宁夏枸杞内生真菌的分离及多样性分析

以枸杞为试材,采用组织分离法从不同品种、不同部位的枸杞组织中进行内生真菌的分离,根据培养性状、菌落、孢子等的形态特征和rDNA-ITS序列分析对分离菌株进行鉴定;根据枸杞内生真菌的相对频率、物种多样性指数、丰富度指数和相似性系数分析其组成特点。结果表明:21份枸杞样品中共分离得到363株内生真菌,这些菌株分属于链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、双极霉属(Bipolaris)、毛壳菌属(Chaetomium)、枝孢属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、青霉菌属(Penicillium)、光黑壳属(Preussia)、裂壳菌属(Schizothecium)、粪壳菌属(Sordaria)、戴氏霉属(Taifanglania)、梭孢壳属(Thielavia)、火丝菌属(Tricharina)和炭角菌属(Xylaria)14个属,其中链格孢属(Alternaria)、梭孢壳属(Thielavia)和曲霉属(Aspeirgllus)为优势属,分别占分离菌数的46%、14%和13%。枸杞植株各器官都有内生真菌分布,其中,茎部内生真菌多样性指数最大,为0.86,且果与茎部的相似性系数最大。不同枸杞品种间内生真菌分布存在差异,"宁杞1号""宁杞2号"内生真菌多样性指数和丰富度指数远远高于黄果枸杞和黑果枸杞。内生真菌群落组成的相似性结果表明,部分内生真菌具有一定的宿主和组织偏好性。枸杞体内含有丰富的内生真菌资源,其内生真菌具有很高的宿主特异性,而且其分布受生境影响。     

枇杷内生真菌多样性初步研究

以蒙自地区枇杷为试材,采用组织分离法和常规形态学鉴定法,对其内生真菌的种类组成、分布及数量变化进行了初步研究。结果表明:从枇杷1a生及多年生健康组织、1a生根腐病组织和叶斑病病叶组织中共分离获得144株内生真菌,共鉴定出16个属,分别为Acremonium、Alternaria、Aspergillus、Arthrinium、Cladosporium、Epicoccum、Fusiarium、Humicola、Monilia、Mucor、Nigrospora、Oidium、Penicillium、Phomopsis、Pythium和Sebacina;其中,Acremonium、Alternaria和Phomopsis 3个属为优势属。枇杷内生真菌在植株内的分布随器官、树龄、品种、病健组织不同而存在差异,具有丰富的多样性。     

光叶珙桐内生真菌的分离及其多样性研究

以光叶珙桐(Davidiainvolucratavar.vilmoriniana)为研究对象,分离了62株珙桐内生真菌,并根据菌株形态学方法,对分离的内生真菌进行了种属鉴定和多样性分析。结果表明,42株珙桐内生真菌分属于6个属,shannon多样性指数为1.52。     

深色有隔内生真菌对枸杞的接种效应

以"宁杞1号"枸杞为试材,采用盆栽试验,研究了LBF-2和LBF-27两种深色有隔内生真菌(DSE)对枸杞幼苗的接种效应。结果表明:2个DSE菌种对枸杞具有较高的侵染率,均在65.81%以上;2个DSE菌种可提高枸杞对缺水的忍耐性和树体发枝能力;接菌处理的鲜果单果重较对照处理提高了10.53%~24.56%,其中LBF-27接种处理的枸杞果实单果重最大;接种DSE可促进游离脯氨酸在枸杞叶片内的累积,降低丙二醛含量,提高枸杞的抗逆性。     

深色有隔内生真菌对枸杞根腐病菌抑菌活性

通过组织分离法从‘宁杞5号’枸杞健康根筛选出深色有隔内生真菌（DSE）菌株,采用两点对峙法、菌丝生长速率法、孢子萌发法和盆栽试验探究其对枸杞根腐病菌（Fusarium oxysporum）的抑菌活性,为枸杞根腐病的生物防治提供潜在的资源菌。结果表明,8株DSE菌株均可定殖于枸杞根部,形成典型的DSE结构,且对枸杞根腐病菌有明显的抑制作用;其中菌株S12(Cladosporium cladosporioides)对病菌菌丝生长的抑制率最高,为81.47%;8株DSE菌株发酵滤液和挥发物质对枸杞根腐病菌的生长均有一定抑制作用,其中菌株S12发酵滤液浓度为10%时对病菌菌丝生长的抑制率最高,达78.43%;菌株M1(Alternaria alternata)发酵滤液浓度为50%时对病菌分生孢子萌发抑制率最高,为91.48%;菌株M1产生的挥发物质对病菌菌丝生长的抑制率最高,达94.10%。盆栽试验中,菌株M1和S12均表现出较好的生防效果,防效分别达89.54%和83.17%,优于50%多菌灵湿性粉剂500倍液处理。本结果表明DSE菌株M1和S12可有效防治枸杞根腐病,具有良好的生防潜力和应...     

宁夏枸杞炭疽病病原菌的分子鉴定

以枸杞为试材,对宁夏枸杞炭疽病果、病叶进行了组织分离、致病性检测和分子鉴定研究。结果表明:分离获得4株菌株,经致病性检测,有3株菌株有致病性;经形态学鉴定3株致病菌株属炭疽菌属(Colletotrichum);利用真菌保守的rDNA-ITS序列进行扩增和同源性分析,3株致病菌株与胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的序列相似性达99.4%。     

地黄块根内生真菌的多样性研究

以产自河南温县的地黄块根为试材,采用平板分离法分离地黄内生真菌,通过形态学特征和核糖体转录间隔区(ITS)序列分析,对分离出的真菌进行分类鉴定;以内生真菌的分离率(IR)、定殖率(CR)、相对频率(RF)、多样性指数(H)及均匀度指数为指标研究地黄块根内生真菌的菌群组成及其多样性。结果表明:从地黄块茎中分离得到81株内生真菌纯化培养物,经鉴定28株为镰孢霉属Fusarium;19株为青霉属Penicillium;15株为茎点霉属Phoma;12株为链格孢属Alternaria;其它6株分别为赤霉属Gibberella、曲霉属Aspergillu,土赤壳属Ilyonectria、毛壳属Chaetomium。镰孢霉属、青霉属、茎点霉属、链格孢属为地黄块根内生真菌优势菌群,地黄内生真菌菌群组成具有一定程度的多样性。     

黄花倒水莲内生真菌多样性及抑菌活性分析

以桂林市灵川县的黄花倒水莲为试材,采用组织块分离法、ITS测序和平板对峙等方法,研究了黄花倒水莲内生真菌的菌群组成及抗菌活性,以期为开发生防菌提供参考依据。结果表明：从黄花倒水莲中共分离得到62株内生真菌,经分子鉴定属于29个属,优势属为刺盘孢属(Colletotrichum sp.)、间座壳属(Diaporthe sp.)、镰孢菌属(Fusarium sp.)和拟茎点霉属(Phomopsis)。筛选到10株对香蕉黑条叶斑病病菌、柑橘树脂病病菌、叶点霉病菌具有较强抑菌活性的菌株。药用植物黄花倒水莲具有较为丰富的抑菌活性内生真菌资源,其抑菌活性值得深入研究。     

石斛属植物内生真菌多样性及共生机理的研究进展

石斛属植物在其生活史中都离不开内生真菌,其与有益内生真菌形成互惠关系。现对近年来石斛属植物内生真菌的研究方法、内生真菌多样性、分子系统方法和共生机理研究等现状进行了概括和总结,并对其下一步研究应用提出了看法。     

青钱柳内生真菌分子鉴定及其抗菌研究

以广西百色野生青钱柳为试材,采用真菌形态学、rDNA-ITS、抗菌试验的方法,研究广西百色野生青钱柳内生真菌的遗传多样性和抗菌活性,以期了解广西百色青钱柳内生真菌的不同种群结构,筛选出具有抗菌活性的菌株。结果表明：从青钱柳植物中分离获得76株内生真菌,隶属于2门5纲12目19科25属,镰刀属(Fusarium)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、间壳座属(Diaporthe)为优势菌属;根、茎与韧皮部、木质部内生真菌多样性存在明显差异,茎部内生真菌的Shannon index(H′=1.605 6)、根部(1.016 7),远高于韧皮部(0.209 7)和木质部(0.266 7)。5株内生真菌至少对1种病原指示菌有抑菌活性,其中,Pezicula sp.826对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果最强,Pezicula sp.927对热带假丝酵母菌的效果最强。综上可知,青钱柳植物中蕴藏着丰富多样的内生真菌资源及有较强抑菌活性的内生真菌,可为寻找新型抗菌物质提供宝贵资源。     

十七份中美枸杞材料的SSR遗传多样性

以17份中美枸杞材料为试材,采用SSR分子标记技术对其进行遗传多样性分析,探索中美枸杞的遗传多样性。结果表明:筛选的20对SSR引物扩增得到46个等位变异,平均每对引物扩增得到2.3个等位点,多态性比率达75.44%,多态性信息含量变化范围在0.114 2(SSR111)~0.829 1(SSR22),平均0.377 2,说明中美枸杞的遗传多样性较低;聚类分析结果显示,在相似系数0.600处,所有供试材料被聚为一类;在相似系数0.730处,美国枸杞和中国枸杞分别独立聚类;在相似系数0.825处,兰山野生枸杞和国内其它枸杞分为2个类群;来自内蒙古和宁夏的枸杞也基本分组,但相似系数很高,说明所有供试材料遗传基础非常狭窄,聚类分析结果与供试材料区域来源有较好的一致性,同一栽培区域育成的品种在不同程度上聚为一类,不同品种间的亲缘关系与地区来源基本相对应。     

