鸡源志贺氏菌的分离鉴定及耐药性研究

昆明地区某鸡场部分鸡群突发痢疾,并有小部分鸡群死亡,疑似肠道病原菌感染所致,将采集的12份病死鸡病料进行志贺氏菌的分离鉴定、生化试验及PCR鉴定,并检测分离菌的耐药性。结果表明,共分离鉴定出志贺氏菌5株,分离菌均能发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇,其中有1株菌能迟缓发酵发酵乳糖,有2株菌不发酵蔗糖;针对志贺氏菌特异性ipaH基因设计的1对引物,扩增出393 bp的目的条带,与预期大小一致;抗生素抑菌结果显示,5株志贺氏菌对加替沙星、头孢氨苄、恩诺沙星、氨苄西林和庆大霉素均产生了耐药性,并且是多重耐药,对卡那霉素和四环素的耐药程度处于中介,对氧氟沙星具有较高的敏感性。中药抑菌方面,5株分离菌对诃子、五味子和黄芩高度敏感,但是对大黄和白头翁处于低敏程度。     

牦牛源鲍氏志贺菌的鉴定及对BALB/c小鼠的致病性

本试验旨在对从待屠宰健康牦牛中分离的志贺菌进行鉴定及确定分离株的致病性.通过形态染色、培养特性、生化特性、血清型鉴定、16S rRNA基因序列分析以及BALB/c小鼠的LD50测定等方面对分离株进行系统鉴定,并对分离株进行电镜观察和药敏试验.结果显示,分离株形态染色、培养和生化特性符合志贺菌的特点,血清型鉴定为鲍氏6型志贺菌,16S rRNA基因序列系统演化分析表明,分离菌株与人源鲍氏志贺菌和宋内志贺菌亲缘关系近,而与其他动物志贺菌亲缘关系较远,分离株对BALB/c小鼠具有致病性,其LD50值为2.5×107.5 CFU,药敏试验结果显示分离菌株对常用抗生素无耐药性.本次试验首次从健康牦牛中分离的鲍氏6型志贺菌具有较强的致病性,与人源菌株亲缘关系较近,提示牦牛中分离的鲍氏志贺菌具有公共卫生学意义.     

鹅源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

对临床送检疑似鼠伤寒沙门菌感染的病例进行细菌分离,利用沙门菌所具有的种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴定,结合生化鉴定和血清型鉴定,并分析分离菌的耐药性。从4例病死鹅病料中共分离到4株细菌,经inv A PCR鉴定、生化特点和血清型鉴定确认为鼠伤寒沙门菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等药物敏感性较强,但对多黏菌素B、多西环素耐药。其中,有2个分离株表现出多重耐药性。     

南京地区仔猪源志贺菌分离鉴定与耐药性分析

为了分析南京地区仔猪源志贺菌血清型流行趋势与耐药性。采集南京地区养殖场中患腹泻仔猪的肛拭子、粪便等病料组织126份对志贺菌进行分离鉴定,采用人工感染试验、凝集试验和K-B药敏纸片法分别检测志贺菌的致病性、血清型分布及耐药性。结果显示,从126份病料组织中分离得到52株致病性志贺菌;分离52株致病性志贺菌属于4种血清型,福氏志贺菌1a和1b血清型为地区流行优势血清型,分别占致病菌株的30.1%、40.4%;分离52株致病性志贺菌对阿莫西林、氨苄西林、磺胺间甲氧嘧啶等9种药物耐药率在53.8%～98.1%;对头孢噻呋、头孢曲松、氟苯尼考等5种药物耐药率在9.6%～40.4%。说明该地区仔猪致泻性志贺菌以F1a血清型和F1b血清型为主,耐药性严重。本试验为该地区仔猪源致泻性志贺菌病的防控提供研究基础。     

杂交鲟类志贺邻单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在对鲟体内分离菌进行鉴定、致病力探究和耐药性分析。本研究从濒死鲟体内分离到1株细菌(NZ-2017),通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA基因分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。结果显示,NZ-2017为革兰氏阴性杆菌,其16SrRNA基因经测序及BLAST比对,显示其与类志贺邻单胞菌的同源性达99.70%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为类志贺邻单胞菌。药敏试验结果显示,分离菌对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、多西环素4种药物敏感,对卡那霉素、阿莫西林、泰乐菌素、复方新诺明4种药物耐药;5种耐药基因检测结果显示,该菌携带3种耐药基因:Sul1、Sul2和Intl1,与药敏表型相符。人工感染试验结果显示,该菌对小鼠有致病力。本研究对贵州地区鲟发病流行的病因作出了准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防和合理用药提供依据。     

