵母膏（总氮量0.4%）,pH为4.0,吐温80浓度0.4%。在此条件下的木聚糖酶活力为32.024IU.g-1,与优化前无显著差异。     

产多酚氧化酶茶树内生真菌的筛选及产酶条件优化

以愈创木酚、α-萘酚、没食子酸、L-酪氨酸和单宁酸等5种酚类物质为底物,采用鉴别培养基筛选法从14株茶树内生真菌中初筛获得4株产多酚氧化酶的真菌。根据变色圈的大小、颜色深浅和摇瓶发酵的结果复筛获得产多酚氧化酶能力较强的菌株CSN-13。对菌株CSN-13产酶营养条件进行初步分析,结果表明,在供试的6种碳源物质中,以麸皮对菌株CSN-13产多酚氧化酶的促进作用最为明显;供试的5种氮源物质中,以硝酸铵的促进作用最为明显;在发酵培养基中添加茶水,对产酶有明显的促进作用。采用正交设计对CSN-13产酶发酵培养基进行初步优化,优化后的培养基配方为：麸皮（40βg·L^-1）、硝酸铵（15βg·L^-1）、茶水（4βg·L^-1）、KH₂PO₄（2βg·L^-1）、MgSO₄·7H₂O（0.5βg·L^-1）、无水CaCl₂（0.075βg·L^-1）、CuSO₄·5H₂O（0.01βg·L^-1）。采用优化后的培养基,菌株CSN-13在28℃下培养5βd,酶活力达到241βU·mL^-1·min^-1,比优化前提高8.5倍。茶树内生真菌菌株CSN-13及其发酵产酶培养基的研究为多酚氧化酶的进一步开发打下了基础。     

一株产酸的快生型大豆根瘤菌株

大豆和豇豆族的根瘤菌,一般均属于慢生型,在甘油酵母汁琼脂培养基上,菌苔生长6—7天才能达到丰满。其生理特性,在B、T、B甘油酵母汁琼脂培养基上产碱,石蕊牛乳上产碱,无清环。 我们将马桑属的马桑(Coriaria sinica Maxim.)根瘤洗净,经95％的乙醇灭菌一     

一株抗香蕉枯萎病DSE菌株的筛选鉴定及抗病机理初探

通过平皿和盆栽共生对抗法,筛选到1株对香蕉枯萎病具有防治作用的深色有隔内生真菌L-14,2种方法的防效分别达到72.4%和56.5%,接种该菌株可显著提高香蕉幼苗的鲜重。形态观察和28S r DNA序列比对分析结果表明,该菌株为裂壳菌(Schizothecium sp.)。使用该菌株浸根处理接种香蕉苗后,植株系列抗氧化保护酶如苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性均显著高于对照,而菌株L-14与香蕉枯萎病菌混合接种处理样品的PPO和SOD活性显著高于单独接种处理,表明接种该生防菌能增强香蕉的抗氧化防护系统,提高其对香蕉枯萎病的抗性。     

从北极环境中筛选并鉴定产EPA的细菌资源

为筛选出高产二十碳五烯酸(EPA,C20∶5)野生型菌株,以采自北极地区的176株细菌为材料,通过TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)显色法和气相色谱两种方法筛选出4株疑似产EPA的细菌,并通过气质联用进一步确认其产物为EPA。其中编号6-42的菌株EPA占总脂肪酸百分比含量最高(4.9%),经16S r DNA进化分析鉴定为希瓦氏菌(Shewanella baltica),并命名为S.baltica 6-42。通过研究温度和浅蓝菌素等培养条件对其EPA含量的影响,发现加入3μg/m L的浅蓝菌素后,0℃静置培养其EPA的总脂肪酸百分比含量和单位干菌含量最高,分别为11.5%和6.7mg/g,10℃振荡培养其单位体积培养液EPA含量最高为3.6mg/L。     

不产毒黄曲霉菌株的筛选鉴定及分子机理研究

本研究经过筛选分离得到一种不产毒的黄曲霉菌株CGMCC NO.14122,经产毒鉴定,该菌株在生长过程中不产生黄曲霉毒素;DNA序列分析表明,该菌的AflR基因启动子序列发生了较长片段的缺失突变。该菌株在生长和产孢能力上与野生型产毒黄曲霉菌无差别,证明该黄曲霉菌可以用于黄曲霉毒素污染的生物防控。     

一株螺旋粉虱病原真菌发酵基质的筛选和发酵条件初探

在对螺旋粉虱病原真菌-蜡蚧轮枝菌最佳发酵基质筛选的基础上,研究几个因素对固体发酵产孢的影响,采用单因子分析法和正交设计(L943)进行组合基质筛选。结果表明,单因子分析法筛选出花生饼单一基质和花生饼+小米+磷酸盐组合基质为最佳发酵基质,选取花生饼、小米、磷酸盐和稻壳作为4个组分因子;正交设计优化组合筛选出产孢量最高的组合为2号配方,分生孢子产量达2.96×1010个/g,该菌固态发酵最适温度为30℃,发酵适宜时间为14 d,增长光照处理时间对蜡蚧轮枝菌产孢有一定的促进作用。正交2号配方固体发酵基质用量最少,且固体发酵成本低,为蜡蚧轮枝菌的规模化生产提供理论依据。