土壤因子对宁夏枸杞地理分布的影响

运用SPSS 18.0软件的因子分析功能,对收集到的影响宁夏枸杞分布的有机质、全量氮、全量磷、全量钾、速效氮、速效磷、速效钾、pH、全盐等土壤环境因素进行了分析,以期探讨影响宁夏枸杞地理分布的土壤主导因子。结果表明:肥力因子、土壤有机质因子和全盐3个公因子累积贡献率达78.44%,可信度高;同时得出肥力因子是影响宁夏枸杞地理分布的生态主导因子,因子总得分高的地区宁夏枸杞生长分布的适宜性强。     

宁夏枸杞花药培养胚状体的诱导

以宁夏枸杞新优品系为试材,利用花药培养技术,研究了不同基因型、激素配比、低温预处理、热激处理、添加活性炭对其胚状体诱导率的影响。结果表明:宁夏枸杞新优品系‘06-16’在基因型筛选中,诱导率最高为0.95%,通过对试验体系进行优化,2.0mg/L KT与0.2mg/L2,4-D的组合诱导率达到2.07%。4℃低温预处理3d或5d、33℃热激处理5d、活性炭浓度为0.8%,均能提高新优品系‘09-106’的胚状体诱导率。     

蓝莓根系内生真菌多样性的研究

山东是蓝莓种植大省,至2014年底,种植面积约3 000hm2,年产量约为5万t。为探讨山东栽培蓝莓根系内生真菌的菌群组成和分布特点,利用组织分离法从山东4个地区2个蓝莓栽培品种根系中分离内生真菌1 345株。利用形态特征和分子生物学方法鉴定为29属,其中卵菌1属,占0.45%;担子菌2属,占2.15%;子囊菌17属,占31.16%;无性型真菌9属,占60.82%;其余5.42%无法明确鉴定。结果表明:山东省栽培蓝莓根系内生真菌的菌群多样性丰富,其中以镰孢属Fusarium为优势菌群,分离频率为31.67%;木霉属Trichoderma、青霉属Penicillium、枝孢属Cladosporium、涛旋孢属Zalerion是亚优势种群。不同地区栽培蓝莓根系内生真菌的结构和组成存在一定差异。镰孢属Fusarium是2种栽培蓝莓根系内生真菌的优势菌群。多样性指数的分析反映出蓝莓根系内生真菌菌群的多样性水平存在差异,威海"杜克"的多样性指数(H′)和丰富度指数(R)最高,分别为2.835 9和4.264 3,泰安"杜克"的均匀度指数(E)最高,为0.939 1。由相似性原理得出,各地区之间的内生真菌相似性系数处于中等不相似与中等相似之间,威海和青岛之间的内生真菌菌群相似性最高,它们之间的Jaccard指数和Sorenson指数分别为0.57和0.73。     

五种拘杞植物胚乳培养三倍体的诱导研究

选取宁夏农林科学院枸杞研究中心培育的5种优质枸杞品种(系),研究了不同激素配比的培养基以及胚因子对不同基因枸杞胚乳诱导及分化的影响,以选择适合不同品种枸杞胚乳植株再生的最佳条件,从而进行三倍体育种。结果表明:5种材料都诱导出了愈伤组织,在不去胚情况下,最高诱导效率达到80.0%;将愈伤组织分别转入5种激素配比的分化培养基中,MS+0.2 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+3%蔗糖+0.4%琼脂为最适分化培养基,且宁杞3号分化率最高达10.7%;将分化出的绿色小芽转入1/2MS+0.01 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA生根培养基中诱导生根,15 d后形成再生植株。     

枸杞RAPD反应体系的优化

现以枸杞基因组DNA为模板,对其RAPD反应体系进行优化以确定最佳反应体系。结果表明:在总体积25μL中Mg2+(2.5 mM)、模板DNA(25 ng)、引物浓度(0.6μM)、dNTPs(0.25 mM)和TaqDNA聚合酶(2.0 U)时,PCR扩增效果最好并能获得较清晰的枸杞DNA指纹图谱。     

枸杞优良新品系NQ-2小孢子发生和雄配子体发育

利用常规石蜡切片法研究了枸杞优新品系NQ-2小孢子发生和雄配子体发育的过程。结果表明:枸杞新品系NQ-2花药壁发育类型为双子叶型,由表皮、纤维层细胞、中层细胞和绒毡层细胞4层构成,绒毡层为双重起源,发育呈二型性,属分泌型;小孢子母细胞分裂为同时型,四分体为四面体型;成熟花粉粒含2个细胞,具三孔沟型萌发孔。     

多效唑和矮壮素对枸杞的矮化效应

以宁杞1号、宁杞3号枸杞品种为材料,研究不同浓度多效唑、矮壮素对枸杞组培苗生长的影响,研究在相同栽培管理水平下,喷施次数对枸杞树体的影响。结果表明:矮壮素和多效唑对枸杞组培苗均具有生长抑制作用,多效唑浓度1 000 mg/L对宁杞3号组培苗的生长具有明显的抑制作用,多次喷施会持续对枸杞苗的生长抑制作用。