国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

口蹄疫非结构蛋白抗体的检测情况分析

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病,已经给世界上很多国家的畜牧业带来了严重的经济损失.区分疫苗免疫抗体和感染抗体一直是防治口蹄疫的有效方法,本试验选某市12县区范围内选47个规模猪场;19个规模羊场、4个散养羊户;22个规模牛场;每个场户随机采集血清样品30份用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC间接ELISA抗体检测试剂盒进行检测,猪场场阳性率为4.26%,个体阳性率为0.35%;羊场场阳性率为31.6%,个体阳性率为2.63%;羊散养户户阳性率为50%,个体阳性率为1.67%;牛场场阳性率为9.09%,个体阳性率为0.30%.     

用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究

采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV-3AB)多肽为抗原，A／G蛋白-辣根过氧化物酶为酶结合物，过氧化氢-四甲基联苯胺为底物溶液，建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)，即3AB-ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测，确定了该I-ELISA的阳性/阴性判定临界值。该检测方法比VIAA-AGID法检出率高，尤其是采用A／G蛋白酶结合物后操作更简便。     

ELISA法检测牛口蹄疫免疫非结构蛋白抗体的试验研究

本实验采用间接ELISA方法检测牛口蹄疫病毒(FMDV)常规疫苗免疫牛的FMD抗体水平.实验采用引进的10头大通野血牦牛接种FND灭活疫苗15d 后抗体产生情况,确定了血清抗体产生效价的OD值,实际操作证明该方法简易、快速、灵敏度高.     

口蹄疫非结构蛋白研究进展

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的在偶蹄动物间传播的烈性传染病,大多数发展中国家采取免疫接种来控制该病或建立无疫区,如何区分自然感染动物和免疫动物一直是控制和消灭该病的重要问题。大量的比较研究一致认为,以FMDV非结构蛋白(non-structural protein,NSP)为抗原,检测动物体内的NSP抗体是一种很好的区分感染动物和疫苗免疫动物的诊断方法。但因疫苗中残留的NSP或非特异性应激因素亦可引起假阳性反应,许多国家特别是泛美地区普遍联合采用3-ABC-ELISA或酶联免疫电转印试验(Enzyme-Linked Immunoelectrotransfer Blot Test,EITB),并得到了OIE的认可,已成功应用于南美国家口蹄疫扑灭计划。     

口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体检测结果分析

随机选取猪、牛、羊场不同日龄动物血清,利用间接ELISA方法（3ABC-Ⅰ-ELISA）检测接种口蹄疫病毒疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况.结果发现临床健康动物也会产生3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高.这可能与日龄越大的动物在生长过程中感染口蹄疫的概率越大有关,或与多次疫苗免疫后导致产生非结构蛋白抗体有关.因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测适用于对口蹄疫疫情的初筛,且对日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物比较适用.     

口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒适用范围探讨

为了调查口蹄疫3ABC非机构蛋白抗体在临床诊断健康的动物体内是否存在,以及探索3ABC抗体检测试剂盒的适用范围,设计此试验。随机选取新乡市辖区范围内的猪场4个、牛场12个、羊场9个,采集动物全血,分离血清,利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA)和荧光PCR方法分别检测免疫过口蹄疫疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况和血清中口蹄疫病毒存在情况。结果发现,临床健康动物也会产生口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高。表明口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体不仅在野毒感染动物(包括隐性感染动物)体内产生,而且在健康动物中由于免疫频率的增加和免疫剂量的加大也会产生。因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒只适用于对口蹄疫疫情的初筛,且在日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物更加适用。     

