大围山微型鸡和艾维茵肉鸡骨钙含量及CaBP基因表达差异研究

钙结合蛋白(CaBP)可直接影响骨骼中钙的沉积,进而影响骨骼生长发育。为研究家鸡骨钙含量及其CaBP基因表达与骨强度的关系,选用大围山微型鸡和艾维茵肉鸡,分别测定4、8、12周龄时试验鸡的骨强度、骨钙沉积和小肠组织、软骨组织中CaBP基因的相对表达量。结果表明:4、8、12周龄时大围山微型鸡股骨骨强度、骨钙含量均显著高于艾维茵肉鸡(P0.05),且大围山微型鸡小肠组织、软骨组织中CaBP基因的相对表达量显著高于艾维茵肉鸡(P0.05)。相关性分析显示,骨钙含量与CaBP基因表达量和骨强度均呈正相关,且CaBP基因表达量和骨强度呈正相关。可见,具有较高的骨钙沉积是大围山微型鸡具有优良骨强度的重要原因,且CaBP基因可作为调控家鸡骨钙沉积的重要候选基因。     

12周龄大围山微型鸡与艾维茵肉鸡肌肉营养成分及LPL基因表达差异研究

为研究云南地方鸡种大围山微型鸡与艾维茵肉鸡肌肉营养成分中粗脂肪含量与脂蛋白脂酶(LPL)基因mRNA表达差异,屠宰同批12周龄大围山微型鸡和艾维茵肉鸡各20只,测定肌肉营养成分含量和LPL基因表达量。结果显示:在胸肌和腿肌中,大围山微型鸡粗灰分含量、粗蛋白含量、粗脂肪含量均显著高于艾维茵肉鸡,在胸肌和腿肌中大围山微型鸡水分的含量显著低于艾维茵肉鸡,且胸肌和腿肌中大围山微型鸡LPL基因表达量分别为3.98、5.72,均高于艾维茵肉鸡的3.70、3.54。可见,大围山微型鸡肌肉粗蛋白、粗脂肪等营养成分优于艾维茵肉鸡,LPL基因促进脂肪沉积,因此LPL基因可作为影响家禽脂肪沉积的重要候选基因。     

大围山微型鸡和艾维茵肉鸡肌糖原含量及PRKAG3基因表达相关性研究

肌糖原含量是影响肉质的一个重要因素,而PRKAG3基因在糖原合成和代谢过程中起着重要的作用。为研究鸡PRKAG3基因表达量与肌糖原含量的相关性,研究以大围山微型鸡为研究对象,以艾维茵肉鸡作对照,检测肌肉组织中PRKAG3 mRNA表达量和肌糖原含量。结果显示:大围山微型鸡胸肌和腿肌中PRKAG3 mRNA表达量和肌糖原含量均高于艾维茵肉鸡,且PRKAG3 mRNA表达量与肌糖原含量呈正相关。结果表明,鸡肌肉中PRKAG3基因对糖原的积累具有促进作用,且大围山微型鸡和艾维茵肉鸡肌肉中肌糖原含量的差异可能是由于遗传基础不同导致。因此,PRKAG3基因可能是一个重要的影响肉品质的候选基因。     

大围山微型鸡和艾维茵肉鸡PFKM基因表达量与pH值及肌糖原含量相关性研究

为研究家禽肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)m RNA表达量与p H_(45min)值及肌糖原含量的相关性,检测了大围山微型鸡和艾维茵肉鸡不同日龄肌肉组织中PFKM mRNA表达量、pH_(45min)值和肌糖原含量。结果显示:大围山微型鸡肌肉中PFKM mRNA表达量与肌糖原含量整体上均高于艾维茵肉鸡,而pH_(45min)值则是艾维茵肉鸡高于大围山微型鸡;PFKM mRNA表达量与pH_(45min)值呈显著负相关(P0.05),与肌糖原含量呈正相关;肌糖原含量与pH_(45min)值呈负相关,但相关性不显著(P0.05)。研究表明PFKM基因可能是影响家禽肉品质的重要候选基因。     

武定鸡和大围山微型鸡肌苷酸含量及ADSL基因表达差异研究

为研究不同云南地方鸡种肌苷酸含量与腺苷琥珀酸裂解酶(ADSL)基因m RNA表达差异,对武定鸡和大围山微型鸡肌肉组织中肌苷酸含量和ADSL m RNA表达量进行了检测。结果显示,武定鸡肌肉中肌苷酸含量显著高于大围山微型鸡,且同一鸡种中肌苷酸含量因性别、部位、日龄的不同表现出较大差异;武定鸡肌肉中ADSL m RNA表达量均高于大围山微型鸡,且ADSL m RNA表达量与肌苷酸含量呈正相关。表明ADSL基因是影响家禽肉品质的重要候选基因。     

大围山微型鸡与科宝肉鸡免疫球蛋白含量及CATH-2基因表达差异研究

试验以相同条件下饲养的4、8、12周龄的大围山微型鸡和科宝肉鸡为研究对象,分别测定其免疫球蛋白含量(IgA、IgG、IgM)及胸肌、肝脏、小肠中的CATH-2 mRNA表达量,比较二者之间的差异。结果显示:大围山微型鸡血液中免疫球蛋白含量总体上低于科宝肉鸡,两个鸡种随着日龄的增加IgA、IgG含量均呈现先下降后上升趋势,IgM含量呈现下降趋势,且两个试验鸡种在4周龄时IgA、IgM、IgG含量均不同程度的高于8、12周龄。CATH-2 mRNA表达量在两个鸡种间存在差异,大围山微型鸡胸肌和肝脏中CATH-2 mRNA表达量均低于科宝肉鸡,而小肠中CATH-2 mRNA表达量显著高于科宝肉鸡。结果表明:在相同饲养条件下,大围山微型鸡免疫机能强于科宝肉鸡,具有潜在的较强的抗感染能力。     

武定鸡和大围山微型鸡脂肪酸含量及FADSFADS2基因表达差异研究

脂肪酸是影响家鸡肉品质的重要风味物质,Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(FADS2)是不饱和脂肪酸生物合成过程中的关键酶。研究以武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,检测肌肉组织中脂肪酸含量及FADS2基因表达量,比较不同鸡种脂肪酸含量及FADS2基因表达差异。结果显示,整体上,武定鸡腿肌中饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)、不饱和脂肪酸(USFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(EFA)及总脂肪酸含量和FADS2 m RNA表达量均显著高于大围山微型鸡,且在部位和周龄上存在显著差异。研究表明,武定鸡风味比大围山微型鸡优良,FADS2基因是影响家鸡肉品质的重要候选基因。     

武定鸡和大围山微型鸡肌苷酸含量与PURH基因表达差异研究

肌苷酸(Inosinic acid,IMP)是影响畜禽肌肉鲜味的主要成分,对肉品质风味有重要影响。为探究IMP含量与次黄嘌呤核苷酸环水解酶(PURH)基因表达量的关系,试验以武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,在相同饲养条件下,于90、120、150日龄进行屠宰(公母各半),分别测定肌肉组织中IMP含量以及PURH mRNA表达量,并进行相关性分析。结果显示:随着日龄的增长,武定鸡和大围山微型鸡肌肉中IMP含量显著上升(P0.05),武定鸡肌肉中IMP含量显著高于大围山微型鸡(P0.05);武定鸡和大围山微型鸡母鸡肌肉中IMP含量均高于公鸡,胸肌中IMP含量均高于腿肌;武定鸡和大围山微型鸡肌肉中不同日龄PURH mRNA表达水平存在显著差异(P0.05),总体呈先升高后降低趋势,且PURH mRNA表达水平与IMP含量呈正相关。本试验结果表明:相同饲养条件下武定鸡肉品质优于大围山微型鸡,且PURH基因对肌苷酸的合成起关键作用。     

武定鸡与大围山微型鸡脂肪酸含量及SCD基因表达差异研究

脂肪酸是重要的风味物质,影响着鸡肉品质性状,硬脂酰辅酶A去饱和酶(Stearoyl-CoA desaturase,SCD)是合成单不饱和脂肪酸的关键酶,是调节肝脏脂肪生成和脂类氧化的关键控制点。研究以90日龄武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,检测肌肉组织中脂肪酸含量及SCD基因表达量结果显示,武定鸡肌肉中脂肪酸含量和SCD基因表达量显著高于大围山微型鸡,且在不同部位存在显著差异。研究表明,SCD基因是影响家鸡脂肪酸形成的重要候选基因。     

大围山微型鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及生物学特性研究

为研究大围山微型鸡骨骼肌卫星细胞的体外纯化、培养、鉴定方法及其生物学特性,试验采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法结合差速贴壁技术分离纯化出云南大围山微型鸡骨骼肌卫星细胞,进行体外原代和传代培养。观察细胞各个阶段的形态,通过生长曲线、诱导分化等手段研究骨骼肌卫星细胞的增殖与分化能力,利用RT-PCR以及免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定。结果显示:两步酶消化法适用于微型鸡骨骼肌卫星细胞的分离和获取,此法分离得到的微型鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Pax7。在生长培养基作用下,细胞增殖旺盛,经诱导分化后,细胞可融合成肌管。该试验方法对研究家禽骨骼肌细胞增殖、分化和骨骼肌生长、发育的细胞生物学机制具有一定科学意义。     

尼西鸡与艾维茵鸡肌肉营养成分及FAS基因表达差异研究

尼西鸡是云南省特色鸡种,为研究其与商品肉鸡肌肉营养成分及脂肪酸合成酶(FAS)基因mRNA表达的差异,选取20周龄尼西鸡和艾维茵肉鸡各20只,进行了肌肉营养成分含量和FAS基因表达量测定及差异分析,同时对粗脂肪含量与FAS基因表达量进行了相关性分析。结果表明:20周龄时尼西鸡胸肌和腿肌中粗灰分含量显著高于艾维茵肉鸡(P0.05),粗脂肪、粗蛋白在腿肌中的含量显著高于艾维茵肉鸡(P0.05),在胸肌中虽然高于艾维茵肉鸡,但差异不显著(P0.05);此外,两个品种鸡胸肌与腿肌的粗脂肪含量相比差异均显著(P0.05);且20周龄时尼西鸡胸肌和腿肌中FAS基因mRNA表达均显著高于艾维茵肉鸡(P0.05);尼西鸡和艾维茵肉鸡粗脂肪含量与FAS基因表达量呈正相关。由此说明尼西鸡肌肉营养成分优于艾维茵肉鸡,且FAS基因可促进脂肪沉积,因此FAS基因可作为影响家鸡脂肪沉积的重要候选基因。     

京海黄鸡Myf5基因表达谱及表达规律

为了探究Myf5基因的表达谱和表达规律,研究其可能的作用机理,本研究根据GenBank上的原鸡(Gallus gallus)Myf5基因cDNA序列,跨内含子设计1对荧光定量引物,采用实时荧光定量PCR技术检测Myf5基因在不同组织的表达情况,绘制其组织表达谱;并选取4个时间点,检测在高表达组织中的表达情况,以研究其表达规律。结果显示,无论是在公鸡还是母鸡中,Myf5基因均在胸肌和腿肌中的表达量最高。在公鸡的其他组织中表达量很低或几乎不表达,母鸡中,除在卵巢中有少量表达外,其他组织中表达量很低或几乎不表达。无论是在公鸡腿肌和胸肌中,还是在母鸡腿肌和胸肌中,Myf5基因的表达量总体呈下降趋势,在16周龄接近体成熟时表达量最低。本研究揭示了京海黄鸡(Gallus gallus)Myf5基因的表达谱以及随肌肉生长发育的表达规律,为进一步研究Myf5基因的作用机理、表达调控以及与MyoG基因相互作用机理奠定基础。     

武定鸡和大围山微型鸡免疫器官及IL-IL-8、IL-L-18、LEAP-LEAP-2基因表达差异研究

研究以相同饲养条件下的2、3月龄的武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,测定其血液免疫指标(C3、C4、IgA、IgM、IgG)、免疫器官指数及器官中IL-8、IL-18、LEAP-2免疫基因的表达,以比较二者之间的不同。结果显示:(1)大围山微型鸡血液免疫指标含量总体来说高于武定鸡,C3、C4、IgA、IgM含量随着月龄增加而下降,而IgG含量随月龄增加而增加。(2)武定鸡免疫器官重高于大围山微型鸡,且二者免疫器官重随月龄增高而增重;器官指数方面大围山微型鸡总体来说大于武定鸡。(3)IL-8、IL-18、LEAP-2 mRNA表达量在两鸡种不同月龄之间呈现完全不同的品种差异,其中IL-8、IL-18表达量整体表现为武定鸡高于大围山微型鸡。本试验验结果表明:在相同的饲养条件下,大围山微型鸡的免疫机能较强于武定鸡。     

TNF-α基因表达量对大围山微型鸡及武定鸡股骨强度的影响

家禽骨质特性是家禽重要的经济性状指标,研究显示肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人类及动物骨代谢有显著影响。为了揭示影响家禽骨强度的主效基因,研究以体重较轻、体型较小的大围山微型鸡以及大型鸡种武定鸡为研究对象,和艾维因肉鸡作对比,通过检测骨强度以及骨骼中TNF-α基因的表达量,研究TNF-α基因的表达量对大围山微型鸡和武定鸡股骨强度的影响。结果显示,4~16周龄大围山微型鸡股骨强度均显著高于武定鸡和肉鸡(P0.05),且武定鸡股骨强度高于肉鸡;每一阶段大围山微型鸡股骨软骨中TNF-α基因m RNA表达量显著低于其它两个鸡种(P0.05);相关分析显示TNF-α基因的表达水平与股骨强度指标呈负相关。可见,TNF-α基因对家禽的骨强度有重要影响,是影响家禽骨强度的重要候选基因。     

武定鸡和艾维茵肉鸡GS基因表达量与肌糖原含量及pH值相关性研究

为研究家禽糖原合成酶基因(GS)mRNA表达量与肌糖原含量及pH值相关性,试验检测武定鸡和艾维茵肉鸡肌肉组织中GS mRNA表达量、肌糖原含量及pH值。结果显示,武定鸡肌肉中GS mRNA表达量和肌糖原含量均高于艾维茵肉鸡,而pH值则相反;GS mRNA表达量与肌糖原含量呈正相关,且肌糖原含量与pH值呈显著负相关。可见,GS基因是影响家禽肉品质的重要候选基因。     

武定鸡和科宝肉鸡成骨细胞矿化及TNF-α基因表达差异研究

为研究武定鸡和科宝肉鸡成骨细胞分化、矿化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达差异,试验通过提取武定鸡和科宝肉鸡骨间充质干细胞,并诱导分化为成骨细胞,检测成骨细胞分化、矿化差异及TNF-α基因表达差异。结果显示:与科宝肉鸡相比,在骨间充质干细胞诱导为成骨细胞过程中,武定鸡成骨细胞矿化能力较强,且TNF-α基因表达量显著低于科宝肉鸡。研究表明:TNF-α可通过调控成骨细胞分化来影响矿化过程,进而影响骨骼强度。可见,TNF-α基因对家鸡成骨细胞矿化起着重要的作用。     

烟酰胺对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响

为了探究烟酰胺(NAM)对牛骨骼肌卫星细胞(BSMSCs)增殖与分化的影响,试验以体外培养的BSMSCs成肌分化模型为研究对象,用0,1,2,4,8 mmol/L烟酰胺处理BSMSCs(对照组及1,2,4,8 mmol/L烟酰胺组),采用CCK-8法筛选烟酰胺对BSMSCs作用的最适浓度,后续试验均以不添加烟酰胺作为对照组,最适浓度作为试验组,采用EdU试剂盒检测最适浓度烟酰胺对BSMSCs增殖的影响;光学显微镜下观察最适浓度烟酰胺处理的BSMSCs分化24,48,72小时时的肌管形态,采用Western-blot检测BSMSCs中肌球重链蛋白(MyHC)和肌原蛋白(MyOG)的表达水平,分析烟酰胺对BSMSCs分化的影响。结果表明：与对照组比较,BSMSCs的OD₄₅₀值随着烟酰胺浓度的上升而下降,4 mmol/L烟酰胺组OD₄₅₀值显著降低(P<0.05),8 mmol/L烟酰胺组OD₄₅₀值极显著降低(P<0.01),但8 mmol/L烟酰胺组的细胞存活率低于50%,超过药物对细胞的半数致死浓度,最终以...     

干扰lncbMD对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

旨在研究长链非编码RNA(lncRNA)对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。本研究以体外分离培养的鲁西黄牛胎牛原代骨骼肌卫星细胞为试验材料,体外诱导成肌分化,以前期高通量测序筛选的肌肉组织特异性表达lncRNA为靶标,通过RACE技术对其进行全长扩增,命名为lncbMD,对lncbMD进行生物信息学分析和亚细胞定位。收取增殖期和分化期第1、2、3天的细胞,提取RNA(每组设置4个重复)或蛋白质(每组设置3个重复),通过qRT-PCR检测lncbMD在牛骨骼肌卫星细胞分化进程中不同时期的表达情况。根据lncbMD的序列设计合成干扰RNA,转染牛骨骼肌卫星细胞干扰lncbMD的表达,利用EdU试验检测细胞增殖情况,qRT-PCR技术检测lncbMD干扰效果、lncbMD的mRNA表达水平,增殖标志因子Pax7、Cyclin D1以及分化标志因子MyoG、MyHC的mRNA表达水平,荧光倒置显微镜观察细胞生长情况。结果显示,lncbMD全长序列1 902 nt,位于牛基因组23号染色体上,不具有编码潜能,是一条未报道的lncRNA。在牛骨骼肌卫星细胞与肌管中均主要存在于细胞核,在牛骨骼肌卫星...     

干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

为研究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响,本试验以牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型为对象,以前期设计合成3个干扰RNA（si-MSTN-1、si-MSTN-2、si-MSTN-3）并对其进行干扰效果筛选为基础,将干扰效果极显著的si-MSTN-2（si-MSTN）转染牛骨骼肌卫星细胞,通过EdU染色法检测干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响;进一步对干扰MSTN的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,通过肌管形成状态和分化标志因子综合分析干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响：首先通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化时期的肌管形成状态,然后利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测牛骨骼肌卫星细胞分化标志因子MyoG和MyHC在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果显示,干扰MSTN后,牛骨骼肌卫星细胞中EdU阳性细胞率极显著增加（P < 0.01）,说明下调MSTN表达极显著促进了牛骨骼肌卫星细胞的增殖;牛骨骼肌卫星细胞诱导分化后形成的肌管数量和直径均呈现增大趋势,牛骨骼肌卫星细胞成肌分化标志因子MyHC在mRNA和蛋白水平的表达均极显著高于对照组（P < 0.01）,说明下调MSTN表达能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本研究结果表明,干扰MSTN可以显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖及成肌分化过程。本试验结果为进一步开展MSTN对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控机制研究提供了参考。     

共轭亚油酸对艾维茵肉鸡前体脂肪细胞增殖与分化的影响

试验采用酶消化原代培养脂肪细胞的方法培养艾维茵肉鸡前体脂肪细胞.通过细胞形态学观察、细胞计数、油红O染色等方法,观察共轭亚油酸(CLA)对肉鸡前体脂肪细胞增殖与分化的影响.结果表明:CLA对艾维茵肉鸡前体脂肪细胞增殖有显著抑制作用,而对其分化没有显著影响.