山羊卵母细胞的体外成熟和受精

在有颗粒细胞，促卵泡素，促黄体素及１７β雌二醇存在的情况下，裹着卵泡卵丘细胞的山羊卵母细胞的体外成熟。从直径２－６ｍｍ的卵泡中获得的卵母细胞，有８６％成熟分裂；而直径为１－２ｍｍ的留言簿包，只有２４％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵丘母细胞复合体，培养前在２０℃下处理，结果有１１．５％的卵母细胞出现不正常的减数分裂的纺缍体。     

影响山羊卵母细胞体外成熟的因素

就影响山羊卵母细胞体外成熟的主要因素,如卵母细胞的来源、成熟液系统和成熟时间等进行概述。     

山羊卵母细胞体外成熟的研究

在38℃和39℃不同温度条件下培养山羊卵母细胞,结果表明:在38℃和39℃下成熟率分别为63.6%和57.3%,二者之间差异不显著,说明只要培养温度在山羊正常体温的变动范围内,对其卵母细胞的成熟率没有影响;在38℃温度条件下用10?S的M199培养液成熟率为62.5%,而10 mg/ml BSA的M199培养液成熟率为58.7%,二者之间差异不显著,说明无血清培养可以代替血清培养.     

山羊卵母细胞体外成熟培养液体积筛选

研究在一定卵丘-卵母细胞复合体(COCs)与培养液体积比例条件下,不同体积的培养液对山羊卵母细胞体外成熟的影响。按照COCs 1枚/4μL培养液的比例,采用5种不同体积的培养液,即50,100,250,500和1 000μL,对山羊卵母细胞进行体外成熟培养和孤雌激活。结果:100μL和250μL两组的卵母细胞体外成熟培养24 h后,其卵母细胞成熟率分别为78.10%和74.62%,差异不显著(P>0.05),但高于50μL组(P<0.05)、500μL组(P<0.05)和1 000μL组(P<0.01)组。100μL组孤雌激活胚胎的卵裂率(68.37%)、桑葚胚率(48.78%)和囊胚率(27.61%)都优于其他各组,其卵裂率和囊胚率与250μL组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明采用COCs 1枚/4μL培养液的比例条件下培养卵母细胞,宜选用100～250μL范围内的培养液体积进行卵母细胞成熟培养,其卵母细胞体外成熟率可以达到78.10%左右。     

构筑山羊卵母细胞体外成熟体系的研究

通过探讨不同浓度的FSH、LH及HMG对山羊的卵母细胞体外成熟体系影响因素,构筑山羊的卵母细胞的体外成熟体系,为山羊核移植及以后的优良育种奠定基础。     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究

通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液＋5％FCS＋40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2％（12／603）。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率（0／12）。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81％（47／58）生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16．4％（9／55）产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16－18d卵母细胞退化率明显增高（P＜0．01）。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。     

温度、无血清培养对山羊卵母细胞体外成熟的影响

在38℃和39℃不同温度条件下培养山羊卵母细胞,成熟率分别为63．6％和57．3％,差异不显著,说明只要培养温度在山羊正常体温的变动范围内,对其卵母细胞的成熟率没有影响。10 mg/mL BSA代替10％FCS培养山羊卵母细胞成熟率为58．7％,对照组为62．5％,差异不显著,说明无血清培养可以代替血清培养。     

不同繁殖季节山羊卵母细胞体外成熟及受精效果研究

本试验在2012年11月至2013年5月间进行,笔者从荣昌屠宰场采集了重庆本地黑山羊的卵巢,对于非繁殖季节（冬）和繁殖季节（春）期的卵巢卵母细胞的回收情况作了比较,并观察了不同级别卵母细胞的体外成熟和体外受精情况.结果表明：繁殖季节的卵巢平均回收COCs数、可用COCs数和COCs可用率分别为5.43枚、2.65枚、48.57％,均较非繁殖季节高（P＜0.05）;A、B、C、D级卵母细胞体外成熟率的差异极显著（P＜0.01）,但A、B、C级卵母细胞体外成熟（IVM）卵的体外受精率、卵裂率无显著性差异（P＞0.05）.     

影响山羊卵母细胞体外成熟和受精的因素

卵母细胞体外成熟作为胚胎体外生产技术的开始步骤,具有非常重要的作用。卵巢卵母细胞体外成熟的情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率。而卵母细胞的体外成熟和受精是在众多因素共同作用下完成的,当其中任何因素发生     

牛卵母细胞体外成熟的研究进展

牛在大多数情况下一胎一仔，自然双胎的概率很小。其根本原因在于：牛的卵巢大多数情况下每次只排1个卵，因而可能有一个胚胎产生，这极大地影响了牛的繁殖性能。而通过牛卵母细胞体外成熟技术能获得较多的卵子，与体外受精技术的相结合，大大提高了牛的繁殖性能，近年来人们对牛卵母细胞体外成熟进行了不断研究，并取得许多新的进展，笔者就此作了综述。     

