ELISA法检测牛口蹄疫免疫非结构蛋白抗体的试验研究

本实验采用间接ELISA方法检测牛口蹄疫病毒(FMDV)常规疫苗免疫牛的FMD抗体水平.实验采用引进的10头大通野血牦牛接种FND灭活疫苗15d 后抗体产生情况,确定了血清抗体产生效价的OD值,实际操作证明该方法简易、快速、灵敏度高.     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

3A蛋白间接ELISA试验检测猪口蹄疫感染抗体的研究

用表达的口蹄疫3A蛋白作为包被抗原，建立了间接ELISA试验，对口蹄疫病毒感染血清、免疫血清和其它非口蹄疫病毒血清进行了检测研究。结果表明，3A蛋白间接ELISA试验对口蹄疫具有较好的特异性，可以区分感染口蹄疫病毒的猪血清和疫苗免疫猪血清。     

四种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测猪血清样本的质量评估

[目的]对4种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行质量评估。[方法]用4种商品化的口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒,对非免疫无疫、免疫健康、免疫感染和非免疫人工感染4种类型猪血清样本进行检测,分析试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、分析敏感性、分析特异性及重复性。[结果]4种试剂盒的诊断敏感性在76.8%~94.4%之间,诊断特异性在97.7%~100%之间,分析敏感性和分析特异性较好。4种检测试剂盒与4种猪常感染疾病的阳性血清不发生反应。试剂盒的批间重复性为(10.545±6.845)%~(37.577±28.626)%;批内重复性为(9.037±6.075)%~(37.601±27.027)%。[结论 ]在实际应用中,需根据检测目的不同,选取相应的试剂盒。     

口蹄疫非结构蛋白抗体的检测情况分析

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病,已经给世界上很多国家的畜牧业带来了严重的经济损失.区分疫苗免疫抗体和感染抗体一直是防治口蹄疫的有效方法,本试验选某市12县区范围内选47个规模猪场;19个规模羊场、4个散养羊户;22个规模牛场;每个场户随机采集血清样品30份用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC间接ELISA抗体检测试剂盒进行检测,猪场场阳性率为4.26%,个体阳性率为0.35%;羊场场阳性率为31.6%,个体阳性率为2.63%;羊散养户户阳性率为50%,个体阳性率为1.67%;牛场场阳性率为9.09%,个体阳性率为0.30%.     

猪口蹄疫免疫抗体两种不同ELISA检测方法的比较

将5个规模化养猪场各20份猪血清样本分成5组用两种不同ELISA检测方法进行FMD免疫抗体检测,采用液相阻断ELISA方法检测的抗体合格率为63%,采用间接ELISA方法检测的抗体合格率为77%,两者差异显著。试验结果表明:(1)液相阻断ELISA的检测合格率明显低于间接ELISA的检测合格率;(2)运用液相阻断ELISA方法评价FMD免疫质量(不加强免疫),难以达到农业部所定标准,解决的最佳途径就是做好口蹄疫疫苗的强化免疫工作。     

口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒适用范围探讨

为了调查口蹄疫3ABC非机构蛋白抗体在临床诊断健康的动物体内是否存在,以及探索3ABC抗体检测试剂盒的适用范围,设计此试验。随机选取新乡市辖区范围内的猪场4个、牛场12个、羊场9个,采集动物全血,分离血清,利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA)和荧光PCR方法分别检测免疫过口蹄疫疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况和血清中口蹄疫病毒存在情况。结果发现,临床健康动物也会产生口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高。表明口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体不仅在野毒感染动物(包括隐性感染动物)体内产生,而且在健康动物中由于免疫频率的增加和免疫剂量的加大也会产生。因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒只适用于对口蹄疫疫情的初筛,且在日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物更加适用。     

应用ELISA试验检测猪瘟免疫抗体

猪瘟在我省流行比较严重，曾造成较大的经济损失，从1988年后全省采取每年春秋两防，并随时补针的免疫措施，使我省的猪瘟疫情得到了全面的控制。但是，我省由外地引入仔猪的猪瘟病例时有发生。为了掌握我省猪瘟免疫状况，海南省动物疫病诊断中心于2005年7月应用猪瘟ELISA试验方法在省内6个市县进行了猪瘟免疫抗体检测。     

口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体检测结果分析

随机选取猪、牛、羊场不同日龄动物血清,利用间接ELISA方法（3ABC-Ⅰ-ELISA）检测接种口蹄疫病毒疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况.结果发现临床健康动物也会产生3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高.这可能与日龄越大的动物在生长过程中感染口蹄疫的概率越大有关,或与多次疫苗免疫后导致产生非结构蛋白抗体有关.因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测适用于对口蹄疫疫情的初筛,且对日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物比较适用.     

牛口蹄疫免疫抗体水平检测与分析

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染性疫病,其易感动物多达70多种,主要以牛、猪、羊等偶蹄动物为主,发病率和死亡率均非常高,经济损失巨大,是目前危害养殖业健康发展的主要疫病之一.本文就简单概述牛口蹄疫免疫抗体水平检测与分析.     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

通过检测非结构蛋白抗体评价口蹄疫疫苗纯度的研究

为探索通过检测非结构蛋白(NSPs)抗体的方法评价口蹄疫疫苗纯度的可行性,用不同纯化工艺制备口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗,重复免疫牛至少3次后,定期检测NSPs的ELISA抗体并统计分析抗体情况。结果显示,高度纯化疫苗组的NSPs抗体阴性率远高于普通纯化疫苗组,表明通过检测NSPs抗体评价口蹄疫疫苗纯度可以作为质量控制的一种方法。     

牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%~9.8%和3.5%~10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。     

免疫猪群口蹄疫非结构蛋白抗体与免疫剂量的关系

为了鉴别免疫猪群3ABC抗体阳性猪是免疫动物受到病毒感染引起的,还是疫苗中残留的非结构蛋白引起的,通过检测免疫动物体内的3ABC抗体和病毒感染情况,探讨3ABC抗体的出现与免疫剂量的关系。选取60日龄保育猪20头,分成A、B、C、D 4个组,分别注射猪口蹄疫O型灭活疫苗(OS/99株)1、2、4、6m L/头。每组猪分别在免疫前1 d以及免疫后3、7、14、30和60 d,采集血清和鼻咽拭子,使用口蹄疫3ABC间接ELISA检测试剂盒、口蹄疫多重RT-PCR检测试剂盒以及病毒分离试验,检测3ABC抗体和病毒感染情况,发现保育猪在低剂量(1 m L/头或2 m L/头)免疫后没有检测到非结构蛋白抗体,而高剂量(4 m L/头或6m L/头)免疫后出现非结构蛋白抗体阳性率升高,而且出现非结构蛋白抗体阳性的动物中没有检出病毒感染或病毒核酸。检测结果提示这些免疫猪群非结构蛋白抗体的形成与免疫剂量有关。     

影响口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测实验结果因素的研究

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病的流行非常广泛,一旦感染,将会给畜禽养殖业造成极大的经济损失,甚至是灭顶之灾,后果严重。目前,有效的防制措施就是用口蹄疫疫苗对猪、牛、羊等易感动物进行免疫接种。动物经接种后所产生的免疫抗体水平的高低,直接关系到能否对动物进行保护的效果,这只能通过抗体水平的检测来判断。口蹄疫的液相阻断ELISA检测技术,是一种成熟的检测技术,是当前国际上认可的一种标准化的检测诊断技术,也是国际贸易中检测口蹄疫的主要手段。     

肉牛口蹄疫免疫抗体、3ABC抗体、RT-PCR核酸检测结果分析

[目的]为了掌握肉牛口蹄疫免疫抗体检测结果、口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测结果、口蹄疫O-P液RT-PCR核酸检测结果三者的相关性,[方法]张掖市动物疫病预防控制中心对甘州区28头肉牛开展相关检测。[结果]检测结果表明:O型口蹄疫免疫抗体合格率28份,合格率100%,3ABC抗体阳性27份,阳性率96.4%;对3ABC抗体阳性的27头牛分2次进行实时荧光RT-PCR核酸检测,被检的27头牛均为阴性。     

牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立

为建立牛口蹄疫(FMD)抗体的检测方法,本研究将口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因,通过pPROEXTM HTb表达载体在大肠杆菌DH5α中表达,获得大小为35ku的重组VP2蛋白(rVP2),western blot证实rVP2可与FMDV5种血清型的牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的rVP2为抗原建立了FMDVrVP2间接ELISA方法。重复性试验证实批内、批间变异系数均小于10%。特异性交叉试验表明,该抗原不与常见的其他7种牛病阳性血清发生交叉反应。检测非免疫无口蹄疫国家牛阴性血清的特异性为100%;检测感染血清敏感性为97.3%;检测O-AsiaⅠ的二价苗免疫牛血清,与4种商品化试剂盒比较,其符合率分别为69.0%、95.0%、90.4%和86.8%。实验结果表明建立的ELISA方法可以用于口蹄疫感染和免疫抗体检测。