四种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测猪血清样本的质量评估

[目的]对4种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行质量评估。[方法]用4种商品化的口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒,对非免疫无疫、免疫健康、免疫感染和非免疫人工感染4种类型猪血清样本进行检测,分析试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、分析敏感性、分析特异性及重复性。[结果]4种试剂盒的诊断敏感性在76.8%~94.4%之间,诊断特异性在97.7%~100%之间,分析敏感性和分析特异性较好。4种检测试剂盒与4种猪常感染疾病的阳性血清不发生反应。试剂盒的批间重复性为(10.545±6.845)%~(37.577±28.626)%;批内重复性为(9.037±6.075)%~(37.601±27.027)%。[结论 ]在实际应用中,需根据检测目的不同,选取相应的试剂盒。     

免疫层析试纸条检测口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的研究

为建立口蹄疫(FMD)快速检测方法,本研究以纯化的FMD病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC作为捕捉抗原.金标FMDV抗原作为金标试剂,建立了检测FMD NSP 3ABC抗体的胶体金免疫层析试纸条(ICS).应用FMD ICS试验与UBI FMD NSP酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对反刍动物、猪的FMD标准阳性血清的不同滴度进行测定,结果表明ICS在检测反刍动物血清时的检测下限(1:64)与ELISA(1:128)接近,而检测猪血清时的检测下限(1:8)低于UBI NSP-ELISA试剂盒(1:64).同时用ICS和UBINSP-ELISA检测313份牛血清和111份羊血清,结果ICS检测牛血清时的敏感性和特异性分别为81.81%和96.69%,检测羊血清时敏感性和特异性分别为88.88%和95.10%;ICS与UBI NSP-ELISA用于检测牛血清时符合率为95.52%,用于检测羊血清时的符合率为94.59%.结果表明ICS适合在基层单位或养殖场进行自行检测.     

Antibody Response in a Group of Swine After Infection with Foot-and-Mouth Disease Virus

Virus-neutralizing antibody and immunity after infection with foot-and-mouth disease virus was studied for 128 days in a group of swine. Antibody first appeared at 3 days, rose to peak levels between 7-10 days, and regressed to a plateau by 28 days. After 28 days, there was little change in mean antibody titres.

An attempt to reinfect 10 swine at 28 days was not successful. At 128 days, the immune status of 4 convalescent swine neutralized more than 4 logarithms of virus in an in vivo titration. However, in another group of 5 convalescent swine, one developed vesicular lesions when exposed to infected swine.

Efforts to demonstrate latent virus in one pig 128 days after infection were not successful.

     

通过检测非结构蛋白抗体评价口蹄疫疫苗纯度的研究

为探索通过检测非结构蛋白(NSPs)抗体的方法评价口蹄疫疫苗纯度的可行性,用不同纯化工艺制备口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗,重复免疫牛至少3次后,定期检测NSPs的ELISA抗体并统计分析抗体情况。结果显示,高度纯化疫苗组的NSPs抗体阴性率远高于普通纯化疫苗组,表明通过检测NSPs抗体评价口蹄疫疫苗纯度可以作为质量控制的一种方法。     

口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC在大肠杆菌中的高效表达

将牛源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)China／99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM-T-3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx-4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx-3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为59．1ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的31．4％。Western blotting分析证明表达产物能被FMDv阳性血清所识别。表达产物纯化后作抗原进行ELISA检测,结果表明,表达的蛋白显示特异的免疫学活性,并能区分自然感染动物和注苗动物。研究为以FMDV非结构蛋白为抗原,建立自然感染动物和注苗动物的鉴别诊断方法提供了材料。     

猪瘟疫苗免疫猪群中抗体水平的检测

应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ技术对猪瘟疫苗免疫猪群中的血清抗体水平进行了检测。共检测４个县的猪血样４８６份,检出血清抗体阳性４４９份,阳性率为９２．３９％,群体免疫保护率在８４．２４％～９４．２５％之间,群体均分值在８９．５～９８之间。     

猪瘟口蹄疫疫苗同步免疫的抗体监测

经过对赫章县野马川、六曲、朱明、妈姑、铁匠等乡镇的5个村1720头不同品种、年龄的健康猪血清进行实验室监测,结果表明,单独免疫注射一种疫苗(猪瘟疫苗或口蹄疫疫苗)的效果与分点同步注射猪瘟、口蹄疫疫苗的效果相一致,均能产生合格的免疫抗体,有效保护生猪不受外来猪瘟、口蹄疫病毒的野毒攻击.现以赫章县野马川新营村的监测情况为例介绍如下.     

实验性猪口蹄疫免疫病理形态学研究

选用健康仔猪13头,分成4组:健康对照组2头,健康攻毒组5头,免疫组和免疫攻毒级各3头。健康攻毒组经皮下注射猪口蹄疫病毒(FMDV);免疫组和免疫攻毒组均经皮下接种猪口蹄疫牛皮肤细胞弱毒苗(FMD-BC),观察1个月后,前者扑杀,后者再攻FMDV,1个月后扑杀。结果:健康攻毒组5头仔猪均出现口蹄疫(FMD)典型的临床症状和病现学变化,其淋巴结、脾脏不同程度的变性、坏死和出血,淋巴小结减少和缩小,淋巴细胞稀少,浆细胞呈坏死性变化,酯酶阳性(ANAE~ )细胞和次级淋巴小结均减少;免疫组未见任何FMD病理学变化,主要见全身各部位淋巴结及脾脏不同程度地增大,尤以肩前、髂下和脾门淋巴结更为显著,其淋巴小结显著增多、增大,淋巴细胞活化,大、中淋巴细胞增多,以过渡型和未成熟型浆细胞为主,ANAE~ 细胞和次级淋巴小结均增多;免疫攻毒组的变化与免疫组相似。     

5种商品化猪瘟疫苗免疫猪后的抗体水平监测比较

对国内几个市场占有份额量较大的猪瘟弱毒疫苗免疫接种仔猪展开血清抗体水平测定,比较不同生产厂家所生产的疫苗对猪群的两次免疫效果。随机选取30头日龄相同的猪瘟抗原检测为阴性的仔猪,于首次免疫后0、7、14、21、28、35 d和二次免疫后7、14、21、28、35 d采血,每头2 mL,共采血11次,总计330头份仔猪血样,按照IDEXX猪瘟抗体检测阻断ELISA试剂盒的中文操作说明书对待检猪血清进行检测,并分析阴性、阳性及其差异。结果表明,二免之前,5组试验组的抗体水平与对照组(生理盐水组)之间无显著差异(P0.05);二免之后,5组试验组的抗体水平与对照组(生理盐水组)之间差异显著(P0.05);5种商品化猪瘟弱毒疫苗免疫效果之间无差异显著(P0.05)。监测试验表明这5个厂家的疫苗质量合格。     

输入猪三种主要疾病的免疫抗体检测

用猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病抗体免疫金标试纸条,对途经运输环节进青的猪进行三种病免疫抗体检测。结果:猪瘟阳性率生猪为59%,仔猪为20.8%;猪蓝耳病生猪为1.2%,仔猪为0;猪伪狂犬病生猪为15.9%、仔猪为2%。说明生猪来源地抗体滴度总体不高,需加强免疫注射。     

凉州区猪瘟疫苗免疫抗体监测与分析

结合化验室每年的监测工作,从2007年~2009年,对凉州区辖区内的95个规模养殖场和41个散养户的1 342份猪血清进行了猪瘟疫苗免疫抗体的监测,监测结果显示,凉州区猪瘟防制成效显著,猪瘟疫苗免疫抗体水平有逐年提高的趋势,规模养殖户猪瘟疫苗免疫抗体水平高于散养户,免疫注射2次所产生的抗体效价明显高于免疫1次的,抗体监测工作的开展,对淘汰亚临床感染猪,考核免疫效果,制定科学合理的免疫程序提供了科学的依据,有效防止猪瘟的发生,为凉州区养猪业的稳定发展发挥了积极作用。