血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

试验研究了清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明：（1）培养24h，添加PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组（P＜0．05），而培养到27h，2者成熟率之间差异变得不显著，说明添加PMSG卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响，但加速了卵母细胞核的成熟进程；（2）M199＋BSA培养27h，卵母细胞核成熟率显著高于培养24h，而M199＋FCS培养27h与培养24h的成熟差异不显著，说明添加BSA时，卵母细胞核体外成熟速度比添加FCS的慢；（3）卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第1极体形态无统计学差异，说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展；（4）山羊的卵丘扩展产不依赖于卵母细胞；（5）将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的COC分开培养发现，2者卵母细胞核成熟度无明显差异，带有壁颗粒细胞的COC卵丘扩展情况明显优于一般COC。     

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38~39℃,5%CO2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

海狸鼠卵母细胞体外成熟培养初探

实验用ＰＭＳＧ或ＰＭＳＧ＋ＨＣＧ处理或未经激素处理的海狸鼠８只，共获卵巢卵母细胞１３８枚。激素处理对获取卵巢卵母细胞的数量没有影响，而对体外成熟发育至卵丘扩展和半成熟阶段有促进作用。三种不同培养液（Ｗｈｉｔｅｎ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＨＣＧ＋ＦＣＳ）共培养１２５枚卵母细胞，培养后卵丘扩展率及半成熟率分别为５６．５％，４５．７％，４７．６％和２１．７％，１２．３％，９．５％，以Ｗｈｉｔｅｎ液较高（分别为５６．５％和２１．７％），但只有ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ组有２枚卵母细胞出现第一极体。结果表明海狸鼠卵母细胞与其它啮齿动物的卵母细胞一样，能够在体外培养成熟，完成第一次减数分裂，排出第一极体     

小鼠卵细胞体外成熟培养及孤雌激活

[目的]利用小鼠卵母细胞体外成熟培养及3种激活方法（乙醇激活、氯化锶激活、乙醇-氯化锶激活）对小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。[方法]小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得3级未成熟卵母细胞．在成熟培养液（M199100mL＋丙酮酸钠2．2mg＋抗100IU／mL＋LH2IU／mL＋FCS10％）中对小鼠未成熟卵细胞进行体外成熟培养,获得的成熟卵母细胞分别在乙醇、氯化锶、乙醇一氯化锶不同激活剂中激活,[结果]A级卵母细胞成熟率为79％．B级卵母细胞成熟率为70％,C级卵母细胞成熟率为55％。A级卵母细胞使用氯化锶激活率可达80．0％,为最佳方法。[结论]A级卵母细胞成熟培养效果最好。孤雌激活氯化锶激活效果高于乙醇．．     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关物理性因素

猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点,猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键,有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。     

山羊体外受精技术的研究进展

本文主要阐述了山羊体外受精技术,特别是山羊卵母细胞的采集和体外成熟,体外受精以及胚胎培养过程中的一些研究进展,及其山羊体外受精技术的非常广阔的前景。     

无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的初步探讨

主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养（M1）,与卵丘细胞单层共培养（M2）,用未扩展的卵丘细胞块包围培养（M3）,与扩展的卵丘细胞团共培养（M4）和用卵巢组织包围培养（M5）。无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟培养24 h后检查第一极体（PB1）排出率,随后对这些卵母细胞进行孤雌激活,评定其成熟质量。结果发现,M4组的第一极体排出率明显高于M1组和M5组,其它各组间没有显著差异（P〉0.05）;M5组的孤雌激活卵裂率显著低于M1组和M4组（P〈0.05）,而与M2组和M3组没有显著差异（P〉0.05）,但M3和M4两组的囊胚发育率显著高于M1组和M5组（P〈0.05）。这些研究结果表明：（1）未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟,但与卵丘细胞单层共培养没有作用;（2）卵巢组织包围培养不利于水牛卵母细胞的体外成熟。     

绵羊卵泡卵体外成熟的研究

本研究主要探讨了不同激素、卵母细胞形态及入培前时间对绵羊卵泡卵体外成熟效果的影响.结果表明:卵母细胞在添加FSH LH(均为10IU/mL)、HCG(4IU/mL)及不加激素的m—TCM199 10％FCS(V/V)培养液中培养24h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为87.68％、96.00％和42.11％;卵母细胞的形态是影响其成熟的重要因素,A、B、C三级卵培养24h后的成熟率分别为91.77％、57.10％和25.84％,入培前时间间隔为2、4、8h时,其成熟率分别为80.24％、77.42％和 77.83％,相互间差异不显著(P>0.05).     

山羊卵母细胞体成熟培养条件的研究

从山羊屠宰场收取卵母细胞，置于39％、5％CO2的培养箱中，作24小时体外成熟培养。在含10％犊牛血清(FCS)的成熟培养液里分别添加0％、20％~N卵泡液，试验结果表明，成熟卵母细胞率分别为54．5％、66．7％，差异不显著。在成熟培养液里添加不同血清，即10％犊牛血清(FCS)和羊血清(NGS)，试验结果表明，成熟卵母细胞率分别为54．5％、65.4％，差异不显著。