杂交鲟类志贺邻单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在对鲟体内分离菌进行鉴定、致病力探究和耐药性分析。本研究从濒死鲟体内分离到1株细菌（NZ-2017）,通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rRNA基因分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。结果显示,NZ-2017为革兰氏阴性杆菌,其16S rRNA基因经测序及BLAST比对,显示其与类志贺邻单胞菌的同源性达99.70%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为类志贺邻单胞菌。药敏试验结果显示,分离菌对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、多西环素4种药物敏感,对卡那霉素、阿莫西林、泰乐菌素、复方新诺明4种药物耐药;5种耐药基因检测结果显示,该菌携带3种耐药基因：Sul1、Sul2和Intl1,与药敏表型相符。人工感染试验结果显示,该菌对小鼠有致病力。本研究对贵州地区鲟发病流行的病因作出了准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防和合理用药提供依据。     

2010～2012年苏皖两省鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

通过培养特性、生化反应、血清学试验及PCR检测,对2010年10月～2012年6月江苏、安徽两省送检的禽源病料进行鸡白痢沙门菌的分离鉴定,并对分离株进行药敏试验.结果从1 420份样品中分离鉴定出55株鸡白痢沙门菌;药敏试验结果表明,分离株对萘啶酸、羧苄青霉素、链霉素、磺胺异恶唑和氨苄西林等抗菌药物具有较高的耐药性,而对庆大霉素、头孢曲松、氯霉素和卡那霉素具有较强敏感性.上述鸡白痢沙门菌分离株中,有49株(89.09％)为多重耐药菌株,其中以四耐菌株比例最高(25.45％).本研究对于指导临床合理用药及控制鸡白痢沙门菌发生与流行具有重要的现实意义.     

鸡白痢沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

对临床送检的疑似鸡白痢的病例进行细菌分离,采用PCR方法扩增沙门菌特异的invA基因,结合血清分型和生化鉴定,分析分离株对药物的耐药性。结果共分离出7株细菌,分离菌可以扩增出invA基因的目的条带,均与沙门菌O1、O9、O12因子血清发生凝集反应,不能发酵乳糖,能够发酵葡萄糖,不产生吲哚,与沙门菌菌株的生化反应基本相符。由此判定该分离菌为鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离株对氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物、β内酰胺类、酰胺醇类药物的敏感性较强,有4个分离株为多重耐药菌株。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 阐明青海省大通县某鸡场病鸡发病原因,为奇异变形杆菌病防控提供参考。[方法] 无菌采集病鸡肝脏、脾脏和泄殖腔拭子等样品,接种普通琼脂和SS琼脂平板进行细菌分离纯化培养,挑取平板上生长的疑似菌落进行革兰染色镜检,再将分离的菌落接种生化鉴定管进行生化鉴定,同时通过PCR扩增16S rDNA和tuf特异性基因并测序。将分离菌接种雏鸡进行致病性试验,采用K-B法评价分离菌对27种抗菌药物的敏感性。[结果] 分离菌为短杆、长杆状多形性杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。PCR成功扩增出1 400 bp的16S rDNA,序列比对显示与奇异变形杆菌同源性最高,为99.9%。雏鸡致病性试验结果表明,该株奇异变形杆菌对雏鸡有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对哌拉西林、头孢吡肟和头孢噻肟等高度敏感,对环丙沙星、奥格门汀中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林和头孢唑啉有耐药性,提示该菌对头孢类药物高度敏感。[结论] 分离到的一株奇异变形杆菌对鸡具有较强的致病性,且对多种药物表现出耐药性。     

竹丝鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定与药敏试验

为查找广东某鸡场竹丝鸡雏鸡发病原因,对疑似鸡白痢沙门菌病残鸡进行细菌分离培养、聚合酶链式反应(PCR)鉴定及药敏试验。结果显示:该鸡场共分离获得2株鸡白痢沙门菌(S1、S2),鸡白痢沙门菌是鸡场此次疫病的主要病原;头孢他啶、头孢曲松、阿米卡星、卡那霉素、氟苯尼考、盐酸四环素、甲氧苄啶等抗菌药为2株分离株的首选药物,临床治疗建议避免使用阿莫西林、氨苄西林、链霉素。试验表明,对鸡白痢沙门菌的治疗应重视多重耐药性问题,通过药敏试验选择高敏药物指导临床合理用药。     

不同动物源志贺菌的分离鉴定及耐药性检测

采用常规法对青海省牦牛、藏羊、猪、鸡等4种动物新鲜粪便中志贺菌进行了分离鉴定,并检测其耐药性。结果显示,475份样品经分离培养、染色镜检、生化试验及血清型检测分离鉴定出72株志贺菌,平均分离率为15.16%(72/475)。血清学鉴定结果为,痢疾1~4型9株、痢疾1型25株、痢疾2型17株、痢疾5~8型15株、痢疾9~12型5株、宋氏2相1株。在刚果红琼脂培养基上27株为Crb+表型,45株为Crb-表型,与致死性试验无显著相关性。72株分离菌对15种抗生素的平均耐药率为28.15%。不同动物源菌株耐药性有较大差异,鸡源、猪源、羊源、牛源志贺菌耐药现象顺序由高到低。阿莫西林+头孢噻吩为主要耐药谱。氨基糖苷类抗生素(丁胺卡那)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)、头孢类抗生素(头孢他啶、头孢噻吩)可作为相关疾病的首选药物。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

一株马源宋内志贺菌的分离鉴定与耐药性分析

为鉴定马粪便中分离到的1株细菌种类,笔者结合形态学观察与序列分析鉴定细菌,采用PCR法检测分离其耐药基因,并使用药敏试验对分离菌进行耐药性分析。结果显示,分离菌株在MAC琼脂培养基和SS琼脂培养基上均呈半透明、光滑、边缘整齐的圆形小菌落,镜检可见分离菌呈两端钝圆的革兰阴性短菌;基于16S rDNA基因位点,分离菌的序列经比对后,与英国人源宋内志贺菌的序列同源性为100%,结合形态学观察结果,鉴定为宋内志贺菌;采用PCR法检测10种耐药基因,发现分离菌株携带4种耐药基因,分别为parC、gyrA、gyrB和blaCTX;采用9种药物对分离菌株进行药敏试验,发现分离菌株对氨苄西林、红霉素、庆大霉素、四环素等药物耐药,呈现多重耐药性;对头孢西丁、阿米卡星敏感。研究结果为志贺菌病的防治提供了基础参考。     

志贺氏菌检测和分群实时荧光PCR方法的建立

为对志贺氏菌属细菌进行快速、准确检测和分群鉴定,根据志贺氏菌invC、rfc、wbgZ和rfpB基因,分别设计引物和探针,建立了鉴定志贺氏菌属以及福氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌和痢疾志贺菌氏菌实时荧光PCR方法,同时将根据ompA基因设计的引物和探针作为内参照,并通过特异性试验和人工接种试验等对该方法进行验证。结果显示,该方法对17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100%的特异性;用增菌肉汤直接进行PCR检测,发现在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1～3 cfu/25 g(mL),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤8 cfu/25 mL、12 cfu/25 g和≤12 cfu/25 g;分离培养后再对可疑菌落进行实时荧光PCR鉴定,发现所有样品的检出限为1～3 cfu/25 g(mL),与传统培养法检出限一致。结果表明,该实时荧光PCR方法是一个快速、敏感、特异的检测方法,适合于志贺氏菌的常规检测分析。     

兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性研究

为探究兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性,本研究对从病兔中采集的病料进行细菌的分离培养、细菌特征性基因(Khe基因)的PCR检测、生化鉴定、药敏试验、致病性试验、毒力基因的扩增及序列分析对细菌分离株进行分析.结果显示麦康凯平板上生长有奶油状菌落且镜检为革兰氏阴性菌;Khe基因扩增为阳性;生化鉴定结果表明分离菌为肺炎克雷伯氏...     

鸡源志贺菌16SrRNA基因克隆、测序及同源性分析

目的:建立鸡源志贺菌的16SrDNA序列分析方法从而进一步从基因水平鉴定鸡源鲍氏志贺菌。方法:用PCR扩增出鸡源鲍氏志贺菌16SrRNA的部分基因(16SrDNA)并测序,将所获得的序列与GenBank中人志贺菌序列相比较,计算种间相似性,并构建志贺菌的系统发育树,对分离株进行分类与鉴定。结果:首次研究发现鸡源志贺菌的16SrDNA序列与已知的人鲍氏志贺菌同源关系最近,同源性达99·7%,与人福氏志贺菌的同源性为96·0%。结论:16SrDNA序列分析鉴定志贺菌是一种快速、可靠的方法。     

鸡源大肠杆菌的分离鉴定及耐药特性分析

为了分析鸡源大肠杆菌的耐药特性,对昆明地区3家养鸡场送检的疑似大肠杆菌病的200只鸡进行了剖检,从病鸡肝脏分离出77株病原菌,经常规生化特性鉴定和PCR分子鉴定,确定77株分离株均为大肠杆菌,利用PCR方法对分离株的耐药基因和耐药性进行了研究,同时进行了药敏试验。结果表明:在22种耐药基因中,除β-内酰胺类的OXA、SHV基因未检出外,有14种耐药基因的检出率为100%,其他耐药基因检出率在82.1%以上;在药敏试验中,分离株除对左氧氟沙星的耐药性较低外(48.1%),对试验所用其他药物均具有很强的耐药性(96.1%以上)。说明分离株对抗生素的耐药性更加严重了。     

志贺氏菌属环介导恒温扩增快速检测方法的建立及初步应用

为建立快速检测志贺氏菌属的方法,本研究针对其ipaH基因,建立了志贺氏菌属环介导恒温护增(LAMP)快速检测方法。利用该方法对50株细菌进行检测,结果显示7株志贺氏菌均为阳性,其它菌均为阴性,表明该方法具有高度特异性。灵敏度试验显示,对志贺氏菌纯培养菌的检测灵敏度为28cfu/mL,对污染食品中志贺氏菌的检测灵敏度为35cfu/mL。利用该方法对195份涉及肉类、奶类、豆制品及人工污染样品进行检测,共检出29份阳性样品,与细菌分离鉴定检测结果一致。该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高且成本低廉,具有良好的应用前景。     

河南驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性

为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。