新城疫病毒Ⅰ系毒株通过Caspase途径诱导鸡胚成纤维细胞凋亡

应用不同Caspases抑制剂研究了新城疲病毒（NDV）Ⅰ系毒株诱导鸡胚成纤维细胞（CEF）凋亡的途径。结果，用20μmol／L的Z—VAD．fmk、Z—IETD．fmk和Z—LEHD．fmk分别处理CEF后，均能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡；而用20μmol／L的Z—DEVD．fmk和Z—AEVD．fmk分别处理CEF,则不能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡。由此表明，NDVⅠ系毒株能通过Caspase依赖性途径诱导CEF凋亡，其中Caspase-8和Caspase-9在凋亡中发挥重要作用，而Caspase-3和Caspase-10在凋亡中不发挥作用。     

鸡胚成纤维细胞的冷冻保存

试验研究了不同的冷冻保护液、不同的平衡方法对鸡胚成纤维细胞活力的影响及细胞复苏后的培养情况。结果表明,冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ对细胞的保护效果差异不显著(P>0 05),冷冻保护液Ⅲ对细胞的保护效果优于冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ,并且差异极显著(P<0 01);平衡方法Ⅰ和平衡方法Ⅱ对细胞的存活率影响差异不显著(P>0 05)。复苏后的鸡胚成纤维细胞于体外培养时存在贴壁迟缓,前期生长速度较慢等现象。     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

鸡胚成纤维细胞传代的探讨

鸡胚成纤维细胞传代的探讨王建华（江西生物药厂）鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）能否传代这一问题，有的资料说不能传代。为了减少生产用蛋，降低产品的成本，在生产中，对ＣＥＦ能否传代进行了试验性探讨。１材料犊牛血清、７．５％ＮａＨＣＯ３、双抗、０．５％的细胞生长液...     

鸡胚成纤维细胞的常用制备方法

在工业化生产和实验室中,常用鸡胚成纤维细胞(Chicken Embryo Fibroblast CEF)来进行某些病毒的复制。鸡胚成纤维细胞的制备需要将鸡胚以无菌手术取出,用机械的方法将鸡胚剪成小块;洗去红细胞后用胰蛋白酶消化,再采取一些方法将之分散成单细胞悬液;洗去胰蛋白酶,将细胞悬浮在生长液中,计算细胞悬液中的活细胞数(一般情况下,每毫升生长液中含1×10~6至1.5×10~6个活细胞适宜于静止培养,而转动培养则需要2×10~6/ml至3×10~6/ml),分装到合适的培养器内,置温箱或温室内让细胞     

鸡胚成纤维细胞制备工艺改进试验

在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法。     

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。     

鸡新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性研究

目的:研究鸡新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性.方法:在成功制备鸡胚成纤维细胞单层的基础上,接种鸡新城疫病毒,继续培养72 h,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,并测定病毒血凝效价.结果:接种病毒24 h,部分细胞产生病变;48 h,部分细胞脱落;72 h细胞单层明显破坏,培养液中病毒血凝效价可达1:512.结论:鸡新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞后,细胞变圆、皱缩、折光性增强,胞内形成大量合胞体,直至单层彻底破坏.     

利用不同方法培养鸡胚成纤维细胞的研究

采用胰酶消化法和组织块培养法培养了大量优质的鸡胚成纤维细胞,并对培养的细胞进行了冻存和复苏,建立了一套较完备、快速的鸡胚胎成纤维细胞的培养模式。并探讨这两种培养方法的优缺点。     

玉米赤霉烯酮对鸡胚成纤维细胞的毒性作用

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0 μg·mL^-1 ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0 μg·mL^-1 ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。     

小鼠胚胎干细胞裂解液诱导鸡胚成纤维细胞发生重编程的研究

本研究采用小鼠胚胎干细胞(ESCs)裂解液与鸡胚成纤维细胞共孵育,通过形态学观察和多能性检测,旨在探讨小鼠ESCs裂解液逆转化鸡胚成纤维细胞为多能干细胞的可行性。结果表明:与小鼠ESCs裂解液共孵育的鸡胚成纤维细胞均变为圆形细胞,形成了42.33个细胞集落;经AKP染色以及Oct-4和SSEA-1免疫细胞化学染色,均呈阳性反应,表现出一定的多能干细胞特性;经核型分析表明这些细胞来源于鸡胚成纤维细胞。单独的重编程操作过程和与鸡胚成纤维细胞裂解液共孵育均无法将鸡胚成纤维细胞重编程为具有ESCs特征的细胞,说明参与重编程鸡胚成纤维细胞的物质来源于小鼠ESCs裂解液。因此,ESCs裂解液诱导体细胞重编程逆转化为多能干细胞的作用能够在小鼠和鸡之间发生。     

鸭病毒性肠炎病毒致鸭胚成纤维细胞发生凋亡作用的研究

研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNA Ladder检测表明,接毒组细胞具有分子量分别为180～200bp及其整数倍的凋亡梯带电泳图谱特征;电镜观察发现,接毒组细胞具有染色质浓缩、边移,胞浆严重空泡化,细胞核严重变形,形成凋亡小体等典型凋亡特征.上述研究结果表明鸭病毒性肠炎病毒具有显著的致鸭胚成纤维细胞发生凋亡的作用.     

鸡传染性法氏囊病病毒快速适应鸡胚成纤维细胞的研究

将鸡传染性法氏囊病病毒的鸡胚组织毒或法氏囊组织毒直接在鸡胚成纤维细胞(CEF)上盲传3～13代后。能产生特征性细胞病变效应(CPE)。病毒在含65℃灭能30分钟的犊牛血清的细胞生长液制备的CEF上传代,比在含有56℃灭能的犊牛血清的生长液制备的CEF上传代能早3～5代出现CPE,而得到适应;鸡胚高代毒比鸡胚低代毒更易适应CEF;法氏囊组织毒和鸡胚低代毒对适应CEF的进程没有显著差异。     

室温消化法制备鸡胚成纤维细胞的试验研究

鸡胚组织是组织培养最早被利用的对象。早年组织培养工作者，如Carrel等曾用鸡胚做过大量研究工作。目前，鸡胚成纤维细胞已被广泛应用于细胞和分子生物学研究的许多方面，这主要是由于成纤维细胞是最易培养的细胞，其良好的耐受性使之易于进行从基因转染到微注射等较多领域的研究。本试验经长期摸索、比较、找到一种制备鸡胚成纤维细胞的优化方法——室温消化法。     

新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性研究

为探讨新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株对鸡胚成纤维细胞(CEF)致病变特性的影响,采用细胞病变观察(CPE)、血凝试验(HA)和半数细胞培养物感染量(TCID50)测定等方法对新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株在CEF上的感染特性进行检测。结果表明:经鸡胚复壮的新城疫Ⅰ系毒株不管胰蛋白酶是否参与,均能在CEF上增殖并产生典型的细胞病变,主要以发生细胞融合和形成多核巨细胞为特征;而新城疫Ⅳ系毒株,必须在胰蛋白酶参与的情况下才能产生CPE,主要以胞浆内出现可见大小不等的空泡或颗粒为特征。新城疫Ⅰ系毒株与新城疫Ⅳ系毒株(胰酶参与)相比CEF培养上清液最高HA效价高2个滴度,TCID50也明显增高,证明新城疫Ⅰ系毒株在CEF细胞上的感染力更强。     

乳酸菌对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚成纤维细胞抗氧化功能的研究

为研究乳酸菌体外抗病毒作用,在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)模型上,分析比较了6株乳酸菌对细胞内两种抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,以及丙二醛(MDA)含量的变化,结果显示,与病毒感染对照组相比,6株乳酸菌均显著提高了细胞总抗氧化能力(P＜0.01)、显著降低了MDA含量(P＜0.01).研究结果表明,乳酸菌能促进细胞在病毒感染状态下产生更强的抗氧化能力来清除自由基,并减少自由基所引起的氧化损伤.     

绿色荧光蛋白在鸡胚成纤维细胞中的表达

应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-C1转染到培养至第二代的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,同时使用活体DNA染料Hoechst3334(2H342)对CEF细胞核荧光染色,通过荧光倒置显微镜和RT-PCR方法检测GFP的表达产物。在荧光倒置显微镜下可见CEF的胞质和核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质,在H342作用下,细胞核呈现蓝色荧光;转染细胞中转录产物经RT-PCR扩增后,在凝胶上可见与GFP基因片段分子量大小一致的条带。可见,GFP基因可以被转染至CEF中,并在CEF中表达。     

不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>传统法)。     

鸡胚成纤维细胞原代培养与纯化的初探

本文利用鸡胚成纤维细胞(CEF)进行原代培养与纯化,了解鸡胚成纤维细胞在一定生理状态下所需的各种条件,从而控制培养基的成分,选择最适合于鸡胚成纤维细胞生长的各种因素。在此实验中消化液的浓度及消化的时间是关键,此外实验过程的无菌也是保证实验成功的重要因素。