烟草赤星病拮抗菌株B75产生抗菌物质的条件

从烟草根际分离筛选到一株可产生抗烟草赤星病菌物质的枯草芽孢杆菌菌株B75。在以NB培养液进行试验时发现，B75在对数生长的中期开始产生抗菌物质，在生长的衰退期前存在一个产生抗菌物质的高峰期；在25～50℃、pH4．0～8．5范围内均可产生抗菌物质，其中30℃和pH6．0的培养条件下最适。不同的装液量试验结果表明，在三角瓶装液量为100ml／500ml时，是B75菌株菌体生长及产生抗菌物质的最适宜量。不同的碳、氮源试验结果表明，甘露醇、酵母膏最有利于B75菌株菌体生长，且产生的抗菌物质抑菌活性较强。     

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的发酵条件及其对杨树溃疡病的防治效果

本文研究了拮抗细菌吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia pyrrocinia菌株JK-SH007产抗菌物质的最佳发酵条件及其对杨树溃疡病的野外防治效果。结果表明,牛肉膏、蛋白胨是发酵培养基中最佳营养物质,有利于菌株JK-SH007抗菌物质的产生;培养基初始pH、培养时间、温度、培养体积、不同牛肉膏、蛋白胨组合等对菌株生长及其抗菌物质的产生有明显的影响,初始pH7、牛肉膏2g、蛋白胨20g、以1/2装液量装液、30℃振荡培养36h可获得较高产量的胞外分泌型抗菌物质;菌株JK-SH007的发酵液对杨树溃疡病的野外防效可达40.54%。     

枯草芽孢杆菌B-903菌株的研究Ⅲ.影响抗菌物质产生和积累的主要因素

培养液的初始 p H值直接影响 B- 90 3菌株的生长繁殖 ,从而对其抗菌物质的产生和积累产生重要影响。 p H值小于 5时 ,不利于细菌生长繁殖 ,滤液中抗菌物质活性弱 ;p H值在 6～ 8时有利于细菌的增殖 ,抗菌活性亦最强。培养过程中供氧条件与菌体繁殖和抑菌活性呈正相关 ,而培养液初始接菌量高时可缩短抗菌物质出现的时间。基本营养物质的初步筛选试验证明 :大米粉、豆饼粉、麦麸、酵母粉和 Ca CO3 及 KH2 PO4是发酵培养基中最佳的营养物质 ,可满足抗菌物质产生对碳、氮和矿物质的营养需求。B- 90 3的发酵过程可分为两个阶段 :在 30℃下 ,2 4小时内 ,细菌数量达最大值 ,p H值由低向高变化 ,但此阶段检测不出抗菌物质的活性 ;第二阶段 ,培养 41小时后 ,抗菌物质活性开始显露 ,至 112小时后达最大值 ,p H值也逐渐由高变低。培养过程中 ,p H值的变化对细菌繁殖和抗菌物质的产生与积累有明显的伴随关系     

吡虫啉胁迫对褐飞虱共生解脂假丝酵母抗性及敏感菌株生长的影响

为明确吡虫啉对褐飞虱共生解脂假丝酵母Candida lipolytica抗性及敏感菌株生长的影响,通过菌株培养、菌落观察和菌丝镜检等方法,比较了褐飞虱共生解脂假丝酵母不同菌株在含不同质量浓度吡虫啉的固体培养基上的菌落数,以及在液体培养基中的生长量差异。结果发现:不同质量浓度吡虫啉对褐飞虱共生解脂假丝酵母敏感和抗性菌株菌落生长均有抑制作用,且吡虫啉浓度越高,抑制作用越强。经500、1 000和2 000 mg/L吡虫啉处理4 d后,敏感菌株的菌落数量分别为对照的46.61%、27.58%和6.25%,均与对照差异显著;500和1 000 mg/L处理组抗性菌株菌落数量与对照无显著差异,而2 000 mg/L处理组与对照差异显著。经吡虫啉处理后,敏感菌株假菌丝形态变得不规则,部分假菌丝不舒展、萎缩或弯曲、顶端出现膨大,酵母出现空泡等,且吡虫啉浓度越高,不规则程度越明显;抗性菌株的假菌丝形态也有类似变化,但与敏感菌株相比,其菌丝体不规则形态的比例明显下降。500 mg/L吡虫啉处理对敏感和抗性菌株的生长量及菌丝干重均无明显影响,1 000和2 000 mg/L吡虫啉对不同菌株前期生长的抑制作用明显,但对后期生长影响不明显。研究表明,吡虫啉对褐飞虱共生解脂假丝酵母抗性菌株生长的影响显著小于对敏感菌株的影响。     

