3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

转mtlD基因早稻的耐盐性研究

利用基因枪转化技术将来源于大肠杆菌的mtlD(1-磷酸甘露醇脱氢酶)基因导入旱稻。研究结果表明：旱稻愈伤组织的继代时间对抗性愈伤的筛选频率无明显影响；基因枪轰击后愈伤组织的恢复时间(≤7d)较长时，潮霉素B质量浓度应适当提高。转基因植株及其后代的PCR，dot blotting，southern blotting和northern blotting检测表明，mtlD基因已整合到旱稻基因组中，并且稳定表达。在含1．096(质量分数，下同)NaCl的MS培养基上，转基因植株生长速率明显大于阴性对照；在含0．75％ NaCl的盆中，转基因植株能够生长。盐分对转基因植株质膜的伤害减轻，Na^ 向地上部运输受抑，转基因植株的Na^ 与K^ 比率低于阴性对照。T1代转基因旱稻耐盐和盐敏感以及抗潮霉素B和潮霉素B敏感的分离比例均大于3：1，说明基因枪轰击为多拷贝转化。     

卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

甘薯愈伤组织分化及抗生素耐受性研究

为研究不同甘薯品种愈伤组织对抗生素的耐受性,以及在不同激素配合使用时的分化情况,为甘薯转基因工程奠定基础,将不同浓度的羧苄青霉素、卡那霉素和潮霉素以及不同浓度和组合的NAA、BAP和2,4-D添加到MS培养基,接种不同来源的甘薯愈伤组织并进行观察.不同甘薯品种对3种抗生素耐受性表现出一定差异,在较低羧苄青霉素浓度(100mg/L)的MS固体培养基中,所有品种愈伤组织生长良好.在较高羧苄青霉素浓度(≥500 mg/L)的MS固体培养基中,南薯99和绵粉7号表现出较强的抗生素耐受性.NAA(0.1 mg/L)与较高浓度BAP(≥1.0 mg/L)配合使用,不同品种愈伤组织分化率为100%,较低浓度BAP(0.1 mg/L)与不同浓度NAA配合使用,分化率极低.     

培养基成分对山参愈伤组织增殖生长的影响

以从野山参根中诱导的愈伤组织为材料,研究MS培养基浓度、总氮和蔗糖浓度及水解酪蛋白浓度对愈伤组织增殖生长的影响.结果表明,愈伤组织在1.0和1.5 MS培养基中生长良好,当MS培养基中的总氮浓度为60 mM时,有利于野山参愈伤组织生长.MS基本培养基中加入蔗糖30 g/L和CH 1.0 g/L时,提高野山参愈伤组织鲜重、干重及增殖系数的增加.     

稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织的影响

以生产上大面积推广的杂交水稻恢复系蜀恢527和西南科技大学自育优质高产杂交水稻恢复系“2330”为材料．研究目前四川地区的稻瘟优势菌株稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导、生长和分化的影响。结果表明,在优势稻瘟菌株A2中,随着稻瘟菌粗毒素浓度的提高．水稻愈伤组织的诱导率和分化能力显著降低,“2330”的最低诱导率为16．7％,蜀恢527只有12、5％：愈伤组织的致死率随毒素浓度的提高而增加．其最高致死率达到100％。在混合毒素培养基中粗毒素浓度为30％的处理选择效率较合适．但是增加毒素浓度可以进一步提高选择效果和提高得到抗性突变苗的几率。     

金花茶花丝愈伤组织培养及其对抗生素敏感性研究

利用金花茶幼嫩花蕾进行体外培养,建立了花丝愈伤组织培养体系。试验结果表明:外植体表面消毒70%乙醇浸泡的适宜时间为10 min;花丝愈伤组织诱导和增殖培养的适宜培养基为MS+TDZ 0.5mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+30 g/L蔗糖(pH 5.8),培养条件为25(±1)℃黑暗。卡那霉素和潮霉素对愈伤组织诱导和增殖培养的影响结果表明,卡那霉素100 mg/L或潮霉素30 mg/L导致花丝外植体全部褐化死亡;卡那霉素75 mg/L或潮霉素20 mg/L能抑制愈伤组织从花丝外植体上产生;卡那霉素100 mg/L或潮霉素25mg/L则能完全抑制愈伤组织的增殖并导致最终褐化死亡。     

葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。     

抗生素对剑麻愈伤组织生长和植株再生的影响

研究卡那霉素、潮霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对剑麻愈伤组织生长、不定芽分化及生根的影响,并确定抑制农杆菌生长的头孢霉素、羧苄青霉素的质量浓度。结果表明:潮霉素明显抑制剑麻愈伤组织生长和不定芽分化,卡那霉素次之,头孢霉素和羧苄青霉素相对较小;4种抗生素均能抑制剑麻生根,其抑制效果依次为头孢霉素>卡那霉素>羧苄青霉素>潮霉素。头孢霉素和羧苄青霉素的浓度大于200 mg/L时,农杆菌生长完全被抑制。在筛选剑麻转化体时,卡那霉素和潮霉素的使用浓度分别以100、50 mg/L为宜,羧苄青霉素和头孢霉素的使用浓度均为200 mg/L。     

中华猕猴桃遗传转化受体系统的建立

以中华猕猴桃伏牛95-2的组培苗叶片为外植体,研究不同浓度生长调节剂对其愈伤组织、不定芽诱导和生根的影响及其对卡那霉素的敏感性,从而建立高效稳定的中华猕猴桃伏牛95-2的受体系统.结果表明,中华猕猴桃伏牛95-2的最佳愈伤组织及不定芽诱导培养基为MS+ 1.0 mg/L ZT+0.3 mg/L NAA,在此培养基条件下,其不定芽分化率、每个叶盘不定芽的分化数均较高,分别为87.50％、4.2个;最佳生根培养基为1/2MS +2.0 mg/L NAA,生根率达100.00％.当卡那霉素浓度大于10 mg/L时,能够明显抑制愈伤组织的生长,且随着浓度的增加,愈伤组织死亡率逐渐增大;当卡那霉素浓度为20 mg/L时,愈伤组织及不定芽的分化率均为0,因此20 mg/L卡那霉素浓度为中华猕猴桃伏牛95-2叶片遗传转化的最佳筛选浓度.     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

银杏不同组织器官及愈伤组织培养中端粒酶活性测定

为了研究端粒酶在植物细胞分裂中的作用,探讨端粒酶活性与细胞分裂能力的相关性,本研究以银杏为材 料,通过改良的TRAP 法分别测定了银杏不同组织器官(种胚、叶片、小孢子、愈伤组织)的端粒酶活性,研究发现具 有旺盛分裂能力的愈伤组织具有较高的端粒酶活性。同时以银杏的成熟种胚为材料,采用培养基MS + 1.0 mg/L 6-BA +2.0 mg/L NAA 诱导出银杏的愈伤组织并采用培养基MS + 1.0 mg/L 6-BA + 2.0 mg/L NAA + 0.3 mg/L 2,4- D +0.2%活性炭进行继代,检测不同代银杏愈伤组织的端粒酶活性,发现不同代愈伤组织均具有较高端粒酶活性。 初代愈伤组织的端粒酶活性较高,但愈伤组织继代初期端粒酶活性降低,而后缓慢升高,恢复并超越初代愈伤组织 水平后,端粒酶活性处于一个相对稳定的状态,表明愈伤组织继代培养后期细胞具有旺盛且稳定的分裂增殖能力。      

不同因素对油樟愈伤组织生长的影响

[目的]筛选油樟组培条件。[方法]以油樟带芽茎段为外植体,通过愈伤组织诱导率、污染率、褐变等指标研究无机盐、光照、抗生素等因素对愈伤组织生长影响。[结果]愈伤组织在2种培养基上均能明显增殖,且MS的培养效果好于1/2MS。由带芽茎段诱导的新生愈伤组织略带绿色。继代培养后,黑暗中诱导和培养的愈伤组织为淡黄色或白色,光照下培养的愈伤组织为褐色。愈伤组织诱导率和外植体污染率都随抗生素浓度的增加而降低,25～50mg/L的链霉素处理出愈率最高(60%～72%),污染率最低(0～15%),死亡率也最低(0)。在相同浓度下,使用链霉素外植体死亡率最低。[结论]MS培养基+25～50mg/L链霉素是油樟组培的最佳条件。     

不同抗生素对矮牵牛叶片培养的敏感性试验

[目的]探讨不同抗生素对矮牵牛叶片再生的影响。[方法]以开花前顶部新展开的矮牵牛叶片为外植体,接种于添加不同抗生素(卡那霉素、头孢唑林钠和潮霉素)的基本培养基MS+2.0μg/ml BA+0.2μg/ml NAA上,研究不同抗生素对叶片再生的影响。[结果]20 mg/L卡那霉素、5 mg/L潮霉素可明显抑制矮牵牛叶片愈伤组织的形成和不定芽分化,而头孢唑林钠在400 mg/L以上时才会对不定芽分化产生不良影响。[结论]为建立矮牵牛的遗传转化体系提供了试验参考。     

抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响

[目的]研究抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变的影响。[方法]以银杏的子叶为外植体,以MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 1.5mg/L为基本培养基,对外植体进行愈伤组织的诱导培养,研究银杏愈伤组织继代过程中,不同浓度Vc、柠檬酸、PA 3种抗氧化剂对愈伤组织培养褐变的影响。抗氧化剂对褐变的抑制效果以愈伤组织中叶绿素的含量来表示。[结果]3种抗氧化剂对抑制褐变的效果为:Vc>柠檬酸>PA;筛选出最佳抗氧化剂及其浓度为Vc 15 mg/L。[结论]抗氧化剂的类型及浓度在抑制银杏愈伤组织褐化过程中起关键作用。     

银杏幼胚培养的多因子正交试验研究

以MS为基本培养基,选用银杏幼胚为试验材料,采用L9(34)正交设计分析比较2,4-D(A因素)、6-BA(B因素)、酸水解酪蛋白(CH,C因素)3个因素及其组合对银杏幼胚愈伤组织诱导率、褐化率及生长量的影响。结果表明:2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+CH 500mg/L组合银杏的幼胚愈伤诱导率最高,为100%,同时该组合处理愈伤组织生长量也最大,增长倍数达8.11倍;而2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L组合褐化率最高,为60.3%。经直观分析、方差分析和主因素效应的多重比较后认为,3个因素中,2,4-D对银杏幼胚愈伤诱导率及褐化率的影响最大,极差分别为74.196和63.702;CH对银杏幼胚愈伤生长量影响最大,极差为2.148。银杏愈伤组织诱导及生长的培养基最优组合为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+CH 500mg/L。     

百合遗传转化受体系统的建立

以东方百合“索邦”(L ilium tenu if olium orien ta l‘Sorbonne’)的鳞片、再生形成的小鳞片和叶柄为外植体,进行了愈伤组织诱导、不定芽分化、潮霉素抗性筛选及生根研究。结果表明,3种外植体均可在培养基M S+0.5 m g/L NAA+0.4 m g/L 6-BA+90 g/L Sucrose+4.0 m g/L VB1中形成大量的愈伤组织,愈伤组织分化不定芽的最适培养基为M S+0.5 m g/L 6-BA,筛选的潮霉素质量浓度为20 m g/L,生根培养基为1/2M S+0.2或0.4 m g/L IBA+0.1%活性炭。     

凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究

目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织。方法 通过对基本培养基（B₅、MS和1/2MS）、外植体（茎段、顶芽和叶片）、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究。结果 B₅ 为最适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是最佳诱导愈伤组织的材料;最适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B₅+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;最佳继代培养基为B₅+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍。结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础。     

东北矮紫杉细胞悬浮培养的研究

对东北矮紫杉进行了愈伤组织的诱导,并建立了细胞悬浮培养系.研究表明,茎、叶均可诱导出愈伤组织,愈伤组织诱导培养基以MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋KT 0.1 mg/L为佳,愈伤组织继代培养基以B5＋2,4-D 2.0 mg/L＋KT 0.1 mg/L为佳.以嫩枝为外植体,愈伤组织的诱导率较高、状态较好,且较适于悬浮培养.悬浮培养的接种量2.0 g/瓶为最佳密度,细胞生长周期为20 d,对数生长期为10~16 d,细胞收获期为16 d.试验中还发现,聚乙烯吡咯烷酮是东北矮紫杉组培中解除培养物褐化的较好抗氧化剂,使用浓度为1mg/L.     

两种抗生素对阿拉巴马花烛植株再生的影响

花烛（Anthurium andraeanum Lind）是世界第二大热带盆栽花卉,其转基因育种具有巨大的应用前景。以 花烛为材料,研究不同浓度卡那霉素和潮霉素对阿拉巴马花烛植株再生的影响,结果表明;卡那霉素和潮霉素均能 促使外植体严重褐变死亡,同时,二者对愈伤组织和芽的诱导具有明显抑制作用;当以叶片或叶柄为转化受体时,选 择压以100 mg/L 卡那霉素或20 mg/L 潮霉素为宜;当以愈伤组织为转化受体时,选择压以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜;两种抗生素对生根亦具有抑制作用,选择压则以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜。