蓝舌病病毒在细胞内生长特性和在抗原快速纯化中的应用

为了解决原来蓝舌病病毒抗原提取中,步骤繁琐效率低的特点,研究了一种高效提取蓝舌病病毒抗原的方法。进行了蓝舌病病毒在细胞内生长特性的研究,采用酶染色等方法对不同接种量、不同培养时间的细胞内病毒含量进行测定,发现可以在感染细胞未产生病变前收获细胞,通过简单加工获得高浓度的病毒抗原。该方法快速高效,适用于蓝舌病的抗原生产,用于蓝舌病C—ELISA以及琼脂扩散实验中。该方法可推广用于其它病毒的纯化中。     

鉴别蓝舌病野毒感染ELISA检测方法的建立与初步应用

利用原核表达系统表达并纯化获得蓝舌病病毒NS3蛋白。以NS3重组蛋白作为包被抗原,经过对包被浓度、样品稀释度以及二抗工作浓度和作用时间等一系列条件的优化,建立了一种鉴别蓝舌病野毒感染的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1∶1 280,批内、批间变异系数均小于10%,具有良好的重复性。与商业化的蓝舌病试剂盒对比检测的结果显示,两者的蓝舌病阳性样品符合率为100%,本试验建立的间接ELISA方法可以区分蓝舌病自然感染和疫苗免疫动物。     

用抗蓝舌病非结构蛋白NS_1的单克隆抗体的竞争ELISA检测抗NS_1抗体

制备针对蓝舌病病毒最大的非结构蛋白NS；抗体。此抗体在绵羊感染蓝舌病病毒10天后即可检出，而接种蓝舌病灭活疫苗的绵羊体内检测不到此抗体，说明NS；的产生与病毒在动物体内繁殖有关。研究同时证明抗蓝舌病NS；的单克隆抗体不与其他环状病毒（如鹿流行性出血病病毒）的NS；抗体竞争，表明本方法具有群特异性。本方法除可检测灭活疫苗是否完全灭活外，还可检测免疫动物感染强毒后病毒的体内繁殖情况，评价疫苗的保护性能。如果广泛应用灭活BTV疫苗，本方法还可用于区S临疫动物和自然跷染动物。用抗蓝舌病非结构蛋白NS_1的单克隆抗体…     

小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用

旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%～100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。     

西藏那曲地区蓝舌病血清流行病学调查

为了解那曲地区牛羊蓝舌病的流行情况,从双湖、尼玛、嘉黎、安多和聂荣等5个县采集羊血清样品904份、牛血清样品739份,应用ELISA抗体检测法对蓝舌病进行血清学调查。在被检的904份羊血清中,检出阳性样品8份,平均阳性率为0.88%,在牛血清中未检测出阳性样本。调查结果表明那曲地区羊群中存在蓝舌病病毒的感染。     

四川省美姑县羊蓝舌病病原分离鉴定

对采自四川省美姑县的疑似蓝舌绵羊、山羊血清１４份,全血１３份,进行蓝舌病抗原、抗体检测和病毒分离鉴定。结果在１０份血清样品中检测到蓝舌病抗体,在１３份全血样品中分离到２株病毒,经蓝舌病病毒群、血清型鉴定,分离毒株的血清型为ＢＴＶ－１型。     

蓝舌病病毒荧光定量RT-PCR检测技术

蓝舌病是一种侵害反刍动物的虫媒传染病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizooties,OIE)列为上报疾病,我国将其列为一类动物疫病.本研究利用计算机软件分析获取蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)核酸检测的保守靶序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BTV荧光定量RT-PCR技术,进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价,并对动物样品进行检验.结果显示,该技术可有效检出不同血清型BTV,与流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)无交叉反应;对RNA标准品的检测灵敏度为102 copies;重复检测CV<5%,可对动物样品进行有效检测.因此,所建立的BTV TaqMan/荧光定量RT-PCR技术可为蓝舌病诊断提供一种快速、可靠的病原检测手段.     

蓝舌病疫苗国内外研究进展

蓝舌病是反刍动物的一种非接触性传染病,主要发生于绵羊,在该病流行地区,于发病季节前接种蓝舌病疫苗可有效预防该病。总结了目前国内外蓝舌病弱毒疫苗、灭活疫苗、病毒样颗粒及重组疫苗的研究进展。以期为相关研究提供参考。     

蓝舌病16型病毒核心样颗粒的获取与鉴定

为了制备一种新型基因工程疫苗BTV-16 VLP疫苗,将蓝舌病病毒16型VP3与VP7基因片段插入杆状病毒双表达载体pFastBac Dual质粒中,通过转染Sf9细胞,同时表达VP3与VP7蛋白。经负染后电镜观察到有与蓝舌病病毒形态相似的核心样颗粒,表明蓝舌病VP3与VP7蛋白能自主组装形成核心样颗粒,并通过Western Blot试验验证该核心样颗粒与蓝舌病病毒具有相同的抗原性。因此本研究成功构建出16型蓝舌病病毒核心样颗粒,为病毒样颗粒装配打下了基础,为制备16血清型BTV VLP疫苗做好前期准备。     

蓝舌病的研究进展

蓝舌病是由蓝舌病病毒以库蠓作为传播媒介引起的一种主要侵害家饲和野生反刍兽的传染病。目前,蓝舌病病毒有26个血清型分布世界各地,且型与型之间不发生交叉免疫,主要感染绵羊、山羊、牛、鹿等反刍兽,可引起不同程度的临床症状,甚至导致反刍兽死亡。检测蓝舌病病毒的方法有很多种,主要以血清学及分子生物学为主。文章综述了蓝舌病的流行分布情况、病原特性、传播媒介、发病机理与临床症状、诊断技术与疫苗等方面的研究进展。