白菜黑斑病菌拮抗细菌LBC-2的筛选鉴定、发酵条件优化及田间防效

采用对峙法筛选得到一株对白菜黑斑病菌Alternaria brassicae具有强烈拮抗作用并具有较广抗菌谱的细菌LBC-2。本试验利用对峙法初筛得到具有拮抗作用的菌株20株,复筛得到1株拮抗活性较高的菌株。通过菌体形态和菌落特征观察、生理生化试验和16S r RNA序列同源性分析,鉴定该菌为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。该菌的最适培养基组成为20 g/L蔗糖、30 g/L黄豆饼粉、0.5 g/L Ca Cl2、0.1 g/L Zn Cl2。最适培养温度37℃、最适培养p H值为7.5、最适培养转速为220 r/min、最适培养时间为40 h。并在此基础上进行了田间防治试验,细菌LBC-2菌剂的病指防效达到79.08%,对白菜黑斑病具有一定的防治作用。     

PhoR/PhoP双组分系统对枯草芽胞杆菌NCD-2菌落形态和芽胞形成的影响

 双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影响。在有机磷培养基上,NCD-2野生型菌株可以降解有机磷并且形成表面褶皱、立体结构较强的菌落形态,而phoR或phoP基因突变子丧失了降解有机磷的能力,菌落表面光滑、平坦。phoR和phoP基因突变子的互补菌株恢复到了与野生型相似的解磷能力和菌落形态。在低磷和高磷培养基中比较了NCD-2野生型及其衍生菌株的生长及芽胞形成情况,结果表明,在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株的生长速率没有差异,但在低磷培养基中,phoR和phoP基因突变子的菌体生长速率显著降低。芽胞形成能力测定结果表明,在低磷培养基中,NCD-2野生型菌株的芽胞形成率较高,而phoR和phoP基因突变子的芽胞形成率显著降低;在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株芽胞形成率普遍较低并且无显著差异。RT-PCR分析显示, phoR和phoP的突变均显著降低了芽胞形成相关基因spo II GA的表达,相比感应激酶PhoR,调控因子PhoP对spo II GA基因的影响更显著。     

PhoR/PhoP双组分系统对枯草芽胞杆菌NCD-2菌落形态和芽胞形成的影响

 双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影响。在有机磷培养基上,NCD-2野生型菌株可以降解有机磷并且形成表面褶皱、立体结构较强的菌落形态,而phoR或phoP基因突变子丧失了降解有机磷的能力,菌落表面光滑、平坦。phoR和phoP基因突变子的互补菌株恢复到了与野生型相似的解磷能力和菌落形态。在低磷和高磷培养基中比较了NCD-2野生型及其衍生菌株的生长及芽胞形成情况,结果表明,在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株的生长速率没有差异,但在低磷培养基中,phoR和phoP基因突变子的菌体生长速率显著降低。芽胞形成能力测定结果表明,在低磷培养基中,NCD-2野生型菌株的芽胞形成率较高,而phoR和phoP基因突变子的芽胞形成率显著降低;在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株芽胞形成率普遍较低并且无显著差异。RT-PCR分析显示, phoR和phoP的突变均显著降低了芽胞形成相关基因spo II GA的表达,相比感应激酶PhoR,调控因子PhoP对spo II GA基因的影响更显著。     

烟草浸提液对番茄晚疫病菌的化感抑制效应机理研究

为探究烟草对番茄晚疫病菌的抑制效果及作用机制，采用烟草根、叶浸提液对番茄晚疫病菌每代处理并连续培养多代，每一代测定菌落直径和致病力，以筛选获得弱毒菌株；在培养基条件下研究弱毒菌株的生理变化和菌体形态并进行转录组测序。结果表明，在连续8代烟草浸提液作用下，各处理病菌的菌落直径减小且致病力降低。其中PI-R处理第7、8代的病情指数<10，据此确定第8代PI-R处理为番茄晚疫病菌弱毒菌株PIAS-R。与CK菌株相比，PIAS-R菌株的孢子萌发率、生物量和细胞壁降解酶活性显著降低，菌丝体形态明显畸变。转录组分析表明，在PIAS-R菌株中分别有1086/1565个基因显著上调/下调；差异表达基因在44个GO功能条目和83条KEGG通路中得到富集。烟草通过抑制番茄晚疫病菌生理性状，破坏菌体形态结构，影响内部基因表达，导致其对寄主的致病力减弱。     

变棕溶杆菌OH23次生代谢产物抗菌活性的分析及其发酵培养基优化

本研究通过对变棕溶杆菌Lysobacter brunescens OH23菌株发酵产物的拮抗谱进行检测,发现其发酵产物对黄单胞属植物病原细菌具有特异拮抗活性,并且对水稻黄单胞菌不同菌株的拮抗活性存在差异。本研究进一步对OH23次生抗菌物质稳定性进行了分析,发现OH23产生的次生抗菌物质对高温、紫外光照、蛋白酶、非强碱性环境均表现稳定,但在强碱性环境(pH 11.0)下拮抗活性丧失。最后,采用单因素试验和正交试验设计对OH23发酵培养基组分进行了优化,最终确定OH23高产次生抗菌物质的培养基配方为高聚蛋白胨5 g/L、酵母粉5 g/L、可溶性淀粉6 g/L、FeSO_4·7H_2O 15 mg/L、ZnSO_4·7H_2O 5 mg/L。     

枯草芽孢杆菌B—903菌株的研究：Ⅲ.影响抗菌物质产生和积累的主？…

培养液的初始ＰＨ值直接影响Ｂ－９０３菌株的生长繁殖，从而对其抗菌物质的产生和积累产生重要影响。ＰＨ值小于５时，不利于细菌生产繁殖，。滤液中抗菌物质活必 ６～８时有利于细菌的增殖，抗菌活性亦最强。培养过程中供氧下菌体繁殖和抑菌活性呈正相关，而培养液初始接菌量高时可缩短抗菌物所出现的时间。基本的物质的初步筛选试验证明：大米粉、豆饼粉、麦麸、酵母粉和ＣａＣＯ３及ＫＨ２ＰＯ４是发酵 中最佳的营养物质，可满     

新疆沙漠放线菌XSS040811菌株抗生素合成条件

放线菌XSS040811菌株是从新疆吐鲁番鄯善县沙漠中采集的样品中分离获得的,该菌株能产生抗菌活性较高的抗生素,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黄曲霉具有不同程度的抑制作用;优化发酵培养基,发酵时间、pH条件对放线菌XSS040811菌株合成抗生素的影响。结果表明:发酵培养基A、发酵时间96 h、发酵温度30~35℃,pH值7.2~8.0为抗生素合成的最佳条件。根据该菌株在高氏I号和燕麦粉培养基上的生长特性、菌落和形态特征,初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)。     

莫海威芽胞杆菌D50产抗菌脂肽培养基优化

莫海威芽胞杆菌B. mojavensis D50是一株对多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防菌株,前期研究表明脂肽类化合物是其产生的主要抑菌物质。本研究采用抑菌圈法测定了菌株D50抗菌脂肽的稳定性,发现其脂肽粗提液在高温、非强酸强碱、紫外辐射的环境下都具有较高的稳定性。通过Plackett-Burman和Box-Behnken试验,测定了不同培养基成分对脂肽产量的影响,并对菌株D50产抗菌脂肽培养基进行了优化。结果表明,硫酸镁、葡萄糖、酵母浸粉是影响脂肽产量的关键性因素。优化后的培养基成分为葡萄糖15.45 g/L、牛肉膏3.00 g/L、酵母浸粉5.99 g/L、硫酸锰0.30 g/L、氯化钙0.30 g/L、硫酸铵2.00 g/L、硫酸镁0.16 g/L、磷酸二氢钾1.50 g/L和磷酸氢二钠2.00 g/L。培养基优化后,脂肽产量可达1.74 g/L,比优化前提高了167.70%。本研究明确了莫海威芽胞杆菌D50产生的抗菌脂肽对环境因子具有较高的稳定性,并获得了利于抗菌脂肽产生的培养基组分,为D50抗菌脂肽的大规模生产奠定了基础。     

胡萝卜软腐欧氏杆菌菌落变异型菌株在氯化三苯基四氮唑平板上的变色机理

 在含0.005%氯化三苯基四氮唑(TTC)的酪蛋白氨基酸-蛋白胨-葡萄糖(CPG)平板上,胡萝卜软腐欧氏杆菌苗落变异型菌株(简称EccM)生长差、菌落既小且白、而普通野生型菌株(Eccw)则为红而又大的菌落。
EccM的苗落特征与下列因素有关:①当以葡萄糖、果糖、蔗糖或其它相关的糖类为碳源时,EccM菌株产生的酸特别多,若培养基中加入碳酸钙、菌落周围可形成酸溶的透明圈;②CPG培养基的缓冲力很弱,只有KingsB的1/8-1/10,EccM生长后、培养基pH很快降到5.5以下,这是生长的pH下限值;③在pH<6时,菌体脱氢酶活性受到强烈抑制,还原TTC的能力明显减弱。
上述因素共同作用就使EccM在TTC平板上生长差,颜色白,与EccW很容易区别开。     

一株分离自德国小蠊的贵州绿僵菌的鉴定及生物学特性

从安徽省宣城市麻姑山林场采集到自然罹病的德国小蠊僵虫，通过分离纯化获得一株绿僵菌RCEF6416，采用显微形态和分子生物学相结合方法将该菌株鉴定为贵州绿僵菌。本试验研究了在不同培养基、盐浓度、pH以及高温胁迫等条件下，该菌株的培养特征及产孢能力，以期为世界性卫生害虫德国小蠊的生物防治提供种质资源和理论依据。结果表明：该菌株在PPDA培养基上的生长速度较快，菌落直径平均日增量为4.94 mm/d，但在PDA培养基上产孢量最大，为5.1×10⁷孢子/cm²；在一定范围内，随着盐浓度增加菌落直径日增量增加，但是产孢量逐渐下降，且菌落逐渐产生白色菌丝圈；当pH为8时，菌株生长速度最快，产孢量最大；高温对菌株孢子萌发率影响很大，当水浴温度为45℃处理4 h后，其孢子萌发率仅为2.6%。     

矮化核桃枝枯病病原菌的形态与分子鉴定

为了明确河南省洛阳地区核桃枝条一种新病害的病原种类,对采自田间的典型症状枝条进行了常规组织分离,对单孢菌株进行了形态鉴定、rDNA ITS序列分析及致病性测定。结果表明,病原菌在PDA培养基上菌落初为白色,随着色素的积累,由中心向边缘变为灰绿色,再变成墨绿色,最终全部变成黑色;气生菌丝棉絮毛状,菌落边缘不整齐,近圆形或不规则形。分生孢子器散生或聚生,呈黑色小粒状,分生孢子器球形或近球形,深褐色,具孔口;分生孢子梗短缺,无色,杆状,末端产生分生孢子;分生孢子梭形、纺锤形,无色,无隔,基部钝圆,顶部稍尖,单孢(24.5～29.0)μm×(4.8～7.5)μm。离体枝条接种结果表明,该菌能侵染核桃枝条引起与田间相同的症状。据此将分离物鉴定为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea。     

茶叶斑病病原菌茶拟盘多毛孢（Pseudopestalotiopsis theae）鉴定及生物学特性

从贵州省开阳县茶树叶部病害样品中分离纯化多个形态相似分离物,对其进行了菌落形态、子实体、产孢细胞和分生孢子等形态观察。依据内转录间隔区、部分28s大亚单位rDNA、翻译延伸因子1-α和微管蛋白基因,采用PAUP软件及最大简约法,进行了多基因系统发育树分析。在室内和自然条件下研究了代表性菌株AXLKY2019015对茶树叶片的致病性以及不同温度和pH等条件下该菌株的生长情况。结果表明,代表性菌株AXLKY2019015的菌落形态、子实体、产孢细胞和分生孢子等形态与茶拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsis theae)一致。多基因系统发育树分析表明,AXLKY2019015菌株与茶拟盘多毛孢(Ps. theae)的模式菌株MFLUCC12-0055在系统发育树上聚为一支,其自举支持率为100%。因此,初步确认菌株AXLKY2019015属于茶拟盘多毛孢(Ps. theae)。生物学特性研究表明,AXLKY2019015菌株在PDA培养基上生长最快,生长速率为(1.172 8±0.015 6)cm/d,显著高于OA和MEA培养基;在PDA培养基上最适生长温度为28℃,最适p H为7.0。致病性分析表明,AXLKY2019015菌株可在室内和自然条件下引起福鼎大白茶叶部产生病斑,符合柯赫氏法则。     

萎缩芽胞杆菌MQ19ST15鉴定及对甘蓝枯萎病的盆栽防效

为筛选用于甘蓝枯萎病的生防菌并明确其对病原菌的抑菌活性和盆栽防治效果,对从荒漠沙土中分离、筛选的细菌菌株MQ19ST15进行了对峙培养、抑菌活性物质测定、盆栽防效测定和种类鉴定。结果表明,菌株MQ19ST15能够显著抑制病原菌的菌丝生长,使菌丝出现膨大、变形扭曲及分支增多等畸变,抑菌率达54.95%。抑菌活性物质检测显示,该菌株能产生淀粉酶、蛋白酶、果胶酶及β-1,3-葡聚糖酶;抗菌脂肽物质合成相关基因扩增显示其基因组DNA中具有surfactin、iturin、fengycin和bacillomycin 4种抗菌脂肽物质的合成调控基因。盆栽试验结果显示,该菌株对甘蓝枯萎病的防控效果为53.03%。通过菌落形态、16S rRNA基因和gyrB基因序列分析将其鉴定为萎缩芽胞杆菌Bacillus atrophaeus。     

胡萝卜软腐欧氏杆菌菌落变异型菌株在氯化三苯基四氮唑平板上的变色机理

在含0.005%氯化三苯基四氮唑(TTC)的酪蛋白氨基酸—蛋白胨—葡萄糖(CPG)平板上,胡萝卜软腐欧氏杆菌苗落变异型菌株(简称EccM)生长差、菌落既小且白、而普通野生型菌株(Eccw)则为红而又大的菌落。EccM的苗落特征与下列因素有关:①当以葡萄糖、果糖、蔗糖或其它相关的糖类为碳源时,EccM菌株产生的酸特别多,若培养基中加入碳酸钙、菌落周围可形成酸溶的透明圈;②CPG培养基的缓冲力很弱,只有KingsB的1/8—1/10,EccM生长后、培养基pH很快降到5.5以下,这是生长的pH下限值;③在pH<6时,菌体脱氢酶活性受到强烈抑制,还原TTC的能力明显减弱。上述因素共同作用就使EccM在TTC平板上生长差,颜色白,与EccW很容易区别开。     

金氏B培养基在中国的改进

 金氏B (KB)培养基是荧光假单胞菌检测中应用最广泛的培养基,但是,其中有些有助荧光色素产生的成分在中国不易买到。我们将用国产蛋白胨、英国产胰蛋白胨和国产琼脂制备的金氏B培养基与用Difco的(月示)蛋白胨3号利琼脂制备的金氏B培养基进行了比较。6株荧光假单胞菌的试验结果表明,二者平板上生长情况没有明显差异,但是用国产蛋白胨(上海生物化学试剂)利琼脂粉(上海生化试剂)制备的金氏B平板上有90-100%的菌落没有荧光出现,而用英国产胰蛋白胨(oxoid)(20g/1)和国产琼脂(深圳)(15g/1)制备的金氏B平板上出现稳定而强烈的荧光,后者与用Difco试剂制备的金氏B培养基相比还能在非荧光菌株与荧光假单胞菌混合涂平板时稍微提高非荧光菌株的回收率。     

抗咯菌腈禾谷镰刀菌的紫外诱导及其生物学特性

为评估玉米茎腐病病原菌禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)对咯菌腈的室内抗药性风险,本研究通过室内紫外照射获得抗咯菌腈突变体,分析抗性突变体对咯菌腈的抗药性、遗传稳定性和生物学特性,及其对咯菌腈、戊唑醇、苯醚甲环唑、嘧菌酯的交互抗性。结果表明,经紫外照射5min,获得17株抗咯菌腈突变体,其对咯菌腈的EC50为72.78~290.09μg/mL,是亲本菌株的4 000~17 000倍;抗性突变频率为1.7×10-6,可稳定遗传;最适生长温度均为25℃,最适pH均为8,与亲本菌株相同;菌落生长速度低于亲本菌株;在含有0.9mmol/L NaCl的PDA培养基中培养的菌落形态与不含NaCl的PDA培养基中的相比,亲本菌株和4号抗性菌株色素沉积减少,而1号和16号抗性菌株色素沉积增加。推测禾谷镰刀菌对咯菌腈存在中等或高等的室内抗药性风险。室内抗药性测定表明抗性突变体对咯菌腈和苯醚甲环唑均产生了抗性。